中药骨碎补黄酮羧甲基衍生物制备方法和临床应用的制作方法[0002]骨质疏松症(OP)是以骨量减少、骨组织显微结构发生退行性改变为特征,导致骨脆性增加及骨折发生率增高的全身性疾病,其最大危害是并发骨折。资料表明,美国现有1500~2000万OP患者,每年约有600万人因骨质疏松而引起自发性骨折,其中近500万是绝经期妇女。一般认为,在我国50岁以内人群中,OP发病率为15%~50%,60岁以上老年人OP发生率为56 %,而并发骨折者高达12 %。目前全世界患OP总人数超过2亿,是位居第6位的常见病、多发病。因此,该病已越来越受到临床医生的重视。(冀依骨质疏松药物治疗概述【D】天津药学,2004,16 (2) =683-684.) 原发性骨质疏松症严重影响着绝经期妇女和老年人群的生活质量,对其常规治疗药主要有三大类,第一类为促骨矿化剂,包括钙剂和维生素D ;第二类为骨吸收抑制剂,涵概双膦酸盐,依普黄酮、雌激素或选择性雌激素受体调节剂,降钙素;第三类为骨形成促进荆,如氟化物.甲状旁腺激素等,三类药物在骨质疏松症亚型的治疗中各具优势,联合治疗相得益彰,成为临床应用的一线和首选药。但是这些药物价钱昂贵,而且有副作用。[0003]骨碎补(Drynariae Rhizoma)为水龙骨科植物槲蕨的干燥根莖,是著名的骨伤科常用中药。其性温,味苦归肾、肝经,具有疗伤止痛,补肾强骨,外用消风祛斑的功效。临床上用于治疗跌扑闪挫,筋骨折伤,肾虚腰痛,筋骨痿软,耳鸣耳聋,牙齿松动;外治斑秃,白癜风。据现代研究,骨碎补中的黄酮类化合物是其主要活性成分,有促进骨折愈合、防治骨质疏松、抗氧化、调血脂、抗炎、镇痛等生物活性。骨碎补的黄酮类化学成分4个化合物,分别为木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷、北美素、柚皮素、山奈酚。(陈宏斌,张东.骨碎补黄酮类活性化学成分的研究,陕西中医学院学报[j],2012,35 (5):96-97)
[0004]本发明的目的在于提供一种用于骨质疏松的治疗和预防的骨碎补黄酮提取物衍生物的制备方法。[0005]本发明的优点是制备方法制备简单,且易溶于水,治疗效果好,原料来源广,成本低廉,无副作用。[0006]本发明的目的可通过下述技术措施来实现:骨碎补-干燥-粉碎-乙醇提取-提取液离心过滤-减压蒸馏除去乙醇-浓缩-干燥-全乙酰化反应[0007]骨碎补黄酮的提取:骨碎补80°C干燥5h,取出粉碎成细粉,过80目筛,精密称取骨碎补粉末30g,加人300mL95 %乙醇,水浴回流,提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压蒸馏回收溶剂至少量,提取液经过减压浓缩,真空干燥后得到黄色固体,即为骨碎补黄酮提取物,收率约3%。[0008]骨碎补黄酮衍生物制备:
按每100g骨碎补黄酮加入200-250ml (2mol/L)的氢氧化钠液体和15g —氯乙酸混合均匀,35°C下搅拌0.5h ;然后按每100g骨碎补黄酮再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物,在70-80°C条件下搅拌反应3h,反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24h,得到骨碎补黄酮衍生物,生成物干燥。
[0009]所述的药物组合物,在制备促进人骨质疏松的治疗和预防中的应用。
[0010]为了进一步的验证本发明成品制剂的疗效,我们将上述具体制备方法中制备的药物进行了相应的动物试验,现将结果报告如下。 [0011]目的:探讨骨碎补黄酮衍生物对骨质疏松的治疗的影响,有效地开发中药骨碎补黄酮提供实验依据.[0012]方法:
[0013]动物分组及模型制备:取6月龄清洁级雎性SD大鼠30只。体重约261±12g。随机分为治疗组、对照组2组,每组15只大鼠。两组大鼠均于每日上午灌服维甲酸75mg/kg,连续灌胃15d造成骨质疏松模型。
[0014]给药方法:在大鼠造模的同时,实施灌胃给药,治疗组大鼠予骨碎补黄酮衍生物10mg/kg/d,对照组大鼠予灌胃等体积的生理盐水。续灌胃21d,并于最后一次给药后12h处死全部大鼠.[0015]标本采集与组织学处理:取大鼠股骨做组织学制备。每组标本随机抽取5个骨折断端进行脱钙石蜡切片。股骨用4% PFA加0.1M磷酸缓冲液调整PH值为7.2,室温固定3d。然后用20% EDTA加0.1M磷酸缓冲液调整PH值为7.2,浸泡8~IOd脱钙。再经系列乙醇脱水,石蜡包埋,沿股骨干长轴方向行厚度切成5 μ m厚片,行HE染色。随机取5张股骨片,分别在X 400奥林巴斯FV1000放大激光扫描共聚焦显微镜下观察。
[0016]结果与结论:
[0017]与对照组相比,模型组大鼠股骨骨小梁面积、平均骨小梁厚度、骨小梁密度显著降低,而髓腔质间隔宽度则明显增加;经过骨碎补黄酮提取物衍生物治疗后,治疗组大鼠股骨平均骨小梁密度,平均骨小梁厚度和骨小梁面积较模型组均显著上升,同时髓腔质间隔宽度明显下降;说明骨碎补黄酮衍生物能有效促进骨细胞生长,可治疗和预防骨质疏松,结果具有统计学意义(P < 0.01)。
[0018]
以下是本
的具体实施例,用于阐述本申请文件中所要解决技术问题的技术方案。
[0019]图1为治疗21d后模型组大鼠股骨病理片。模型组大鼠股骨骨小梁面积、平均骨小梁厚度、骨小梁密度显著降低,而髓腔质间隔宽度则明显增加(sp,400X)。
[0020]图2为治疗21d后治疗组大鼠股骨病理片。治疗组大鼠股骨平均骨小梁密度,平均骨小梁厚度和骨小梁面积较模型组均显著上升,同时髓腔质间隔宽度明显下降(SP,400 X) ο
[0021]实施例[0022]骨碎补黄酮的提取:骨碎补80°C干燥5h,取出粉碎成细粉,过80目筛,精密称取骨碎补粉末30g,加人300mL95 %乙醇,水浴回流,提取2次,每次2h,过滤,滤液合并,减压蒸馏回收溶剂至少量,提取液经过减压浓缩,真空干燥后得到黄色固体,即为骨碎补黄酮提取物,收率约3%。
[0023]骨碎补黄酮衍生物制备:按每100g骨碎补黄酮加入200_250ml (2mol/L)的氢氧化钠液体和15g—氯乙酸混合均匀,35°C下搅拌0.5h ;然后按每100g骨碎补黄酮再加入一氯乙酸20g与氢氧化钠20g的混合物,在70-80°C条件下搅拌反应3h,反应产物经浓缩后,用95%乙醇洗涤,沉淀24 h,得到骨碎补黄酮衍生物,生成物干燥。
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