专利名称：用于治疗真菌感染的含胆固醇的脂质体两性霉素的制剂的制作方法在免疫缺陷和具有免疫能力的患者中，由不同属的酵母真菌和皮肤真菌导致的全身性和局部真菌病上升的发病率仍是重要和未能充分解决的医学问题。导致的死亡率和令人担忧的增加的发病率引起重大关注。对于迄今所有已发现的药物，存在有限的治疗谱、不良的功效、适合的制剂的限制、药物不良反应和威胁生命的毒性的问题，并且经常存在上述问题的某些或全部的组合。多烯氨基糖苷类抗生素显示出最有希望的广谱和功效。但是， 大部分这些化合物的毒性妨碍了它们用作治疗剂。两性霉素B是唯一仍广泛用于临床的多烯大环内酯，尽管事实上，例如脱氧胆酸钠胶束悬浮液、脂质体、脂质络合物和脂质胶体分散体的多种制剂均不同程度地具有威胁生命的肾毒性。两性霉素B制剂的目的是去除肾毒性、使制剂稳定、确保低剂量的有效性和甚至在高剂量避免毒性和药物不良反应。存在大量的描述两性霉素B制剂的已授权/提交的专利和出版物。除了下文描述的4种制剂，没有其它制剂是可应用的，因为它们不能够使这类其它制剂充分成为肾脏/安全的。在所有已知的两性霉素B制剂中，组分选自磷脂/脂质和稳定剂的大量选择。由于已知两性霉素B在盐水中沉淀，没有制剂浸于盐水中。1.常规两性霉素B 在5%葡萄糖中的两性霉素B-脱氧胆酸盐胶体悬浮液，功效33% 肾毒性67%两性霉素B不溶于水性介质。在20世纪50年代末期，如下最低限度地克服了该问题通过将两性霉素B溶解在脱氧胆酸盐中，配制成5 %的葡萄糖水溶液中的胶束悬浮液。 两性霉素B在NaCl中沉淀，因此在脱氧胆酸盐中的两性霉素B既不在NaCl中制备，也不在盐水中稀释。此外，将该悬浮液冻干以使制剂稳定。2.在5%葡萄糖中稀释的脂质体两性霉素B功效77% 肾毒性20%脂质体两性霉素B由在作为缓冲液的4. 5%蔗糖和琥珀酸二钠六水合物中的氢化大豆磷脂酰胆碱、双硬脂酰基磷脂酰甘油、胆固醇和α生育酚的组合组成，所述脂质体两性霉素B是经过对磷脂、留醇、膜稳定糖和它们的不同比例的大量组合进行选择得到的。尽管使用膜稳定蔗糖，还是将该制剂冻干以克服不稳定性。已报道该脂质体两性霉素B制剂在盐水中沉淀，因此严禁在盐水中稀释或接触盐水。美国专利4766046描述由于两性霉素B脂质体的尺寸和不稳定性，还不能制备和储存在若干周的保存时期内没有显著(几倍)尺寸增加的小-直径(diamater)两性霉素B脂质体。因此，由于不同的体内脂质体摄取和药物释放以及涉及脂质体尺寸的毒性性质，难以控制和评价储存的两性霉素B脂质体的治疗指数。当脂质体尺寸大于1-2微米时，尺寸不稳定性问题特别严重，因为包含胆固醇的两性霉素B脂质体实质上比更小、原始尺寸的脂质体更具毒性。迄今，仅仅通过在制备后不久给予特定尺寸的脂质体，才解决尺寸稳定性问题。在通常的临床环境中，这当然是不切实际的药物递送方法。3.在5%葡萄糖中稀释的两性霉素B脂质络合物功效34% 肾毒性63%该制剂由两性霉素B、合成的磷脂即二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油组成。在给药之前将水性悬浮液稀释于5%葡萄糖中。相对于常规两性霉素B，其功效和毒性性质均无改善。4.稀释于5%葡萄糖中的两性霉素B胶体分散剂功效46% 肾毒性40%将氨丁三醇、无水乙二胺四乙酸(edentate) 二钠和HCl乳糖一水合物与两性霉素 B和胆固醇基硫酸钠冻干。存在于两性霉素B脂质制剂中的葡萄糖显著地减少局部应用制剂的有益效果。暗示葡萄糖的抑制原理涉及由葡萄糖引起的高黏度或由葡萄糖引起的胶体颗粒的脂质/水界面上的变化(Crowe JH 等人 1988Biochim. Biophys Acta. 947 :367-384)。甚至最好的脂质体两性霉素B的治疗成功率(success)是77%，其不如(sub par)本发明。因此，在本发明中构思用盐水代替葡萄糖，其具有降低两性霉素B肾毒性的附加优势。根据众所周知的和记载的事实，盐水导致两性霉素B1—4的沉淀，独特地设计脂质组合物和脂质与药物的比率以确保在纳米脂质体中的两性霉素B被固定，以预防纳米脂质体药物的沉淀。发明目的本发明的目的是，提供在盐水悬浮液中被稳定的含有胆固醇的纳米脂质体新制剂，其具有降低的肾毒性。本发明的另一个目的是，提供在盐水悬浮液中被稳定的、含有胆固醇的纳米脂质体的新制剂，其具有增强的抗真菌活性。仍然是本发明的另一个目的是，提供在盐水悬浮液中被稳定的含有胆固醇的纳米脂质体的制剂，其非常稳定。本发明的另一个目的是，提供在盐水悬浮液中被稳定的含有胆固醇的纳米脂质体的新制剂，其毒性更低。仍然是本发明的另一个目的是，提供在盐水悬浮液中被稳定的含有胆固醇的纳米脂质体的新制剂，其中由于两性霉素B的高抗感染活性，所使用的两性霉素B的剂量是非常小的。另外本发明的另一个目的是，提供不同用途的新制剂，所述用途目的在于为了更高的抗感染活性优化更低的两性霉素B的剂量，以及进一步将肾/毒性最小化和例如静脉内、眼的和局部等多种用途的稳定的制剂。发明概述根据本发明提供了用于治疗真菌感染的新制剂，所述新制剂包含在悬浮液中含有胆固醇的纳米脂质体两性霉素B纳米脂质体。根据本发明，也提供了用于制备在盐水悬浮液中被稳定的含有胆固醇的纳米脂质体的新制剂的方法。发明详述在溶液中，浓度是单位体积溶剂中溶质分子的数量，所述溶剂在注射、灌注或其它液体剂型的情况下通常是含水的，而在包括混悬剂(例如胶体混悬剂)的颗粒制剂中，通过承载药物的颗粒的数量确定药物的有效浓度。这种载体是用于注射、口服或吸入、透皮等的脂质、蛋白质或其它生物可降解的载体和主要用于局部制剂的非生物可降解载体的不同纳米或微米尺寸的集合。在本发明中，纳米脂质体具有优化的脂质与药物的高比率，以增加每单位量药物含有药物的纳米脂质体的数量，并通过给药之前补充纳米化(nanof ication) 由此实现功效最优化。颗粒尺寸的脂质与药物的比率的优化基于本发明的新概念，该新概念为通过在制备后和给药前增加制剂中API载体颗粒的数量，以增加活性药物的有效浓度。这通过降低更多含有脂质的制剂的颗粒尺寸而实现。在制剂中，因为优化的脂质与药物的更高比率，存在更大数目的颗粒/mg药物。更多颗粒导致药物在体内更好/更高的分布。由于在悬浮液中存在更有效的药物浓度，存在更多数量的遍及身体均勻地分布的分子。这将减少所需要的治疗剂量。由于例如两性霉素B的API在更高剂量下具有毒性，通过降低API的需要，将自动减少对动物/患者的毒性并因此导致更安全的药物制剂。在颗粒制剂中的API包囊于载体颗粒的多个层中。疏水/亲脂药物维持插入在脂质纳米脂质体的脂质双层中，因此甚至当这类纳米脂质体分裂或破碎时所述药物不释放在水性体内环境中。包囊于脂质纳米脂质体中的这种药物从纳米脂质体的表面转移至靶细胞的表面。在这种情况下，包囊于纳米脂质体内层中的药物不用于治疗且停止通过网状内皮系统细胞被吞噬并从体内治疗链中退出。药物在内层中累积的包囊是纳米脂质体表面层上的数倍。如果多层纳米脂质体的所有层分离以形成新的小的多个纳米脂质体，包囊药物的内层将因此转化成纳米脂质体的外部暴露药物的层中，可以从逻辑上预期，在没有任何API 加入至该混合层制剂的情况下，药物的有效浓度将增加。通过在患者的床边使混合层微米和/或纳米脂质体经历超声分裂(disruption)，得到更高活性浓度以实现更高治疗功效的最优化将使其成为可能。从混合层群体中，各颗粒使各转化为若干纳米脂质体的若干层可获得。通过增加纳米脂质体的数量，大部分在载体颗粒中的API被带至表面，因此与载有药物的纳米脂质体的数量增加成比例地增加了治疗功效。在本实例中，如下表所示，脂质与药物的比率为45 1至45 15。表1不同的脂质制剂的形状和尺寸用于治疗真菌感染的新制剂，所述制剂包含在盐水悬浮液中含有胆固醇的纳米脂质体两性霉素B。