专利名称：埃坡霉素的降解及乙炔取代的埃坡霉素的制作方法C型和D型埃坡霉素(epothilone)属于现有技术，特别地其特征在于12和13位的C＝C双键和12位的氢原子(C型)或烷基(D型)。本发明的一个实施方案涉及埃坡霉素C或埃坡霉素D的降解方法，其中埃坡霉素C或埃坡霉素D在乙烯的存在下发生烯烃置换和后续任选的酯水解(图I)。根据本发明，埃坡霉素C或D可以是发酵产物。本发明的另一个实施方案涉及式9的埃坡霉素的生产方法 其中将式2a的埃坡霉素(图I和II)转化成式3a的化合物(图II)，使式3a的化合物与式6的化合物(由式4的化合物与式5的化合物反应形成，图II)反应，从而通过酯化得到式7的化合物(图II)，使式7的化合物在Grubbs催化剂的存在下反应，从而通过脱保护得到式8a的化合物(图II)，式8a的化合物通过脱保护而被转化成式8b的化合物(图II)，式8b的化合物通过环氧化而被转化成式9的化合物(图II)。作为不同于图I中描述的反应顺序的另一选择，可以根据图3通过以下步骤获得合成中间体31)用例如猪肝酯酶(PLE)裂解埃坡霉素C或D的内酯，或者在保护3，7-羟基后，用碱水溶液裂解埃坡霉素C或D的内酯，从而得到10(这种转化在美国专利申请09/811,808，2001年3月19日，BMS/GBF中有描述)；2)任选地用重氮甲烷酯化，并任选地保护3，7-二羟基，从而得到11；3)用过量烯烃，例如乙烯，以及钌或钼置换催化剂进行烯烃置换，并任选地保护3，7-二羟基，得到3b。实验部分12，13-断裂-埃坡霉素C(12，13-seco-Epothilone C)(2a)在250mL二氯甲烷中溶解450mg埃坡霉素C(1)(0.95mmol)，用乙烯饱和，并且在加入60mg Grubbs催化剂(PhCHRuCl2[P(Cy)3]2)后搅拌24小时。加入另外60mg催化剂并搅拌24小时后，将黑色溶液蒸发至干，并且将残留物通过在二氧化硅上用己烷/叔丁基甲基酯/甲醇80∶20∶1的溶剂系统的色谱法进行纯化。第一部分含有360mg(75％)的2a，第二部分含有100mg(22％)的回收原料1。2a1H-NMR(CDCl3)，300MHz)δ＝6.95(s，19-H)，6.02(s，17-H)，5.89-5.64(m，12-H，13-H)，5.16-4.89(m，12a-H2，13a-H2)，5.37(t，J＝7Hz，15-H)，4.24(ddd，J＝10，3，3.5Hz，3-H)，3.36(s，OH)，3.34(d，J＝8Hz，7-H)，3.25(dq，J＝1.5，7Hz，8-H)，3.21(d，J＝3.8Hz，OH)，2.70(s，21-H3)，2.52-2.32(m，2-H2，14-H2)，2.07(d，J＝1.5Hz，16-Me)，2.05-1.95(m，11-H2)，1.8-1.1(m，6-H，8-H，9-H2，10-H2)，1.18(s，4-Me)，1.10(s，4-Me)，1.04(d，J＝7Hz，6-Me)，0.83(d，J＝7Hz，8-Me)。ESI-MS(正离子)m/z＝506[M+H+]，CI-MS(NH3正离子)m/z＝506[M+H+](22％)，380(100％)。3，7-二-[叔丁基二甲基-甲硅烷氧基]-4，4，6，8-四甲基-5-氧-12-十三烯酸(3a)搅拌下，向330mg(0.65mmol)溶解在10mL THF中的12，13-断裂-埃坡霉素C(2a)中加入0.6mL NEt3和0.6mL叔丁基二甲基甲硅烷triflate。一小时后，在真空中蒸发溶剂。将残留物在10mL THF中溶解，加入溶解在0.5mL水中的70mg LiOH，将混合物搅拌16小时。蒸发溶剂，使残留物在pH5的磷酸盐缓冲液和乙酸乙酯间分配。用无水MgSO4干燥有机层并蒸发至干。在RP-18上用溶剂系统甲醇/pH7的20mmol乙酸铵缓冲液进行制备HPLC，得到235mg(67％)的无色粘稠油状物3a。
分析HPLC，在Nucleosil RP-18(260×5mm)上，溶剂系统甲醇/pH7的20mmol乙酸铵缓冲液，1mL/min，光散射检测器Rt＝5.5min。
1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ＝5.78(m，12-H)，4.99，4.92(m，13H2)，4.39(dd，J＝6.3，3.4Hz，3-H)，3.79(dd，J＝7.2，2.0Hz，7-H)，3.12(dq，J＝7.0Hz，8-H)，2.49(dd，J＝16.5，3.5Hz，2-Ha)，2.32(dd，J＝16.5，6.2Hz，2-Hb)，1.5-1.0(m，6-H，8-H，9-H2，10-H2，11-H2)，1.2(s，4-Me)，1.07(s，4-Me)，1.04(d，J＝6.9Hz，6-Me)，0.91(d，J＝7.0Hz，8-Me)，0.89(s，tBuSi)，0.88(s，tBuSi)，0.09(s，MeSi)，0.06(s，MeSi)，0.05(s，2MeSi)。
ESI-MS(负离子)m/z＝541(M-H)。
4-溴-2-甲基-噻唑(4)在25mL无水乙醚中溶解1g(2.05mmol)2，4-二溴噻唑，将所得溶液在-78℃于N2气氛中搅拌。向该溶液中加入n-BuLi(1.1当量，4.52mmol，2.82mL 1.6M己烷溶液)，继续搅拌1小时。然后向反应混合物中逐滴加入1.16mL(12.34mmol)二甲基硫酸酯在1mL乙醚中的溶液。在-78℃搅拌4小时后，使反应混合物暖至室温并搅拌14小时。用饱和NaHCO3溶液(10mL)稀释反应混合物。用乙醚萃取水层，用盐水洗涤合并的有机萃取液并用MgSO4干燥。真空下浓缩，并进行闪蒸柱色谱(硅胶，10∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到0.52g(70.6％)黄色油状物。
IR(KBr)3122，2923，1485，1441，1252，1178，1085，887，834cm-1。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ＝7.02(s，1H)，2.71(s，3H)。
13C-NMR(CDCl3，100.6MHz)δ＝167.31，124.18，116.11，19.40。
EI-MS(70eV)m/z(％)179(93)[M+2H]+，177(100)[M+H]+，169(30)，164(20)，159(15)。
HRMS(EI)C4H4BrNS的计算值176.9251，实测176.9248。
1-(2-甲基-噻唑-4-基)-己-5-烯-1-炔-3-醇(6)向480mg(2.68mmol)4-溴-2-甲基-噻唑(4)在4mL Et3N中的溶液中加入131mg(0.187mmol)PdCl2(PPh3)2，将悬浮液在室温下于N2气氛中搅拌15分钟，然后在N2气氛中加入117mg(0.614mmol)CuI，接着逐滴加入283mg醇5(A.B.Smith，III等，JACS 120，3935-3948(1998))在1mL Et3N中的溶液。将混合物在室温搅拌15分钟并加热至80℃，保持6小时。真空下浓缩，并进行闪蒸柱色谱(硅胶，3∶2石油醚/乙酸乙酯)，得到0.29g(56％)黄色油状物。＝-29.1(c＝1，在氯仿中)IR(KBr)3386，3142，2924，1641，1501，1435，1286，1194，1041，993，918cm-1。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ＝7.26(s，1H)，5.98-5.88(m，1H)，5.23-5.16(m，2H)，4.62(dd，J＝11.9，5.8Hz，1H)，2.68(3H，S)，2.58-2.54(2H，m)，2.39(d J＝6.1Hz，1H，OH)。
13C-NMR(CDCl3，75.5MHz)δ＝165.77，136.20，133.09，122.48，118.85，89.53，79.04，61.84，41.87，19.10。
DCI-MS(NH3)211[M+NH4+]，194[M+H+]。
(1S)-1-[(2-甲基-噻唑-4-基)-1-己炔基]-3-丁烯基(3S，6R，7S，8S)-3，7-二-[叔丁基二甲基甲硅烷氧基]-4，4，6，8-四甲基-5-氧-12-十三烯酸酯(7)在0℃下，向200mg(0.368mmol)酸、79mg(0.405mmol)醇和12mg(0.09mmol)DMAP在10mL CH2Cl2中的溶液中加入99mg(0.478mmol)DCC。将混合物在0℃下搅拌15分钟，并在室温下搅拌16小时。真空下浓缩，并进行闪蒸柱色谱(硅胶，10∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到240mg(91％)黄色油状物。＝-45.8(c＝1，在CH2Cl2中)IR(KBr)2929，2856，1742，1697，1641，1472，1253，989cm-1。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ＝7.28(s，1H，噻唑H-5)，5.91-5.73(m，2H，H-12，H-3)，5.58(t，J＝6.1Hz，1H，H-1′)，5.20-4.90(m，4H，H-13，H-4′)，4.38(dd，J＝6.3，3.3Hz，1H，H-3)，3.74(dd，J＝6.8，2.2Hz，1H，H-7)，3.11(dq，J＝6.8，6.8Hz，1H，H-6)，2.67(s，3H，噻唑CH3)，2.60(t，J＝6.6Hz，1H，H-2)，2.55(dd，J＝16.7，3.5Hz，1H，H-2′)，2.29(dd，J＝17.0，63Hz，1H，H-2′)，2.05-1.95(m，2H，H-11)，1.47-1.29(m，3H)，1.17-1.08(m，2H)(H-8，H-9，H-10)，1.21(s，3H，H-22)，1.05(s，3H，H-23)，1.03(d，J＝6.6Hz，3H，C6-CH3)，0.89(d，J＝6.6Hz，3H，C8-CH3)，0.88，0.87(2s，2×9H，OSiC(CH3)3)，0.089(s，3H，OSi(CH3)2)，0.032，0.028，0.024(3s，3×3H，OSi(CH3)2)。
13C-NMR(CDCl3，100.6MHz)217.63，170.84，165.55，138.97，136.08，132.23，123.22，118.91，114.41，85.67，79.97，73.76，63.77，53.38，45.23，40.20，39.09，38.87，34.35，34.00，30.48，27.11，26.26，26.07，25.66，24.97，23.44，19.89，18.55，17.66，15.52，-3.61，-3.74，-4.20，-4.59。
DCI-MS(NH3)735[M+NH4+]，718[M+H+]。
HRMS(DCI)C39H70N2O5SSi2的计算值735.4622，实测735.4675。
(4S，7R，8S，9S，16S)-4，8-二-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-5，5，7，9-四甲基-1-6-[2-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-1-乙炔基]-1-氧-13-环十六烯-2，6-二酮，Z和E异构体的混合物(8a)向190mg(0.264mmol)二烯7在66mL CH2Cl2中的溶液中加入44mg(0.053mmol)双(三环己基膦)亚苄基二氯化钌，并将反应混合物在室温下搅拌48小时。真空下浓缩，并进行闪蒸柱色谱(硅胶，10∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到95mg(52％)黄色油状物。
(4S，7R，8S，9S，16S)-4，8-二羟基-叔-5，5，7，9-四甲基-1-6-[2-(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)-1-乙炔基]-1-氧-13-环十六烯-2，6-二酮(8b)，顺反异构体的混合物用2mL三氟乙酸处理95mg(0.137mmol)内酯X在12mLCH2Cl2中的-20℃的溶液，并在0℃下搅拌2小时。真空下浓缩后，用EtOAC稀释残留物，用饱和NaHCO3溶液洗涤，并用MgSO4干燥。真空下浓缩，并通过HPLC(80∶20∶3己烷/t-BuOMe/MeOH)分离，得到27mg(42％)的顺-羟基内酯8b和27mg(42％)的相应的反式异构体。＝-123(c＝1，在CH2Cl2中)1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ＝7.30(s，1H，H-19)，5.65(dd，J＝9.1，2.9Hz，1H，H-15)，5.55-5.41(m，2H，H-12，H-13)，4.20(dd，J＝10.8，2.7Hz，1H，H-3)，3.67-3.65(m，1H，H-7)，3.12(dq，J＝6.6，2.0Hz，1H，H-6)，2.88-2.77(m，1H，H-14)，2.70(s，3H，H-21)，2.51(dd，J＝15.0Hz，10.9Hz，1H，H-2)，2.27(dd，J＝15.2，2.8Hz，1H，H-2)，2.18-2.00(m，2H，H-11，H-14)，1.71-1.58(m，3H，H-8，H-9，H-10)，1.32(s，3H，H-22)，1.30-1.19(3H，H-8，H-9，H-10)，1.18(d，J＝6.7Hz，3H，H-24)，1.07(s，3H，H-23)，0.98(d，J＝6.9Hz，3H，H-25)。
13C-NMR(CDCl3，75.5MHz)δ＝220.81，169.96，164.44，134.16，134.27，123.75，123.00，86.13，80.00，74.38，72.03，64.11，53.31，41.74，39.37，38.71，32.87，32.37，27.63，27.47，22.69，19.18，18.37，15.46，13.70。
16，17-二脱氢-16-去甲基-埃坡霉素A(9)在-20℃下，向27mg(0.058mmol)内酯(8b)在4mL CH2Cl2的溶液中逐滴加入二甲基二环氧乙烷(dimethyl dioxirane)在丙酮中的溶液(2当量)。在-20℃下继续搅拌2小时。真空下浓缩，并通过HPLC(80∶20∶3己烷/t-BuOMe/MeOH)分离，得到17mg(60％)α-环氧化物9和9mg(32％)的β-环氧化物。
α-环氧化物[α]＝-34(c＝1，在CH2Cl2中)IR(KBr)3453，2958，2850，1744，1690，1500，1467，1376，1290，1261，1147，979，775cm-1。
13C-NMR(CDCl3，100.6MHz)220.55，170.19，166.12，135.50，123.28，85.00，80.56，75.12，73.59，62.71，57.17，53.75，52.67，43.68，38.69，35.96，32.67，29.72，26.56，23.63，21.12，20.48，19.16，17.06，14.46。
EI-MS(70eV)m/z(％)477(27)[M+H]+，421(14)，389(19)，378(100)，364(28)，346(27)，328(15)。
β-环氧化物13C-NMR(CDCl3，75.5MHz)δ＝221.38，170.03，166.05，135.70，123.28，85.13，80.48，73.24，73.11，62.24，57.14，55.31，52.28，42.89，38.98，37.53，32.40，31.82，27.60，27.01，23.45，20.62，20.36，16.38，13.49。


本发明涉及埃坡霉素(epothilone)C或埃坡霉素D的降解方法，其中埃坡霉素C或埃坡霉素D在乙烯的存在下发生烯烃置换和后续任选的酯水解。本发明进一步涉及(2－甲基－1，3－噻唑－4－基)－乙炔取代的埃坡霉素(9)，分子式(9)。