专利名称：以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体及其培育方法蝶花(Cordyceps sobolifera ；C. cicadae)也称!i#蛹草，是一种具有动物和植物特征的奇妙生物复合体，其生物根是蝉蛹或山蝉的幼虫体，花是从单个或是2-3个蝉幼虫头部生长出来的，约一寸多长，从顶端开花、分枝。蝉花属于生物病态现象，是ー种虫菌相依的组合体。秋季来临，蝉钻入土中，逐渐变成蝉蛹，在羽化前被虫草菌类寄生，当生活备件适宜时，就开始在虫体内萌发成菌丝体，吸收虫体的营养，最終虫体被菌丝体完全占有而只剩下ー个躯売。万物复苏时节，菌丝体又从营养阶段转化为有性阶段，渐渐从顶端开花分枝， 故而得名蝉花，主要分布于安徽、浙江、福建、广东、四川、云南、江苏等地。南北朝时期雷斅写的《雷公炮灸论》中记载道“蝉花，凡使，要白花全者。收得后于屋下东角悬干，去甲、土后，用浆水煮一日，至夜焙干，研细用之。”这是迄今为止发现的，关于蝉花最早的文字记载。同时也是关于虫生真菌最早的文字记载。而《雷公炮灸论》则为我国最早的中药炮灸学专著。书中记载了 300多味中草药的加工方法，距今1500年，比冬虫夏草的记载整整提早了 800年。专家们据此推測，在3000年前，我们的祖先就认识蝉花，并对其药用价值有所了解。此后，专家们又从《本草纲目》上查到了有关蝉花用途的记载。从北宋中叶苏颂撰写的《图经本草》中看到了有关蝉花的记载“今蜀中有ー种蝉，其蜕壳头上有一角，如花冠状，谓之蝉花。医エ云人药最奇。”从宋代唐慎微的《征类本草》，以及明朝李时珍的《本草纲目》也都找到了有关蝉花记载。金蝶，又名知了猴，隶属于同翅目蝉科中型到大型昆虫，营养价值高，还具有良好的药用价值，金蝉含蛋白质，为牛肉的2. 5倍，鸡肉的2倍，又由于含有人体必需的多种营养素，对促进生长发育，体虚患者康复等，都有极佳的辅助治疗作用，是天然无公害高效营养食品，特别是金蝉能进行大規模人工饲养，为生产蝉花提供稳定安全的原料来源，因此，用金蝉幼虫进行人工培养研究蝉花具有广阔的产业化应用前景。在自然界蝉幼虫寄主虫草菌完成ー个世代需3年以上时间，这表明形成蝉花有性型的时间长，而且在自然界菌虫感染率低。中国发明专利CN200810068632公开了ー种蝉花的人工培养方法，(I)分离原始菌株，(2)培养蝉花拟青霉，及用蝉拟青霉孢子感染家蚕老熟幼虫。以上采用老熟家蚕幼虫。此外，ー些生物学专家采用液体深层发酵的方法解决对蝉花市场的需求，由于液体发酵生产只有菌丝体，没有虫体。另外用大米、小麦等作培养基生产的蝉花子实体也没有蝉虫体，无法获得和天然同样外形的蝉花，而用蝉幼虫生产蝉花目前尚无相关报道。
本发明的目的是提供ー种感染率高、出草率高的蝉花子实体及其培育方法。为了达到上述目的，本发明提供了一种以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体的培育方法，其特征在于，包括以下步骤第一歩将蛹虫草子实体在固体培养基上经孢子分离提纯复壮，得到蛹虫草菌丝体，培养温度为20°C，培养时间12天，淘汰绒毛多不转色的菌丝体，挑选转色好，转色快，贴着培养基长势快的菌丝体留种；第二步在20°C -22°C，120r/m的条件下，将第一歩得到的留种菌丝体经用液体培养基振荡培养4-5天，并且有小菌球充满液体培养基，制成液体菌种；第三步用消毒剂对金蝉幼虫进行浸泡消毒10分钟，然后用无菌水洗三次，用紫外灯照2小时，最后在蝉幼虫身体上用无菌针扎多个小洞，用无菌注射器吸入第二步得到的液体菌种注入蝉幼虫体后背；第四歩将第三步得到的已注射感染的蝉幼虫置于无菌的组培瓶内，用注射器将0. Iml液体菌种注入蝉幼虫外体，盖上瓶盖，黑暗保湿培养3天，温度为18°C -23°c，湿度为80-100% ;然后在20°C下培养20天，光照为12h/d，光照强度为在150_2501x，打开瓶盖，注入2ml无菌水，继续培养30-40天，至蝉花子实体长至3cm及以上长，即收获。 优选地，所述第一歩中的固体培养基的成份为以重量百分比计的蔗糖1.5%，马铃薯 2%,KH2PO4O. 25%,MgSO4 *7H20 0. 15%，维生素 B1O. 01%，琼脂 I. 6%和蛋白胨 0. 8% 0优选地，所述第二步中的液体培养基的成份为以重量百分比计的蔗糖3%，马铃薯 2%, KH2PO4 0. 3%, MgSO4 7H20 0. 15%，维生素 B1 0. 01%，琼脂 0. 05%和蛋白胨 IV0o优选地，所述的第三步中多个小洞的具体数量为8个，分别为前胸4个，后胸或后背4个。与现有技术相比，本发明的优点是I)本发明采用了蝉幼、无毒、营养成分高，人们长期食用的大型昆虫，食用安全可靠。2)蛹虫草菌是被卫生部批准为新资源食品，具有与冬虫夏草同样的药食用菌的营养，用蝉幼虫与蛹虫菌培养的蝉花具有与野生虫草相似，营养成分相近，是可安全食用的南方“冬虫夏草”。用蛹虫草菌稼接蝉幼虫，14天蝉幼虫体内布满菌丝体并僵化，30天后虫体上长出粗壮子实体，粗0. 5cm,高2. 5cm以上，子实体上长满有性孢子，金红色，外观美，营养好，味道鲜美，用蝉花幼虫接种蛹虫草菌技木，感染率达85%以上，出草率70%以上。图I为采用本发明提供的方法制备的以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体样本I;图2为采用本发明提供的方法制备的以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体样本2。



本发明公开了一种以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体的培育方法。所述的培育方法为将蛹虫草子实体在固体培养基上经孢子分离提纯复壮，得到蛹虫草菌丝体，挑选转色好，转色快，贴着培养基长势快的菌丝体留种；将留种菌丝体经用液体培养基振荡培养，制成液体菌种；对金蝉幼虫进行处理，在蝉幼虫身体上用无菌针扎小洞，用无菌注射器吸入液体菌种注入蝉幼虫体后背；将已注射感染的蝉幼虫置于无菌的组培瓶内，用注射器将0.1ml液体菌种注入蝉幼虫外体，盖上瓶盖，黑暗保湿培养，再光照20天，注入无菌水，继续培养，至蝉花子实体长至3cm长。本发明方法与天然蝉花相比，营养与药用成分相当，质量好，感染成功率高，出草率高，时间短，成本低。