专利名称：猪骨提出物及其制备方法和应用的制作方法包括骨骼在内的畜禽副产物的重量，往往可占畜禽胴体重量的30-40 %。目前对大量畜禽骨骼的利用尚不充分，既浪费了这种营养成分丰富且比例合理的资源，又在骨处理的问题上污染了环境，带来一定的环境压力。研究表明，禽畜骨中含有的成分不仅仅含有人体必须的钙、磷等必须微量元素，同时也含有丰富的蛋白质、脂肪等营养成分。目前对鲜骨加工的主要途径有冷冻粉碎法制成鲜骨泥，或通过高温、高压水煮水解法，常温、常压水煮水解法，酸水解或碱水解法，酶水解法等途径，将骨水解提取胶原蛋白、氨基酸、脂肪等营养成分。通过上述方法制得的蛋白、 多肽、氨基酸类产品，主要包括骨胶、骨素等，提取物中含有较为丰富的蛋白质、多肽和氨基酸，其中主要以甘氨酸、羟脯氨酸和丙氨酸等含量较高，可作为机体重要的蛋白补充来源。 但是，目前生产骨胶、骨素等的过程中常需使用ー些化学试剂或经长时间高温高压加热，容易造成一些不稳定氨基酸被破坏，使产品中营养成分难以均衡。此外，在生产过程中加入的酸、碱等物质虽经过后处理，但不能完全除去其不良影响，造成产品ロ感较差，具有明显的涩味、苦味。近来，酶法水解骨蛋白技术得到了较大的发展，但在应用过程中通常采用单酶水解，或多酶分步水解，使得蛋白水解率不高，或反应时间过长，生产成本过高。另ー方面，钙制剂的发展历经了无机钙盐、传统的有机钙盐以及新型可溶性有机钙三个阶段。最初使用的无机氧化钙等简单混合物易吸潮结块，不宜混勻，对维生素有一定破坏作用，且适ロ性、营养性以及吸收性差，致使其生物学效价较低。柠檬酸钙、乳酸钙等有机盐钙添加剤，虽能提高微量元素的吸收率，但其溶解度较大，易溶失，价格较高。近来，应用了氨基酸微量元素鳌合物，融氨基酸与微量元素于一体，氨基酸是蛋白质合成的基本原料，可达到为机体补充钙又补充氨基酸的双重目的。
鉴于此，本发明首先提供了ー种以废弃的猪骨为原料制备得到的猪骨提出物，进 ー步还提供ー种所说该提出物的制备方法，以及该提出物的应用。本发明的猪骨提出物，是由猪骨原料提取得到的蛋白质酶解氨基酸和小分子多肽与至少包括钙元素在内的无机元素螯合而成的混合物，其成分中含有以N含量计算的蛋白、多肽、氨基酸总量不低于13w%，钙含量不低于2w%，其中蛋白水解率> 18%，钙的螯合率> 75%。其中，所说的无机元素中主要是钙，以及很少量或微量的锌、铁等其它元素。本发明上述猪骨提出物中，所说螯合态的无机元素为钙元素。本发明上述猪骨提出物可以按下述步骤操作制备得到a、将粉碎后的原料猪骨以水煮充分提取后，固液分离。b、固液分离后的液体部分进行油水分离，在水层物中加入食品ェ业中允许的蛋白质水解酶，在酶的适宜活性条件下(如适宜的PH、温度等条件)进行水解，至其中蛋白质成分的水解率> 18%，过滤并收集滤液。C、固液分离后的骨渣在0. 5M 8M的盐酸溶液中充分酸解后，过滤并收集滤液。酸解过程通常0. 5 10小时即可完成。d、将上述b、c两步收集的滤液合并后，在pH 7. 5 8. 5和45°C 55°C条件下进行螯合反应，至反应体系中钙的螯合率> 75 %，过滤，滤液浓缩干燥，得到所说的猪骨螯合物。在上述制备的步骤a中，作为原料猪骨的粉碎颗粒越小，其中蛋白的溶出度越高， 溶出速度也越快。试验结果显示，一般情况下，选择颗粒直径为1 5厘米较为适中。虽然延长提取时间，和/或提高提取温度，以及减小骨与水的料液比，都可以提高提取率，但时间过长，和/或温度过高，易使部分氨基酸受到破坏，且同时增加能耗，加大成本。因此一般情况下，水煮0. 5 M小时即可完成提取过程。作为ー种优选的提取方式，可以采取原料猪骨与水的重量比为1 0 4)，在加压条件下于108°C 121°C水煮提取3 5小吋。制备方法b步中所说的蛋白质水解酶，可以选择在食品エ业中允许使用的各种能够对蛋白质进行水解的酶，例如常用的木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、Flavourzyme, Alcalase, Protamex等当中的至少ー种。试验表明，一般情况下，对蛋白质的水解吋，使用由至少两种酶组成的复合酶的效果，可优于只使用单ー酶的效果。例如，一种优选的方式可以采用由同时含有内/外切酶的商品酶Flavourzyme与 ftOtamex以重量1 (0. 5 幻混合的复合酶进行蛋白质水解。在此情况下，该酶解过程可以在加入底物重量0. 05% 0. 15%的所说复合酶，以及pH5. 5 6. 5和48°C 52°C条件下酶解水解1 10小时即可完成。制备过程中所说d步的螯合反应，可按目前已有报道和/或使用的氨基酸螯合钙等产品的方式进行。其中，一种优选的方式，可以采用将上述b、c两步得到的滤液以体积比 (1 3) 1混合后，在pH 7. 5 8. 5和45°C 55°C条件下进行。螯合反应通常在0. 5 M小时内即可完成。由于本发明的猪骨螯合物通过适当的内切酶和/或外切酶，特别是采用相应的复合多功能蛋白酶，可以由猪骨提取物中获得大量的游离氨基酸和小分子多肽，为骨螯合物的生产奠定良好基础，且有利于控制生产成本。同吋，又从骨渣中提出了其中有效、经济和丰富的钙元素，以此作为螯合的钙源，因而无需添加化学性钙源，不仅有利于符合了天然、 緑色的消费概念，使传统被废的禽畜骨能得到最大限度的综合利用。已有研究表明，包括钙在内的微量元素与氨基酸形成小分子ニ肽形式的络合物，在吸收、转运和稳定性方面，较氨基酸螯合钙更具优势，更易通过小肠途径被直接吸收，大大提高吸收率。因此，以本发明上述的猪骨螯合物为原料，与药学或食品エ业中可以接受的辅助成分，可以共同制备成具有提高免疫功能的药品或保健食品。以下结合由附图所示实施例的，对本发明的上述内容再作进ー步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。图1是本发明猪骨螯合物制备方法中不同蛋白水解酶对猪骨蛋白的水解效果比较。图2是Flavourzyme与ftx)tamex不同混合比例的复合酶的酶解效果比较。


本发明涉及猪骨提出物及其制备方法和应用。该猪骨提出物是由猪骨原料提取得到的蛋白质酶解氨基酸和小分子多肽与至少包括钙元素在内的无机元素螯合而成的混合物，其成分中含有以N含量计算的蛋白、多肽、氨基酸总量不低于13w％，钙含量不低于2w％，其中蛋白水解率≥18％，钙螯合率≥75％。制备时，将粉碎后的原料猪骨水煮提取物固液分离，对液体部分中水性成分的蛋白质进行酶解，骨渣部分进行酸解后，二者的酶解液和酸解液合并，进行螯合反应，即得。该猪骨提出物与药学或食品工业中可以接受的辅助成分可以共同制备成具有提高免疫功能的药品或保健食品。