硝苯柳胺作为杀精剂的应用制作方法

施天益, 易健民, 许友, 李香华, 阎建辉, 廖德仲, 张小丽

2001年9月26日

2001年3月24日

2001年3月24日

岳阳师范学院

A61K31/609GK1314152SQ01106969

硝苯柳胺 精剂 应用 作为

1.硝苯柳胺作为杀精剂的应用2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于硝苯柳胺在制备外用避孕药中的应用，以及兼作杀霉菌、淋球菌、滴虫剂的应用

本发明涉及硝苯柳胺(化学名称为N-(4-硝基苯基)-5-氯水杨酰胺)的新用途，尤其涉及在制药领域中的新用途目前的(女用)避孕药剂主要分为阴道杀精剂和口服避孕药两种由于口服避孕药存在干扰人体内分泌且毒副作用较大等缺点，故阴道杀精剂以其适用范围广、杀精效果好、毒副作用小、不干扰内分泌等优点，越来越受到人们的重视目前国内外使用的杀精剂有壬苯醇醚(NP-9)等6种，其中壬苯醇醚最常用据报道，其最低杀精浓度为150mg/L(美国文献报道最低杀精浓度为50mg/L)，其主要副作用为阴道粘膜刺激症状与烧灼感壬苯醇醚还可能经阴道粘膜被人体吸收后，引起转氨酶SGOT明显增高，有可能造成肝脏损害为克服上述缺陷，提供一种新的外用避孕药活性组分，我们对硝苯柳胺进行了研究硝苯柳胺为水杨酰胺衍生物，是一种新化合物，其合成方法、结构式及其作为其它药物的用途已有报道本课题组的易健民等在《中南工业大学学报》-99,30(5)-519-521上报道了硝苯柳胺的合成，施天益等在《精细化工》-98,15(5)-14-16报道了“一锅煮”法合成硝苯柳胺，CN1075137A公开了杀螺灵(硝苯柳胺Niphensamide)及其合成工艺(专利申请号为93110462.9)；US4708953公开了水杨酰胺类衍生物及其作为根瘤病菌杀灭剂的应用根据省科学技术信息研究所于2001年3月5日的项目查新报告表明(查新报告附后)，除查新项目课题组成员发表的有关论文外，其它未见与本发明技术特点相同的文献报道本发明所述硝苯柳胺其结构式为 其中，R1=R3=H、R2=Cl，当R2=R3=H、R1=Cl；R1=R2=Cl、R3=H；R1=H、R2=R3=Cl；R1=R2=R3=Cl时则为硝苯柳胺的衍生物硝苯柳胺分子式为C13H9O4N2Cl，分子量292，熔点251～252℃，淡黄色粉末，不溶于酸，极微溶于水，微溶于乙醇、丙酮、乙醚、苯、氯仿等有机溶剂，能溶于吡啶、二甲亚砜、稀NaOH、KOH水溶液和氨溶液中，在还原剂中被还原而失去活性硝苯柳胺产生生物效应的浓度在0.5～2mg.L，张一甫、许友、施天益在《光谱学与光谱分析》2000年第20卷第2期上报道了“用紫外分光光度法来测定水中硝苯柳胺的含量”，这种检测方法的检测效果较理想化合物硝苯柳胺可由5-氯水杨酸、二氯亚砜、对硝基苯胺反应合成，合成方法主要有“一锅煮法“和“分步合成”两种已知可以用作植物根瘤病菌杀灭剂和杀灭血吸虫中间宿主——钉螺的杀螺剂本发明的目的在于提供硝苯柳胺的新用途，即作为制备杀精剂的新应用，同时也为外用避孕药提供了一种新的活性组分为实现上述发明目的，我们对硝苯柳胺作为杀精剂以及在制备外用避孕药中的应用进行了研究根据我们进行的体外杀精试验及动物体内杀精试验及送有关部门进行的动物毒性试验，及对霉菌、淋球菌、滴虫的杀灭和抑制实验，一般性药理研究和遗传毒理三项试验表明，硝苯柳胺可作为一种新的高效、安全、价廉、使用方便且兼有杀灭抑制霉菌、淋球菌、滴虫作用的多剂型外用杀精剂为了更好地理解本发明的实质，下面用硝苯柳胺作为杀精剂的有关试验及结果来说明其在制药领域中的新用途同样地，用氯硝柳胺也有同样的药理效果，区别仅在使用量上的不同采用分步法合成硝苯柳胺，其基本步骤为(1)先由叔丁醇与氯气在氢氧化钠作用下生成次氯酸叔丁酯；(2)再将水杨酸与第一步产品反应得5-氯水杨酸(也可直接在市场上购买5-氯水杨酸)；(3)将5-氯水杨酸与二氯亚砜作用生成酰胺，后与对硝基苯胺反应得粗产品；(4)将所得粗产品提纯得浅黄结晶粉末备用1、硝苯柳胺体外杀精作用的试验(1)将硝苯柳胺用5％无菌葡萄糖注射液配成50mg/L溶液，然后再用5％葡萄糖液稀释成20、10、5、2.5、1mg/L浓度的溶液备用；(2)新鲜人精液，由健康正常生育能力的成年男子提供，待精液液化后，按血细胞计数法计数，精子密度为7.2×107个/ml活力)83％原精液用5％无菌葡萄糖水溶液稀释10倍，备用(3)已稀释的精液及药液均在37℃水温箱中恒温，取1ml已稀释精液，加入装有1ml药液的小试管中、试管置于恒温水箱内轻搅拌混合均匀后，取混合液0.5ml，立即置于玻片上，显微镜下观察(×100)，分别记录20秒、3分钟内活精子数，重复3～5次观察结果，硝苯柳胺药液浓度2.5≥mg/L时，20秒、3分钟内活精数为0，杀灭率为100％，药液浓度为1mg/L时，20秒、3分钟内活精数为2～30个，杀灭率为98.33％～99.8％结果表明，硝苯柳胺对人体活精子有极强的体外杀灭作用2、硝苯柳胺的急性毒性试验(1)小鼠口服急性毒性试验用灌胃法按两步预试验方法，测定硝苯柳胺对小白鼠LD50为1420mg/kg，根据我国毒物经口急性毒性分级的标准判断，硝苯柳胺对哺乳动物毒性属低毒，高剂量引起小鼠急性中毒的主要症状是中枢神经系统中毒反应(2)家兔皮肤刺激试验和眼结膜刺激试验用试验兔三只，在每只兔腹部两侧各选一块4×4cm2区域，均匀将毛剪去，于第二天进行试验每只兔涂药量为硝苯柳胺油膏1.25克，均匀涂于一侧剪毛区，另一侧为等渗盐水对照区，涂药4h后，用温肥皂水洗净试验区皮肤，涂药24h后无任何反应，则每天涂药1次，涂药三次后皮肤出现反应，并仔细观察和记录对皮肤刺激反应及恢复情况用实验兔三只，将20％硝苯柳胺混悬液0.1ml滴入兔一侧眼结膜囊内，使闭眼及压迫鼻泪管，1分钟后用等渗盐水将眼结膜囊内药物充分洗净，另一侧以等渗盐水作对照观察和记录1、12、24、48、72和96h药物对眼结膜的刺激反应及其恢复情况结果表明，硝苯柳胺对家兔皮肤有轻微刺激反应，对眼结膜无刺激反应(3)遗传毒理三项试验送硝苯柳胺样品至“北京科技协作中心中国药品生物制品检定所分部”作遗传毒理三项试验(1)组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌诱变试验(Ames试验)结果为阴性；(2)NIH小鼠骨髓细胞微核试验，镜检骨髓嗜多染红细胞微核诱发率，结果表明硝苯柳胺与阴性对照组(麻油组)比较无显著性差异；(3)CHL细胞体外染色体畸变试验，试验表明在活化及非活化条件下，硝苯柳胺对CHL细胞在24小时及48小时作用均未诱发明显畸变，即硝苯柳胺对CHL细胞体外染色体畸变试验结果为阴性因此，遗传毒理三项试验的检验报告显示硝苯柳胺无致突变性、无致畸性、无致癌性上述结果表明硝苯柳胺毒性小，对粘膜无刺激作用，无三致作用(致畸、致癌、致突变)，极低浓度时(2.5mg/l)对人体精子仍有相当强的杀灭作用，杀灭迅速，杀灭率为100％其效果为目前使用的杀精药壬苯醇醚-9的20倍(壬苯醇醚-9杀灭精子的最低有效浓度为50mg/l，烷苯聚醇醚各组分杀精子最低浓度为150～250mg/l)因此硝苯柳胺作为杀精剂使用的适宜浓度为2.5～5mg/L，是外用避孕药的新的活性组分，可替代壬苯醇醚制备成避孕膜或其它外用剂型如水剂、片剂、栓剂等，保险避孕用量每人每次用药量折算原粉为0.02～0.08克从以上结果，可以得出本发明的优点在于1、产品易于合成(合成路线短，工艺简单，收率高；2、生产成本低(每吨硝苯柳胺约5～10万元)；3、杀精效果好(体外杀精最低浓度为2.5mg/L)；4、毒性低，安全性高；5、兼有杀淋球菌、滴虫、霉菌等防治部分妇科疾病作用从硝苯柳胺与常用杀精剂壬苯醇醚的性能比较可以看出硝苯柳胺是一种更加安全、高效、价廉的避孕药活性组分，可作为壬苯醇醚的更新换代产品，替换壬苯醇醚制备成避孕膜等多剂型外用避孕药表1 硝苯柳胺与常用杀精剂壬苯醇醚有关性能比较 实施例1采用分步法合成硝苯柳胺原药，(浅黄结晶粉末)，用5％无菌葡萄糖注射液配成2.5mg/L浓度的溶液备用，取新鲜人精液用5％无菌葡萄糖水溶液稀释10倍，在1mL已稀释精液中，加入1mL硝苯柳胺药液，在显微镜下观看活精数为0，杀灭率为100％实施例2取硝苯柳胺原药100g，按本领域技术人员公知的方法用硝苯柳胺取代壬苯醇醚制备硝苯柳胺避孕膜，该避孕膜每片含原粉0.02克使用方法与壬苯醇醚避孕膜相同实施例3取硝苯柳胺原药100g，用实施例2中的方法制备硝苯柳胺避孕膜，其中所述避孕膜每片含原粉0.08克，使用方法同实施例2