专利名称：一种花椰菜的花药培养方法花椰菜(Ara1S1SicaVar. Aotryds)又名菜花,为我国秋冬主栽品种之一。因其食用部分粗纤维少，营养价值高，深受消费者的喜爱。利用不同生态型品种进行杂交，可以培育出新的花椰菜品种，具有很强的杂种优势。但花椰菜属十字花科异花授粉作物，自交衰退严重，自交不亲和系选育较困难，品种依靠群体杂合性保持稳定。而且培育杂 交品种难度大。通过花药培养可以保特亲本的纯度稳定，加快杂种后代的选择效果。对于加快培育优良的椰菜品种具有很好的应用价值。
本发明的目的在于提供一种花椰菜的花药培养方法。本发明提供的一种花椰菜的花药培养方法，所述的培养方法包括以下步骤(I)花药采集和消毒处理；(2)花药愈伤组织培养；(3)愈伤组织分化培养；(4)分化苗生根培养；(5)炼苗、假植、移栽。所述的培养方法具体包括以下步骤 (1)花药采集和消毒处理 ①花药采集在晴天上午取长度为3mm花药饱满的花蕾，经过镜检确定此时的花粉发育处于单核期或单核后期； ②花药消毒处理花蕾经70%酒精浸泡30秒后，用0.I %升汞溶液消毒300分钟，然后用无菌水冲洗5次； (2)花药愈伤组织培养 ①诱导愈伤组织培养基基础培养基E3+BA0. 5mg/L+ NAA0. I mg/L,
培养基配制方法按常规操作。②接种取消毒过的花蕾，在无菌条件下用解剖针或镊子除去花瓣，以镊子夹住花丝，取出花药，花药直接均匀地接种于诱导愈伤组织培养基上，每200ml组培瓶中接3粒花药；
③培养接种后置25±1°C暗培养7天，然后每天光照培养12小时，光照强度800勒克斯，相对湿度为65%;
(3)愈伤组织分化培养
①分化培养基MS+0.5-lmg/L 6-BA + 0. 5 mg/L NAA ；
②愈伤组织块生长增大，并逐渐转为绿色，然后转入分化培养基进行培养；
③培养条件温度25°C、湿度70%、光照强度1000 1500LX；
(4)分化苗生根培养
①生根培养基l/2MS+0. I mg/L NAA+活性碳0. 2% ；②当苗长高到3 4厘米，长出3片叶时，接入生根培养基进行培养；
③培养条件温度25°C、湿度70%、光照强度1500 2000LX；
(5 )假植育苗
①炼苗当苗基部长出根，长度达2cm时打开瓶盖，环境温度25°C，湿度控制在85%，光照强度2000LX，炼苗3 5天；
②假植经炼苗后，移到塑料小盘中育苗，假植后环境温度25°C，湿度控制在90%，光照强度2000LX，成活后移大田栽培。经过3 5代花药培养，使花椰菜后代趋于稳定，可作为花椰菜育种杂交亲本的材料。
本发明的优点通过花药培养可以保特亲本的纯度稳定，加快杂种后代的选择效果。对于加快培育优良的椰菜品种具有很好的应用价值。


图I为花药愈伤图。图2为愈伤分化成幼苗。图3为生根培养。图4为假植苗。

I、花药采集和消毒处理
(I)花药采集在晴天上午取长度为3_左右花药饱满的花蕾作为实验材料，经过镜检确定此时的花粉发育处于单核期或单核后期。(2)花药消毒处理花蕾经70%洒精浸泡30秒后，用O. 1%升汞溶液消毒300分钟，然后用无菌水冲洗5次。2、接种培养花药愈伤组织
(I)诱导愈伤组织培养基E3*+BA0. 5mg/L+ NAAO. I mg/L。培养基配制方法按常规操作。(2)接种取消毒过的花蕾，在无菌条件下用解剖针或镊子除去花瓣，以镊子夹住花丝，取出花药。花药直接均匀地接种于诱导愈伤组织培养基上(剔除花丝、瘪粒花药)每瓶(200组培瓶)中接3粒花药。(3)培养接种后置25±1°C度暗培养7天，然后每天光照培养12小时，光照强度800勒克斯，相对湿度为65%左右。培养30 40天可见花药愈伤组织，如图I所示。3、愈伤组织分化培养
(I)分化培养基MS+0. 5-lmg/L 6-BA + O. 5 mg/L NAA。(2)愈伤组织块生长增大，并逐渐转为绿色，然后转入分化培养基，每瓶接2个愈伤组织块。(3)培养条件温度25°C、湿度70%、光照强度1000 1500LX，培养15-20天，愈伤分化成幼苗，如图2所示。
4、生根培养
(I)生根培养基l/2MS+0. I mg/L NAA+ 活性碳 0. 2%。(2)当苗长高到3 4厘米，长出3片叶时，转入生根培养基进行培养。(3)培养条件温度25°C、湿度70%、光照强度1500 2000LX，培养10-15天，根系发达，如图3所示。5、假植育苗
(I)炼苗当苗基部长出根，长度达2cm时打开瓶盖，环境温度25°C，湿度控制在85%左右，光照强度约2000LX。炼苗3 5天。(2)假植经炼苗后，移到塑料小盘中育苗，育苗的土壤要经过消毒处理，假植后环 境温度25°C，湿度控制在90%，光照强度2000LX，一个星期后得到假植苗，如图4所示。成活后移大田栽培。6、培育花椰菜杂交亲本经过3 5代花药培养，使花椰菜后代趋于稳定，可作为花椰菜育种杂交亲本的材料。附E3培养基