Foxc1基因突变体及其应用的制作方法[0002]Axenfeld-Rieger综合症是以双眼发育性缺陷，伴有或者不伴有全身发育异常为特点的发育性疾病，表现为双眼发育性缺陷，继发性青光眼，可伴有全身发育异常，多为牙骨和面骨异常，为常染色体的显性遗传，多有家族史，男女相同。眼部的临床特点表现为:双眼发病，视力减退，角膜后胚胎环，前房角异常，虹膜角膜粘连，虹膜发育异常，无瞳，瞳孔异位，多瞳等。全身异常的临床特点主要表现为:牙齿异常如小牙、牙齿发育不全或少牙等；多余的脐周皮肤；颅面畸形如上颌骨发育不全。[0003]到目前为止，已确定PITX2基因和FOXCl基因是与Axenfeld-Rieger综合症相关的基因，且其均为转录因子。但仍存在着相当一部分未知致病基因位点，预计在人类中可能仍然存在70多个位点与Axenfeld-Rieger综合症相关。[0004]因而，目前对Axenfeld-Rieger综合症的研究仍有待深入。
[0005]本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品的方法。·[0006]本发明是基于发明人的下列工作而完成的:发明人通过高通量外显子组测序联合候选基因突变验证的方法确定了 Axenfeld-Rieger综合症新的致病基因突变(FOXClc.168delC)。[0007]根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的编码FOXCl突变体的核酸。根据本发明的实施例，该核酸与SEQ ID N0:1相比，具有c.168delC突变。根据本发明的实施例，发明人确定了 FOXCl的新突变体，该新突变体与Axenfeld-Rieger综合症的发病密切相关，从而通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感Axenfeld-Rieger 综合症。
[0008]根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，该多肽是由根据本发明实施例的编码FOXCl突变体的核酸所编码的，其与SEQ ID NO:2相比，阅读框发生改变，即P.Pro56Argfs*22,具体地，从第56位氨基酸开始，由脯氨酸突变为精氨酸，新的读码框终止于第77位，即终止于从56位氨基酸开始算起的第22位氨基酸。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易感Axenfeld-Rieger综合症。
[0009]根据本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选易感AxenfeId-Rieger综合症的生物样品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤:从所述生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列与SEQ ID N0:1相比，具有c.168delC突变是所述生物样品易感Axenfeld-Rieger综合症的指示。通过根据本发明实施例的筛选易感Axenf e I d-Rieger综合症的生物样品的方法,可以有效地筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品。
[0010]根据本发明的第四方面，本发明提出了一种筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品的系统。根据本发明的实施例，该系统包括:核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列与SEQID N0:1相比，是否具有c.168delC突变，判断所述生物样品是否易感Axenfeld-Rieger综合症。利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品的方法，从而可以有效地筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品。
[0011]根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品的试剂盒。根据本发明的实施例,该试剂盒含有:适于检测FOXCl基因突变体的试剂，其中与SEQ ID NO:1相比，所述FOXCl基因突变体具有c.168delC突变。利用根据本发明的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品。
[0012]根据本发明的第六方面，本发明提出了一种筛选治疗或预防Axenfeld-Rieger综合症的药物的方法。根据本发明的实施例，该方法包括:将能够表达FOXCl基因突变体的生物样品在存在候选试剂的情况下进行培养，其中所述FOXCl基因突变体与SEQ ID NO:1相t匕，具有c.168delC突变；将所述能够表达FOXCl基因突变体的生物样品在不存在所述候选试剂的情况下进行培养；确定所述能够表达FOXCl基因突变体的生物样品在存在所述候选试剂和不存在所述候选试剂的情况下，细胞凋亡率的变化，其中存在所述候选试剂时，所述细胞凋亡率低于不存在所述候选试剂时的细胞凋亡率，是所述候选试剂作为治疗或预防Axenfeld-Rieger综合症的药物的指示。
[0013]利用该筛选治疗或预防Axenfeld-Rieger综合症的药物的方法,能够有效地筛选治疗或预防Axenfeld-Rieger综合症的药物。
[0014]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。



[0015]本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:
[0016]图1显示了根据本发明实施例的筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品的系统及其组成部分的示意图，其中，
[0017]图1A为根据本发明实施例的筛选易感Axenfeld-Rieger综合症的生物样品的系统的示意图，
[0018]图1B为根据本发明实施例的核酸提取装置的示意图，
[0019]图1C为根据本发明实施例的核酸序列确定装置的示意图；[0020]图2显示了根据本发明实施例的6例Axenfeld-Rieger综合症患者的FOXCl基因突变位点DNA测序图；以及
[0021]图3显示了根据本发明实施例的Axenfeld-Rieger综合症患者I和2的FOXCl基因突变位点cDNA测序图。
[0022]下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0023]FOXCl基因突变体
[0024]根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的编码FOXCl突变体的核酸。根据本发明的实施例，与SEQ ID N0:1相比，该核酸具有c.168delC突变。在本文中所使用的表达方式“编码FOXCl突变体的核酸”，是指与编码FOXCl突变体的基因相对应的核酸物质，即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与FOXCl突变体的编码基因相对应的脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本发明的一个具体示例，前面所述的编码FOXCl突变体的核酸为DNA。根据本发明的实施例，发明人确定了 FOXCl基因的新突变体，这些新突变体与Axenfeld-Rieger综合症的发病密切相关，从而通过检测该新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感Axenfe I d-Rieger综合症，也可以通过检测这些突变体在生物体中是否存在，可以有效地预测生物体是否易感Axenfeld-Rieger综合症。
[0025]该编码FOXCl突变体的核酸，是本申请的发明人高通量外显子组测序联合候选基因突变验证的方法确定的Axenfeld-Rieger综合症的致病基因上的新突变，在现有技术中并未被提到。
[0026]野生型FOXCl基因的cDNA如下所示:
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