专利名称：一种提前公鸡性成熟的方法目前，随着经济的发展，人民生活水平的不断提高，消费者对肉鸡及鸡蛋的消费量越来越大，从而促进了现代养鸡业的快速发展。而鸡种蛋的受精率和孵化率的高低是决定种鸡场和养鸡行业的关键一步，越来越多的研究表明，养鸡场的孵化率的高低很大程度上取决于种公鸡的受精能力，公鸡的性成熟提前对母鸡饲养效益的实现及其后代生产性能的影响极其重要。随着养殖技术的不断提高，公母分饲已经成为种鸡饲养的一种常规方法。通过提前公鸡性成熟来提高其繁殖性能，降低饲养成本，已成为养殖生产中急需解决的问题。下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)能促进腺垂体中促性腺激素(LH和FSH)的·合成和分泌。而LH和FSH直接参与调控性腺功能，包括卵泡发育、排卵、黄体生成及性激素(包括雌激素、孕激素和雄激素)的合成和分泌，从而调控机体性成熟。Kissp印tin是由KISS-I 基因编码的肽类激素，可水解为 Kisspeptin-54、Kisspeptin-14、Kisspeptin-13、Kisspeptin-IO等，其特异性受体为G蛋白偶联受体54 (GPR54)。研究发现，Kiss_l/GPR54可通过调节促性腺激素释放激素(GnRH)的分泌，从而引起性激素的分泌增加和青春期的出现，进而参与生殖调控。经体内、外实验证实，外源注射Kissp印tin可促进生殖轴激素的合成和分泌，提前哺乳动物的性早熟。Kisspeptin / GPR54系统对高等动物生殖的调控作用已成为生殖生物学研究领域的热点，但研究主要集中在人、鼠和鱼类动物，对家畜和家禽的研究甚少。我国是畜禽养殖和消费大国，其繁殖性能的生理调控意义重大，尤其是对开发利用特有的地方种质资源具有重要价值。但是禽类与哺乳动物在种属关系上相差甚远，对于适用于哺乳动物的促性早熟的方法是否也适用于禽类，特别是鸡，本发明进行了探索。
本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种提前公鸡性成熟的方法。本发明的目的可通过如下技术方案实现一种提前公鸡性成熟的方法，孵化前，对种蛋小头端进行消毒，用蟾蜍脊髓穿刺针轻轻在消毒部位钻孔，用微量进样器通过钻孔向蛋清内导入100 μ L0. 5 2ng的Kisspeptin-IO注射试剂,石腊封口。所述的Kisspeptin-IO 剂量优选 O. 5ng。Kisspeptin-IO在制备提前公鸡性成熟的药物中的应用。有益效果本发明首次将Kisspeptin-IO用于处理鸡种蛋，并优化了 Kisspeptin-IO的处理浓度，结果显示使用本发明方法蛋注Kp-IO可显著增加公鸡体重，提高公鸡精子密度，增加公鸡的性行为，对14周和24周公鸡血清中T的含量有显著影响，可见Kissp印tin-10能够显著提前公鸡性成熟。图I.蛋注Kisspeptin-IO对公鸡体重的影响。图2.蛋注Kp-IO对14周公鸡T、T3、T4含量的影响图3.蛋注Kp-IO对24周公鸡T含量的影响图4蛋注Kp-IO对公鸡性行为的影响准化饲养，饲养期间每周记录空腹体重。(2)样品采集分别于14周龄、24周龄和30周龄在公鸡的翅静脉采集血液，取血清放于-20°C待测。30周龄时采集公鸡精液，用精液稀释液稀释，在电子显微镜下用血细胞计数器观察精子数目和精子活力。30周龄时采集样品，采集前禁食12h，自由饮水，断头法取血，离心，取血清放于-20°C待测。(3)公鸡性行为观察方法本实验于2011年12月7日至12月10日进行，共4天。每天分别从三个试验组选择一只公鸡轮流放置到圈舍，同时圈舍散养成年母鸡六只，每天从下午14:00至18:00，每只公鸡录像一个小时，观察其性行为并记录。(4)主要试剂 Kissp印tin-10 购自美国 TOCRIS 公司，(Cat. No :2570,Tocris,USA,氨基酸序列为 Tyr-Asn-Trp-Asn-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-Phe-NH2);总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇试剂盒均购自北京北化康泰临床试剂有限公司；Τ、Τ3、Τ4、FT3放免测定试剂盒均购自北京北方生物技术研究所。(5)结果检测及数据处理方法血清Τ、Τ3、Τ4和FT3浓度均采用放射免疫方法测定。精子数目和精子活力统计以及行为学统计均采用SPSS18. O软件进行单因子方差分析。(6)结果蛋注Kp-IO显著增加公鸡体重。如图I所示，与对照组比较，入孵前蛋内注射O. 5ngKp-IO和2ng Kp-IO的27周公鸡体重显著增加；与蛋注O. 5ng Kp-IO比较，蛋注2ng Kp-IO对出雏27周以后公鸡体重显著增加(P〈0. 05)。蛋注Kp-IO对公鸡T、T3> T4含量的影响如图2所示，与对照组和蛋注2ng Kp-IO组比较，入孵前蛋内注射O. 5ng Kp-IO对14周公鸡血清中T的含量有显著影响(P〈0. 05)。与对照组比较，入孵前蛋内注射2ng Kp-IO和O. 5ngKp-10对14周公鸡血清中T4和T3的含量无显著性影响(P=O. 0018)。如图3所示，与对照组比较，入孵前蛋内注射2ng Kp-IO和O. 5ng Kp-IO对24周公鸡血清中T的含量有显著影响(P=O. 038，P=O. 019)。蛋注Kp-IO对显著提高公鸡精子密度。如表I所示，与对照组比较，入孵前蛋内注射O. 5ngKp-10和2ng Kp-IO的30周公鸡精子密度均显著增加(P〈0. 05);对公鸡的精子活力无影响。
表I.
精子密度108/mL精子活力%
con 5.1 ±0.642.9
0.5ngKp-10 9.2 丄 0.9**48.1
2ngKp-10 8.8 土 1.6*42.7蛋注Kp-IO显著增加公鸡的性行为。如图4所示，蛋注Kp-IO的公鸡爬跨和射精行为均显著地高于对照组(P=O. 018，P=O. 038)，且蛋注Kp-IO的公鸡交配行为有高于对照组的趋势(P=O. 11)。·


本发明属于畜牧领域，公开了一种提前公鸡性成熟的方法。一种提前公鸡性成熟的方法，孵化前，对种蛋小头端进行消毒，用蟾蜍脊髓穿刺针轻轻在消毒部位钻孔，用微量进样器通过钻孔向蛋清内导入100μL0.5～2ng/μL的Kisspeptin-10注射试剂，石蜡封口。本发明首次将Kisspeptin-10用于处理鸡种蛋，并优化了Kisspeptin-10的处理浓度，结果显示使用本发明方法蛋注Kp-10可显著增加公鸡体重，提高公鸡精子密度，增加公鸡的性行为，对14周和24周公鸡血清中T的含量有显著影响。