专利名称：一种同载尼莫司汀及其增效剂的抗癌缓释剂的制作方法关于癌症的研究虽已取得了较大进展，但其死亡率仍居各种常见死因的前列。在我国每年约有160万人患癌症，近130万人死于癌症，占总死亡人数的五分之一。癌症发病率逐年上升且呈年轻化趋势，有资料显示，在不到20年的时间里，我国癌症发病率上升了69％，死亡率增长了29.4％。据世界卫生组织最新统计，到2020年全球癌症发病率将增加百分之五十，发病人数增到一千五百万。因此，探讨一种有效的治疗癌症的方法或药物已经成为目前研究的热点。尼莫司汀(ACNU)作为新的治疗脑肿瘤的首选药物之一，而用ACNU局部缓释治疗脑肿瘤的经验更表明，局部药物缓释保证了局部用药范围内持久而较稳定的药物浓度，降低了全身药物浓度，减轻了毒副作用，给胶质瘤化疗带来了希望。之所以用ACNU，特别是局部缓释ACNU治疗脑肿瘤，其理论根据在于(1)由于受血脑屏障的限制，许多化疗药物在常规静脉化疗时不能进入脑内或药物浓度难以达到或保持长时间有效浓度，相比之下，ACNU受血脑屏障的限制较小；(2)90％的病人于手术后1年内在局部(2cm内)复发；(3)ACNU作为最常用的治疗脑肿瘤的药物，对脑肿瘤具有相对高的选择性。然而ACNU对其它肿瘤的作用尚不清楚。
许多实体肿瘤对尼莫司汀的敏感性虽然不差，但在治疗过程中容易产生耐药性。其主要原因是难于肿瘤局部获得并维持有效药物浓度。单纯提高全身给药量又受到全身毒性反应的限制。为有效提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度，人们研究了含抗癌药物的缓释系统，包括缓释微球(囊)(见(中国专利号ZL00809160.9；申请号91109723.6)、Ciftci K等“用含氟尿嘧啶的聚乳酸微球治疗实体肿瘤及药物释放的研究”《药物开发技术》(Pharm Dev Technol.)2(2)151-60，1997)、缓释植入剂(见中国专利号ZL96115937.5；ZL97107076.8)等。然而，固体缓释植入剂(中国专利号ZL96115937.5；ZL97107076.8)和现有的如用于治疗脑肿瘤(ZL00809160.9)缓释微球或美国专利(US5,651,986)均存在不容易操作、疗效差、并发症多等问题。本发明发现，本发明中提到的药物与尼莫司汀合用可使其抗癌作用相互加强(以下将能使尼莫司汀抗癌作用相互增加的药物称之为尼莫司汀增效剂)。除此之外，将尼莫司汀或尼莫司汀与其增效剂的组合包装于特定的缓释辅料中并配以特殊溶媒制成抗癌药物缓释注射剂不仅能够极大地提高肿瘤局部的药物浓度、降低药物在循环系统中的药物浓度、降低药物对正常组织的毒性，还能够极大方便药物注射、减少手术操作的并发症、降低病人的费用。尼莫司汀增效剂除能抑制肿瘤生长外，还能增加肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。本发明发现，并非所有辅料都能有效释放ACNU。药用辅料有数百种以上，具有缓释作用的药用辅料，特别是能将本发明中所选的尼莫司汀在人体或动物体内于一定的时间内缓慢释放的药用辅料必须经过大量创造性的实验才能获得，特定的缓释辅料与可被缓释药物的组合的选择需要经过大量的创造性劳动才能确定。相关数据，特别是动物体内释放特性的数据需要经过体内外大量创造性的实验才能获得，并非经过有限的实验就能确定，具有非显而易见性。局部药物缓释在保证了局部用药范围内持久而较稳定的药物浓度的同时，明显降低了全身药物浓度，减轻了毒副作用。
本发明针对现有技术的不足，发明了含尼莫司汀及其增效剂的抗实体瘤缓释剂。该治疗实体肿瘤的缓释剂，包括抗癌有效成分和药用缓释辅料。
其中抗癌有效成分为尼莫司汀(ACNU，Nimustine)与尼莫司汀增效剂的组合，尼莫司汀增效剂包括选自喜树碱的拓扑酶抑制剂、环磷酰胺和或紫杉醇。
药用缓释辅料包括下列之一或其组合外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、聚苯丙生、双脂肪酸与癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚体-癸二酸)、聚(富马酸-癸二酸)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、透明质酸、胶原蛋白、明胶和蛋白胶之一或其组合。
在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、乙醇酸和羟基羧酸的混合物、葵二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羟基羧酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和羟基羧酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是聚苯丙生[聚(1，3-二(对羧基苯氧基)丙烷-癸二酸)(p(CPP-SA))、双脂肪酸-癸二酸共聚物(PFAD-SA)]、聚(芥酸二聚体-癸二酸)[P(EAD-SA)]和聚(富马酸-癸二酸)[P(FA-SA)]等。对羧苯氧基丙烷(p-CPP)与癸二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
聚乳酸的分子量峰值可为，但不限于，5000-100,000，但以20,000-60,000为优选，以5,000-30,000为最优选；聚乙醇酸的分子量可为，但不限于，5000-100,000，但以5,000-50,000为优选，以10,000-30,000为最优选；以上聚羟基酸可单选或多选。当单选时，以聚乳酸(PLA)或羟基羧酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)为优选，共聚物的分子量可为，但不限于，5000-100,000，但以20,000-60,000为优选，以30,000-50,000为最优选；当多选时，以高分子多聚物或不同高分子多聚物组成的复合多聚物或共聚物为优选，以含不同分子量聚乳酸或癸二酸的复合多聚物或共聚物为最优选，如，但不限于，分子量为1000到30000的聚乳酸与分子量为20000到50000的聚乳酸混合、分子量为10000到30000的聚乳酸与分子量为30000到80000的PLGA混合、分子量为20000到30000的聚乳酸与癸二酸混合、分子量为30000到80000的PLGA与癸二酸混合。所用聚乳酸以左旋聚乳酸(L-PLA)为优选。左旋聚乳酸(L-PLA)粘度范围IV(dl/g)为0.2～0.8，玻璃化转变温度范围为55～65℃，熔点175～185℃。
除上述缓释辅料外，还可选用其他物质见美国专利(专利号4757128；4857311；4888176；4789724)及《药用辅料大全》(第123页，四川科学技术出版社1993年出版，罗明生和高天惠主编)中已有详细描述。另外，中国专利(申请号96115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美国发明专利(专利号5,651,986)也列举了某些药用辅料，包括充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。
为调节药物释放速度或改变本发明的其它特性，可以改变聚合物的单体成分或分子量、添加或调节药用辅料的组成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各种糖或盐等。其中糖可为，但不限于，木糖醇、低聚糖、(硫酸)软骨素及甲壳素等，其中盐可为，但不限于，钾盐和钠盐等；也可添加其它药用辅料，如但不限于，充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂、制(或致)孔剂、赋型剂或阻滞剂等。
缓释剂的一种形式是缓释注射剂，缓释注射剂的组成为(A)缓释微粒，由如下的成分组成，重量百分比抗癌有效成分0.5-60％缓释辅料40-99.5％助悬剂 0.0-30％(B)溶媒，分为普通溶媒和特殊溶媒。
其中，普通溶媒包括蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液；特殊溶媒为含助悬剂的普通溶媒，助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、吐温20、吐温40和吐温80之一或其组合。当缓释微粒(A)中的助悬剂为“0”时，溶媒(B)为特殊溶媒。
抗癌有效成分在缓释剂中的重量百分比为1-50％，5-30％为优选，10-25％为最优选。尼莫司汀与尼莫司汀增效剂的重量比为1-9∶1-5。
本发明缓释微球中缓释辅料及其重量百分比最优选如下(1)55-90％的PLA；(2)50-90％的PL6A；(3)50-85％的聚苯丙生；(4)55-90％的双脂肪酸与癸二酸共聚物；(5)55-90％的EVAc；(6)40-95％的木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、透明质酸、胶原蛋白、明胶或白蛋胶；或(7)40-95％的外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
缓释注射剂的抗癌有效成分优选下列之一，均为重量百分比(A)5-15％的尼莫司汀和85-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(B)15-35％的尼莫司汀和65-85％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(C)5-15％的尼莫司汀和85-95％的聚乳酸；(D)15-35％的尼莫司汀和65-85％的聚乳酸；(E)5-15％的尼莫司汀和85-95％的聚苯丙生；
(F)15-35％的尼莫司汀和65-85％的聚苯丙生；(G)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物和1-95％的聚苯丙生；(H)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乳酸和1-95％的聚苯丙生；(I)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乳酸和1-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(J)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乳酸和1-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物和1-95％的聚苯丙生。
缓释注射剂的抗癌有效成分进一步优选为下列之一，均为重量百分比(A)5-30％的尼莫司汀和5-20％的喜树碱；(B)5-25％的尼莫司汀和5-35％的环磷酰胺；(C)5-25％的尼莫司汀和5-25％的紫杉醇。
缓释注射剂中，药物缓释系统可制成微球、亚微球、微乳、纳米球、颗粒或球形小丸，然后与注射溶媒混合后制成注射剂使用。在各种缓释注射剂中以混悬型缓释注射剂为优选，混悬型缓释注射剂是将含抗癌成分的药物缓释系统悬浮于注射液中所得的制剂，所用的缓释辅料为上述缓释辅料中的一种或其组合，所用溶媒为普通溶媒或含助悬剂的特殊溶媒。普通溶媒为，但不限于，蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液。助悬剂的目的在于有效悬浮含药微球，从而利于注射之用。为方便注射，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)，优选1000cp-3000cp(20℃-30℃时)，最优选1500cp-3000cp(20℃-30℃时)。助悬剂选自羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40和土温80之一或其组合。
助悬剂在普通溶媒中的含量因其的特性而定，可为0.1-30％因具体情况而定。优选助悬剂的组成为A)0.5-5％羧甲基纤维素钠+0.1-0.5％土温80；或B)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土温80；或C)0.5-5％羧甲基纤维素钠+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土温80。
溶媒的制备则取决于溶媒的种类，普通溶媒有市售，也可以自制，如蒸馏水、注射用水、生理冲液、无水乙醇或各种盐配制的缓冲液，但必须严格按照有关标准。特殊溶媒需考虑到助悬剂的种类及其组成、溶媒所悬浮的药物、缓释微球(或微囊)的组成、性质及其需要量及注射剂的制备方法，如将羧甲基纤维素钠(1.5％)+甘露醇和/或山梨醇(15％)和/或吐温80(0.1％)溶于生理盐水中得相应溶媒，黏度在10cp-650cp(20℃-30℃时)。
本发明发现影响药物和/或缓释微球悬浮和/或注射的关键因素是溶媒的黏度，黏度越大，悬浮效果越好，可注射性越强。这种意外发现构成了本发明的主要指数特征之一。溶媒的黏度取决于助悬剂的黏度，助悬剂的黏度为100cp-3000cp(20℃-30℃时)，优选1000cp-3000cp(20℃-30℃时)，最优选1500cp-3000cp(20℃-30℃时)。按照此条件所制得的溶媒的黏度为10cp-650cp(20℃-30℃时)，优选20cp-650cp(20℃-30℃时)，最优选60cp-650cp(20℃-30℃时)。
注射剂的制备有多种方法，一种是将助悬剂为“0”的缓释微粒(A)直接混于特殊溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；另一种是将助悬剂不为“0”的缓释微粒(A)混于特殊溶媒或普通溶媒中，得到相应的缓释微粒注射剂；再一种是将缓释微粒(A)混于普通溶媒中，然后加入助悬剂混匀，得到相应的缓释微粒注射剂。除外，还可先将缓释微粒(A)混于特殊溶媒中制得相应的混悬液，然后用真空干燥等办法去除混悬液中的水分，之后再用特殊溶媒或普通溶媒混悬，得到相应的缓释微粒注射剂。以上方法只是用于说明而非限制本发明。值得注意的是，悬浮药物或缓释微球(或微囊)在注射剂中的浓度因具体需要而定，可为，但不限于，10-400mg/ml，但以30-300mg/ml为优选，以50-200mg/ml最优选。注射剂的黏度为50cp-1000cp(20℃-30℃时)，优选100cp-1000cp(20℃-30℃时)，最优选200cp-650cp(20℃-30℃时)。此黏度适用于18-22号注射针头和特制的内径更大的(至3毫米)注射针头。
缓释注射剂的制备方法是任意的，可用若干种方法制备如，但不限于，混合法、熔融法、溶解法、喷雾干燥法制备微球、溶解法结合冷冻(干燥)粉碎法制成微粉、脂质体包药法及乳化法等。其中以溶解法(即溶剂挥发法)、干燥法、喷雾干燥法和乳化法为优选。微球则可用于制备上述各种缓释注射剂，其方法是任意的。所用微球的粒径范围可在5-400um之间，以10-300um之间为优选，以20-200um之间为最优选。
微球还可用于制备其他缓释注射剂，如凝胶注射剂、嵌段共聚物胶束注射剂。其中，嵌段共聚物胶束由疏水-亲水嵌段共聚物在水溶液中形成，具有球形内核-外壳结构，疏水嵌段形成内核，亲水嵌段形成外壳。载药胶束注射进入体内达到控制药物释放或靶向治疗的目的。所用药物载体为上述任意一种或其组合。其中优选分子量为1000-15000的聚乙二醇(PEG)作为胶束共聚物的亲水嵌段，优选生物降解聚合物(如PLA、聚丙交酯、聚己内酯及其共聚物(分子量1500-25000))作为胶束共聚物的疏水嵌段。嵌段共聚物胶束的粒径范围可在10-300um之间，以20-200um之间的为优选。凝胶注射剂系将生物降解聚合物(如PLA、PLGA或DL-LA和ε-己内酯共聚物)溶于某些两亲性溶媒，再加入药物与之混溶(或混悬)后形成流动性较好的凝胶，可经瘤周或瘤内注射。一旦注入，两亲性溶媒很快扩散至体液，而体液中的水分则渗入凝胶，使聚合物固化，缓慢释放药物。
缓释微球还可用于制备缓释植入剂，所用的药用辅料可为上述药用辅料中的任何一种或多种物质，但以水溶性高分子聚合物为主选，在各种高分子聚合物中，以聚乳酸、葵二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物为首选，混合物和共聚物可选自，但不限于，PLA、PLGA、PLA与PLGA的混合物、葵二酸与芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物、双脂肪酸与癸二酸共聚物(PFAD-SA)、聚(芥酸二聚体-癸二酸)[P(EAD-SA)]、聚(富马酸-癸二酸)[P(FA-SA)]。聚乳酸(PLA)与聚乙醇酸的的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和乳酸共聚时的含量分别为重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是对羧苯基丙烷(p-CPP)，对羧苯基丙烷(p-CPP)与葵二酸共聚时的含量分别为重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
本发明抗癌药物缓释剂的又一种形式是抗癌药物缓释剂为缓释植入剂。抗癌植入剂的有效成分可均匀地包装于整个药用辅料中，也可包装于载体支持物中心或其表面；可通过直接扩散和/或经多聚物降解的方式将有效成分释放。
缓释植入剂的特点在于所用的缓释辅料除高分子聚合物外，还含有上述任意一种或多种其它辅料。添加的药用辅料统称为添加剂。添加剂可根据其功能分为充填剂、致孔剂、赋型剂、分散剂、等渗剂、保存剂、阻滞剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、胶凝剂等。
缓释植入剂的主要成份可制成多种剂型。如，但不限于，胶囊、缓释剂、植入剂、缓释剂植入剂等；呈多种形状，如，但不限于，颗粒剂、丸剂、片剂、散剂、球形、块状、针状、棒状、柱状及膜状。在各种剂型中，以体内缓慢释放植入剂为优选。可为0.1-5mm(粗)×1-10mm(长)的棒状，也可为片状等其它形状。
缓释植入剂的最佳剂型为生物相容性、可降解吸收的缓释剂植入，可因不同临床需要而制成各种形状及各种剂型。其主要成份的包装方法和步骤在美国专利中(US5651986)已有详细描述，包括若干种制备缓释制剂的方法如，但不限于，(i)把载体支持物粉末与药物混合然后压制成植入剂，即所谓的混合法；(ii)把载体支持物熔化，与待包装的药物相混合，然后固体冷却，即所谓的熔融法；(iii)把载体支持物溶解于溶剂中，把待包装的药物溶解或分散于聚合物溶液中，然后蒸发溶剂，干燥，即所谓的溶解法；(iv)喷雾干燥法；及(v)冷冻干燥法等。
缓释植入剂的抗癌有效成分优选如下，均为重量百分比本发明治疗实体肿瘤的缓释剂优选下列之一，均为重量百分比(A)5-15％的尼莫司汀和85-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；
(B)15-35％的尼莫司汀和65-85％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(C)515％的尼莫司汀和85-95％的聚乳酸；(D)15-35％的尼莫司汀和65-85％的聚乳酸；(E)5-15％的尼莫司汀和85-95％的聚苯丙生；(F)15-35％的尼莫司汀和65-85％的聚苯丙生；(G)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物和1-95％的聚苯丙生；(H)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乳酸和1-95％的聚苯丙生；(I)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乳酸和1-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(J)5-35％的尼莫司汀和1-95％的聚乳酸和1-95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物和1-95％的聚苯丙生。
缓释植入剂的抗癌有效成分进一步优选为下列之一，均为重量百分比(A)5-30％的尼莫司汀和5-20％的喜树碱；(B)5-25％的尼莫司汀和5-35％的环磷酰胺；(C)5-25％的尼莫司汀和5-25％的紫杉醇。
本发明药物组合物用于治疗实体肿瘤，实体肿瘤包括脑肿瘤、胶质瘤、骨肉瘤、淋巴瘤、消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤。如肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、皮肤癌、头颈部肿瘤和源于胆囊、口腔、外周神经系统、粘膜、腺体、血管、骨组织、淋巴结、眼睛、的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤。因此，本发明的应用是用于制造治疗上述肿瘤的上述各种药物制剂，其中以针剂、浑悬液、软膏、胶囊、植入剂、缓释剂及缓释植入剂为优选，以缓释注射剂、缓释植入剂、控释植入剂或迟释植入剂为最优选。
本发明治疗实体肿瘤的药物组合物中还可加入其它药用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼药、抗凝药、止血药等。由于本发明抗癌药物组合物可使常规化疗、免疫治疗、高热治疗、光化学治疗、电疗、生物治疗、激素治疗、磁疗、超声治疗、放疗及基因治疗等方法的作用效果加强。因此在局部缓慢释放的同时可与上述非手术疗法合用，从而使其抗癌效果进一步加强。当与上述非手术疗法合用时，本发明抗癌药物组合物可与非手术疗法同时应用，也可在非手术疗法实施前几天内应用，其目的在于尽可能增强肿瘤的敏感性，从而为根治各种人体及动物原发和转移实体肿瘤提供一种更有效的新的方法，具有非常高的临床应用价值及显著的经济和社会效益。
当局部应用时，该组合物可直接置于原发或转移的实体肿瘤周围或瘤体内，也可直接置于原发或转移的实体肿瘤全部或部分切除后所形成的腔内。
本发明治疗实体肿瘤的药物组合物中主要成份以生物可容性物质为支持物，故不引起异物反应。支持物体内放置后可降解吸收，故不再手术取出。因在肿瘤局部释放所含药物，从而选择性地提高并延长局部药物浓度，同时可降低由常规途径给药所造成的全身毒性反应。对实体肿瘤具有明显的治疗作用。
本发明治疗实体肿瘤的药物组合物中可通过许多方案予以实施，其目的只是为了进一步说明，并非对本发明的实施加以任何限制。
通过如下试验和实施例对本发明的技术方法作进一步的描述
试验一、尼莫司汀对肿瘤细胞生长的抑制作用。
为验证尼莫司汀对肿瘤细胞生长的抑制作用，本试验将尼莫司汀(10ug/ml)加到体外培养24小时的各种肿瘤细胞中(表1)，继续培养48小时后计数细胞总数并计算其对肿瘤细胞生长的抑制率(％)。
肿瘤细胞生长的抑制率(％)＝((对照组细胞数-试验组细胞数)/对照组细胞数)×100％表1
试验一的结果表明，与对照组相比，尼莫司汀对所试肿瘤的生长均有明显抑制作用(P＜0.05)，其中对。这一意外发现构成本发明的主要技术特征，为实体肿瘤的治疗提供了新的选择。
本发明治疗实体肿瘤的药物组合物可制成任意剂型或形状，但以植入的缓慢释放剂为优选。
试验二、不同方式应用尼莫司汀后的局部药物浓度比较以大白鼠为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至1厘米直径后将其分组。每组剂量均为5mg/kg尼莫司汀。测定不同时间肿瘤内药物含量(％)，结果表明，尼莫司汀经不同方式应用后的局部药物浓度差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂(分子量为15000-25000的PLA为辅料)的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。这一发现构成本发明的重要特征。以下的相关抑瘤试验进一步证实了这一点。
试验三、不同方式应用尼莫司汀后的体内抑瘤作用比较以大白鼠为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长至0.8厘米直径后将其分组。每组剂量均为5mg/kg尼莫司汀。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果。结果表明，尼莫司汀经不同方式应用后的抑瘤作用差异显著，局部给药能够明显提高并有效维持肿瘤所在部位的有效药物浓度，其中以瘤内放置缓释植入剂和瘤内注射缓释注射剂(分子量为30000-50000的PLGA(75∶25)为辅料)的效果最好。然而，瘤内注射缓释注射剂操作最方便、容易。不仅疗效好，毒副作用也小。
试验四、尼莫司汀(缓释注射剂)的体内抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个胰腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下7组(见表2)。第一组为对照，第2到7组为治疗组，缓释注射剂(含1-32％ACNU，分子量为20000-40000的PLA为辅料)经瘤内注射。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表2)。
表2
以上结果表明，尼莫司汀缓释注射剂对实体肿瘤具有明显的抑制作用，其作用和用药剂量有关。
试验五、尼莫司汀和尼莫司汀增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用所用的肿瘤细胞包括胰腺癌、食道癌、胃腺上皮癌(SA)、骨肿瘤(BC)、乳腺癌(BA)、肺癌(LH)、甲状腺乳头状腺癌(PAT)、肝癌等。将尼莫司汀和尼莫司汀增效剂按1∶1浓度比加到体外培养24小时的各种肿瘤细胞中，继续培养48小时后计数细胞总数。其肿瘤细胞生长抑制效果见表3所示。
表3
以上结果表明，所用尼莫司汀增效剂(环磷酰胺、喜树碱、紫杉醇)及尼莫司汀在该浓度单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。同样的效果还见于其他类型肿瘤，如脑胶质瘤、骨肉瘤、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、肠癌等。
试验六、尼莫司汀及尼莫司汀增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个肝肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下10组(见表4)。第一组为对照，第2到10组为治疗组，缓释植入剂经瘤内放置(含5-30％ACNU，分子量为30000-50000的PLGA)(50∶50)为辅料)。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表4)。
表4
以上结果表明，所用尼莫司汀对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，其抑制作用和剂量有关，当与尼莫司汀增效剂(紫杉醇)联合应用时可表现出显著的增效作用。这一发现构成本发明又一重要特征。
试验七、尼莫司汀和尼莫司汀增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个前列腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组(尼莫司汀或尼莫司汀增效剂)和联合治疗组(尼莫司汀和尼莫司汀增效剂)。缓释注射剂经瘤内注射。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表5)。
表5
以上结果表明，所用尼莫司汀及尼莫司汀增效剂(喜树碱)在该浓度单独应用时对多种肿瘤生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用，且呈明显的量效关系。
试验八、尼莫司汀和尼莫司汀增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个乳腺肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为阴性对照(空白)、单药治疗组、联合治疗组。缓释注射剂(辅料为分子量为20000-40000的PLA)经瘤内注射。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，用肿瘤生长抑制率作指标比较治疗效果(见表6)。
表6
以上结果表明，所用尼莫司汀及尼莫司汀增效剂(环磷酰胺)在该浓度单独应用时对多种肿瘤生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用，且呈明显的量效关系。这一发现构成本发明又一重要特征。
试验九、尼莫司汀及尼莫司汀增效剂(缓释注射剂)的抑瘤作用以大白鼠为试验对象，将2×105个直肠肿瘤细胞皮下注射于其季肋部，待肿瘤生长14天后将其分为以下10组(见表7)。第一组为对照，第2到10组为治疗组，缓释植入剂经瘤内放置(含5-30％ACNU，分子量为20000-40000的PLGA(50∶50)为辅料)。治疗后第20天测量肿瘤体积大小，比较治疗效果(见表7)。
表7
以上结果表明，所用尼莫司汀增效剂(喜树碱)对肿瘤细胞生长均有抑制作用，其抑制作用和剂量有关，当与尼莫司汀联合应用时可表现出显著的增效作用。这一发现构成本发明又一重要特征。
试验十、不同分子量聚乳酸制成的尼莫司汀缓释植入剂的体内释放比较以大白鼠为试验对象，分组(3只/组)并于皮下给予含不同分子量(MW)的聚乳酸(PLA)承载的等量尼莫司汀缓释植入剂。然后分别于1、3、7、14、21、28和35天测药物于植入剂内的剩余量，进而得出其体内释放速度(％)。结果表明，分子量为20000的释放为1天(10％)、3(26％)、7(54％)、14(80％)、21(90)、28(92)和35(94％)。比较不同分子量聚乳酸制成的尼莫司汀缓释植入剂的体内释放发现，随分子量增加而变慢，以第7天为例，与全身给药组相比，肿瘤抑制率随聚乳酸分子量增加而提高，依次为66％(MW5000)、64％(MW15000)、58％(MW25000)、54％(MW40000)和46(MW60000)。
同样的结果还见于用聚乳酸为辅料制成的药物缓释剂，含有尼莫司汀及其增效剂的组合。
特别注意的是，本发明的缓释剂，特别是缓释注射剂操作简单方便、重复性好。不仅疗效好，毒副作用小。
不同的药物包装与不同的生物降解高分子的是要特性不同。进一步的研究发现，最适宜于本发明药物缓释的缓释辅料为外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、单甲基聚乙二醇/聚乳酸、单甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、聚苯丙生、双脂肪酸与癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚体-癸二酸)、聚(富马酸-癸二酸)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲壳素、透明质酸、胶原蛋白、明胶、白蛋白胶之一或其组合。上述缓释辅料制成的缓释制剂无明显的药物突释现象；最适宜的助悬剂为甲基纤维素、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、土温20、土温40、土温80之一或其组合。
总之，所用尼莫司汀和各种尼莫司汀增效剂单独应用时对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，当联合应用时可表现出显著的增效作用。因此，本发明所述的有效成分为尼莫司汀与任意一种尼莫司汀增效剂。含有以上有效成分的药物可制成缓释微球，进而制成缓释注射剂和植入剂，其中以与含助悬剂的特殊溶媒组合形成的混悬注射剂为优选。
缓释注射剂或缓释植入剂还可通过以下实施方式得以进一步说明。上述实施例及以下实施例只是对本发明作进一步说明，并非对其内容和使用作任何限制。

实施例一将90mg的药用辅料分子量为20000-40000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入10mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的含药固体组合物冷冻粉碎制成含含重量百10％尼莫司汀的的微粉，然后悬浮于含1.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为360cp-480cp(25℃-30℃时)。皮下释药时间为25-30天。
实施例二将75mg的药用辅料分子量为30000-50000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入25mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比25％尼莫司汀的治疗实体肿瘤的抗癌体内植入剂。皮下释药时间为35-40天。
实施例三将95mg的药用辅料分子量为25000-40000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入5mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比5％尼莫司汀的治疗实体肿瘤的抗癌体内植入剂。皮下释药时间为30-40天。
实施例四如实施例一到三所述，所不同的是组分为下列之一，均为重量百分比(A)5％的尼莫司汀和95％的聚乳酸；(B)10％的尼莫司汀和90％的聚乳酸；(C)20％的尼莫司汀和80％的聚乳酸；(D)35％的尼莫司汀和65％的聚乳酸；实施例五将称重85mg的药用辅料分子量为15000-35000的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA，50∶50)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入15mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的含药固体组合物冷冻粉碎制成含含重量百分比15％尼莫司汀的的微粉，然后悬浮于含1.0％羧甲基纤维素钠和5％甘露醇的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为420cp-480cp(25℃-30℃时)。大鼠皮下释药时间为40-45天。
实施例六将称重90mg的药用辅料分子量为25000-50000的PLGA(50∶50)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入10mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比10％尼莫司汀的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。大鼠皮下释药时间为45-50天。
实施例七将称重80mg的药用辅料分子量为20000-40000的PLGA(75∶25)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入20mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比20％尼莫司汀的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。大鼠皮下释药时间为50-55天。
实施例八如实施例五到七所述，所不同的是组分为下列之一，均为重量百分比(A)5％的尼莫司汀和95％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(B)10％的尼莫司汀和90％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；
(C)15％的尼莫司汀和85％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(D)20％的尼莫司汀和80％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物；(E)35％的尼莫司汀和75％的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物。
实施例九将称重95mg的药用辅料分子量为35000-55000的乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)放入容器中，加有机溶剂100毫升二氯甲烷溶解混匀，加入5mg尼莫司汀，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比5％尼莫司汀的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。大鼠皮下释药时间为35-45天。
实施例十如实施例九所述，所不同的是组分为下列之一，均为重量百分比(A)10％的尼莫司汀和90％的EVAc；(B)15％的尼莫司汀和85％的EVAc；(C)20％的尼莫司汀和80％的EVAc；(D)25％的尼莫司汀和75％的EVAc；(E)30％的尼莫司汀和70％的EVAc；实施例十一将80mg聚苯丙生(对羧苯基丙烷∶葵二酸重量比为50∶50)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入10mg尼莫司汀和10mg喜树碱，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的含药固体组合物冷冻粉碎制成含重量百分比10％尼莫司汀和10％喜树碱的微粉，然后悬浮于含2.5％羧甲基纤维素钠的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为400cp-520cp(25℃-30℃时)，在体外生理盐水中的释药时间为2030天，在小鼠皮下的释药时间为25-35天。
实施例十二如实施例十一所述，所不同的是组分为下列之一，均为重量百分比(A)5％的尼莫司汀和35％的喜树碱；(B)10％的尼莫司汀和25％的喜树碱；(C)15％的尼莫司汀和15％的喜树碱；(D)20％的尼莫司汀和10％的喜树碱；(E)25％的尼莫司汀和5％的喜树碱。
实施例十三将称重80mg的药用辅料分子量为20000-40000的PLGA(50∶50)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入10mg尼莫司汀和10mg环磷酰胺，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比10％尼莫司汀和10％环磷酰胺的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。该体内植入剂在体外生理盐水中的释药时间为20-30天，在小鼠皮下的释药时间为30-40天。
实施例十四将称重80mg的药用辅料分子量为40000-60000的PLGA(75∶25)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入15mg尼莫司汀和5mg紫杉醇，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比15％尼莫司汀和5％紫杉醇的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。该体内植入剂在体外生理盐水中的释药时间为15-25天，在小鼠皮下的释药时间为25-30天。
实施例十五将称重80mg的药用辅料分子量为20000-40000的PLA放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入5mg尼莫司汀和15mg喜树碱，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比5％尼莫司汀和15％喜树碱的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。该体内植入剂在体外生理盐水中的释药时间为15-25天，在小鼠皮下的释药时间为30-35天。
实施例十六如实施例十三到十五所述，所不同的是组分为下列之一，均为重量百分比(A)5％的尼莫司汀和35％的紫杉醇；(B)10％的尼莫司汀和25％的紫杉醇；(C)15％的尼莫司汀和15％的紫杉醇；(D)20％的尼莫司汀和10％的紫杉醇；(E)25％的尼莫司汀和5％的紫杉醇。
实施例十七将称重80mg的药用辅料分子量为20000-40000的PLGA(50∶50)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入10mg尼莫司汀和10mg环磷酰胺，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比10％尼莫司汀和10％环磷酰胺的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。该体内植入剂在体外生理盐水中的释药时间为15-25天，在小鼠皮下的释药时间为25-40天。
实施例十八将称重80mg的药用辅料分子量为40000-60000的PLGA(75∶25)放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入15mg尼莫司汀和5mg环磷酰胺，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的含药固体组合物冷冻粉碎制成含重量百分比15％尼莫司汀和5％环磷酰胺的的微粉，然后悬浮于含5％甘露醇的生理盐水中，制得相应的混悬型缓释注射剂，黏度为480cp-540cp(25℃-30℃时)，在体外生理盐水中的释药时间为25-30天，在小鼠皮下的释药时间为30-40天。
实施例十九将称重80mg的药用辅料分子量为20000-40000的PLA放入容器中，加入100毫升二氯甲烷溶解混匀后，加入5mg尼莫司汀和15mg环磷酰胺，重新摇匀后真空干燥去除有机溶剂。将干燥后的固体组合物立即成形，分装后射线灭菌，得到含重量百分比5％尼莫司汀和15％环磷酰胺的治疗实体肿瘤的药物组合物，做为抗癌体内植入剂。该体内植入剂在体外生理盐水中的释药时间为15-20天，在小鼠皮下的释药时间为20-30天。
实施例二十如实施例十七到十九所述，所不同的是组分为下列之一，均为重量百分比(A)5％的尼莫司汀和35％的环磷酰胺；(B)10％的尼莫司汀和25％的环磷酰胺；(C)15％的尼莫司汀和15％的环磷酰胺；(D)20％的尼莫司汀和10％的环磷酰胺；(E)25％的尼莫司汀和5％的环磷酰胺。
实施例二十一如实施例一到实施例十九所述的治疗实体肿瘤的药物组合物，所不同的是所用药用辅料选自下列之一或其组合a)分子量为5000-15000、10000-20000、25000-35000或30000-50000的聚乳酸(PLA)；b)分子量为5000-15000、15000-35000、35000-45000或45000-80000的聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物(PLGA)；c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)；d)聚苯丙生(对羧苯基丙烷(p-CPP)∶葵二酸(SA)共聚物)，对羧苯基丙烷(p-CPP)与葵二酸(SA)的重量百分比为10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40；e)木糖醇、低聚糖、甲壳素、钾盐、钠盐、透明质酸、胶原蛋白、明胶或白蛋白。
所用的助悬剂分别为下列之一或其组合
a)0.5-3.0％羧甲基纤维素(钠)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物质；e)0.1-0.5％吐温20。
另外，肿瘤内植入尼莫司汀缓释植入剂对胶质瘤、骨肿瘤、淋巴瘤、胃癌、膀胱癌、睾丸癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肾癌及前列腺癌等其它实体肿瘤也具有很好的治疗作用，其作用明显超过尼莫司汀腹腔注射组和尼莫司汀局部注射组。这一意外发现构成本发明的主要技术特征，为实体肿瘤的治疗药物提供了又一新的选择。


一种治疗实体瘤的尼莫司汀缓释注射剂含缓释辅料和抗癌有效成分组成，抗癌有效成分组成包括尼莫司汀或尼莫司汀与其增效剂(紫杉醇、喜树碱或环磷酰胺)的组合。缓释注射剂的的黏度为10cp－650cp(20℃－30℃时)。其抗癌有效成分还可制成缓释植入剂。缓释辅料主要为生物可容性可降解吸收的高分子多聚物，在其降解吸收的过程中能将抗癌有效成分效缓慢释放于肿瘤局部，因此在明显降低其全身毒性反应的同时还可于肿瘤局部维持有效药物浓度。肿瘤局部放置该抗药物组合物不仅能够降低抗癌有效的全身毒性反应，同时还能选择性地提高肿瘤局部的药物浓度，增强化疗药物及放射治疗等非手术疗法的治疗效果。实体肿瘤包括胶质瘤、骨肉瘤、淋巴瘤、肺癌、肠癌、乳腺癌等。