专利名称：标本兼治型白癜风遮盖液及制备方法白癜风是一种常见的后天性色素缺失性皮肤病，发病率约为_2%，是世界皮肤病三大顽症之一。白癜风病因复杂，其发病机理目前尚未完全明确。直接病因为皮肤和毛囊的黑色素脱失所引起，临床上易于诊断而难于治疗。白癜风症状表现为皮肤出现局限性或泛发性白斑，白斑形态不一，可以发生在身体任何部位，一般多发生于皮肤外露及易受摩擦的部位，如颜面部、颈部、前臂、手背、小腿、腰腹部等。虽然白癜风基本不影响患者的身体健康和生理活动，但由于本病造成的皮肤损害直接影响患者的外观容貌，给他们带来了极大的精神压力和心理负担，在生活、学习、工作、社交等方面都带来了许多负面影响。虽然白癜风很难治愈，但是治疗方法还是比较多的。目前多采用综合疗法、局部与整体结合疗法、中西医结合疗法、药物理疗结合疗法等多种方法，旨在提高治疗效果，减少副作用。但目前治疗白癜风的良药极少，疗效不满意。为了减轻白癜风患者生理与心理的痛苦，市场需要研制开发一种具有遮盖美容效果的化妆性治疗药物，以满足患者的生理心理需求，减轻患者痛苦。天然植物提取物有效成分和天然色素在白癜风治疗和遮盖方面具有较佳的效果，因此，开发此类白癜风遮盖产品具有良好的前景，对患者是十分有益和必要的。
本发明的目的是提供一种白癜风遮盖剂，它具有遮盖白斑和促黑素生成的功能， 具有标本兼治、使用安全的特点。具体的技术解决方案如下(同权利要求书)本发明配方中的无花果叶是桑科植物无花果的叶，主要成分为补骨脂素、佛手柑内酯、β-谷留醇、β-香树脂醇和蛇麻脂醇；又含棕榈酸、缬草酸、愈疮木酚、廿八烷、芸香甙；另含呋喃香豆精类，接触人的皮肤，可对光敏感；具有解毒消肿、行气止痛功效。浮萍是浮萍科植物紫背浮萍或青萍的全草，在我国是常见的水面浮生植物；主要成分为红草素、牡荆素等黄酮类化合物，还含有胡萝卜素、叶黄素、醋酸钾、氯化钾、碘、溴脂肪酸等物质。橙皮乙醇浸出物具有使黄褐色素沉积于皮肤的作用。氯化铜中的铜离子是黑色素合成过程中促进多种催化酶活性的重要金属离子。丝瓜水中含丰富的维生素如维生素Α、维生素E等，还含有多种氨基酸和矿物元素，如钙、磷、锌、铜、铁等，并含有过氧化氢酶、超氧化歧化酶、泄根酸等，具有保湿、抗老祛皱、消炎、防止毛细血管出血等功能；丝瓜水中有多种三萜皂苷， 能软化皮肤，强化细胞活力，刺激上皮细胞的分裂，加速皮肤细胞的再生；丝瓜水中的铜能直接参与人体色素的代谢过程，升高皮肤酪氨酸酶活性，催化酪氨酸形成黑色素而致皮肤色素沉着。药理药效学试验研究表明，本发明白癜风遮盖液具有遮盖白斑、激活黑素细胞酪氨酸酶活性、促进黑素细胞内黑色素生成的功效；局部刺激性实验安全性评价研究表明本发明安全，无皮肤刺激、过敏等不良反应。白癜风患者试用结果表明本发明具有遮盖白斑、 促黑素生成功能，使用安全无副作用。下面是本发明的药理药效学及局部刺激性安全性评价实验及数据实验一采用实验性白癜风豚鼠动物模型。取豚鼠30只，用电动剃毛刀剃去背部毛面积km X 4cm0随机分为3组正常对照组、模型对照组、白癜风遮盖液组，每组10只。 模型对照组、白癜风遮盖液组在脱毛区涂5%过氧化氢1ml，每天2次，连续30天，建立实验性白癜风动物模型；正常对照组在脱毛区涂等量纯化水，每天2次，连续30天。在此期间， 各组豚鼠每3天脱毛一次。造模成功后，白癜风遮盖液组各只豚鼠分别外涂本发明白癜风遮盖液lml，涂抹后观察15天。实验结果表明，正常对照组豚鼠皮肤毛色不变；模型对照组豚鼠皮肤明显苍白，有的出现白斑，脱屑程度较严重；白癜风遮盖液组豚鼠于涂抹本发明后 2-4小时皮肤颜色开始产生变化，8-M小时皮肤呈棕褐色，较接近正常对照组，颜色可维持 5-15 天。实验二 酪氨酸酶活性测定将本发明白癜风遮盖液0. 5ml用l/15mol/L pH 6. 8 磷酸缓冲液0. 5ml稀释后，与蘑菇酪氨酸酶100μ 1(60U)混合，25°C孵育10分钟，加3mol/ L L-多巴反应液anl，继续孵育2分钟，立即于分光光度计475nm处测光吸收值A值。另设蒸馏水空白对照组，于分光光度计475nm处测光吸收值A值。两组生物化学反应实验均重复10次。酪氨酸酶激活率按下列公式计算激活率(％ ) = (A药-A空)/A空X 100%。 结果表明，酪氨酸酶激活率为78. 33士 11. 46%。说明本发明白癜风遮盖液具有激活酪氨酸酶活性的作用。实验三体外培养正常表皮黑素细胞，将传代(第二代)黑素细胞计数按种于6个培养瓶中，确保每瓶细胞数相同，另设1瓶为空白对照组。6个培养瓶中分别加入本发明白癜风遮盖液100 μ 1，200 μ 1，400 μ 1，600 μ 1，800 μ 1，1000 μ 1，培养3天。消化细胞，重新按种于96孔板(每孔细胞数2 XlO3)。采用氢氧化钠溶解法测定细胞黑素含量，每孔加入 100 μ 1 lmol/L的氢氧化钠，37°C保温1小时，测其在450nm处的吸光度值，绘制黑素标准曲线，计算黑素含量。结果表明(见表1)，与空白对照组相比，白癜风遮盖液可使黑素细胞内黑素含量明显升高。说明本发明具有促进黑色素生成的作用。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色测定细胞增殖活力，将细胞接种于96孔板(每孔细胞数为2X IO3)，仍用上述6种药物剂量培养3天后，吸出培养液，于每孔加入MTT溶液100 μ 1于37V反应4小时，弃去MTT，每孔加入100 μ 1 DMSO并振荡10分钟，充分溶解结晶物，490nm处测定吸光度A值，实验结果用细胞增殖率表示(实验组A值/对照组A 值X100)。结果表明(见表2)，与空白对照组相比，白癜风遮盖液可使黑素细胞增殖率明显升高。说明本发明具有促进黑素细胞增生的作用。以L-Dopa为底物，采用体外氧化多巴反应方法测定黑素细胞酪氨酸酶活性。将细胞接种于96孔板(每孔细胞数为2X IO3)，仍用上述6种药物剂量培养72小时后，收集细胞，离心弃去上清液，用0.0111101/1的？85洗2次，加入20(^1^ 0. 1% TritonX-100裂解液，置于_80°C冰箱中0. 5小时，37°C水浴箱中复温0. 5小时，加2mg/mL L-Dopa 400 μ L，继续37°C孵育2小时，分光光度计读取450nm处吸光度A值，用L-Dopa的自动氧化进行校正。 重复3次。实验结果用酪氨酸酶活性(％)=(用药组A值-空白对照组A值)/空白对照组A值X100%表示。结果表明(见表3)，与空白对照组相比，白癜风遮盖液对黑素细胞酪氨酸酶活性具有显著的增强作用。酪氨酸酶是一种含铜酶，是哺乳动物细胞中黑素生成的关键酶。说明本发明可通过激活黑素细胞酪氨酸酶活性，促进黑素细胞内黑色素的生成。表1.对黑素细胞内黑素含量的影响本发明涉及标本兼治型白癜风遮盖液。该制剂由下列重量份的原料制成无花果叶50-100份、浮萍50-100份、橙皮50-100份、75％乙醇200-300份、氯化铜10-20份、丝瓜水700-800份。制备操作步骤如下将无花果叶、浮萍、橙皮分别在水中浸泡、晾干、切成细丝，再将三种细丝充分混合均匀；加入75％乙醇溶液浸泡48小时，滤去药渣，即得色素溶液；将氯化铜加入至所述色素溶液中，充分混合均匀；再加入丝瓜水，充分混合均匀，即得。此白癜风遮盖液既有天然色素遮盖皮肤白斑的功效，又有天然植物浸提物激活黑素细胞酪氨酸酶活性而促进黑色素生成的作用，因此对白癜风具有标本兼治的作用；且使用安全，无不良反应。