促性腺激素制作方法

S·弗兰克斯, S·希利尔

2002年6月5日

2000年5月5日

1999年5月7日

应用研究系统Ars股份公司

A61K38/24GK1352566SQ00807180

促性腺激

1.LH和/或其具有生物活性的类似物在制备诱导不排卵妇女卵泡发生的药剂中的应用，其中，日剂量范围是100-1500IU2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述LH是r-hLH3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述日剂量范围是200-800IU4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述日剂量范围是225-450IU5.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，使用FSH和/或其具有生物活性的类似物制备上述药剂6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述LH对FSH的IU比值范围是1.5∶1到20∶17.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述比值范围是1.5∶1到10∶18.LH和FSH和/或其具有生物活性的类似物在制备诱导妇女卵泡发生的药剂中的应用，其中，LH对FSH的IU比值范围是1.5∶1到20∶19.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药剂用来诱导妇女的卵泡发生，LH的日剂量范围是100-1500IU10.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，使用相等剂量的hCG和/或其具有生物活性的类似物替换LH和/或其具有生物活性的类似物11.如前述权利要求中任一项所述的应用，其特征在于，所述药剂用于诱导妇女产生少量卵泡或单一卵泡12.一种含有LH(或相等剂量的hCG)和FSH和/或其具有生物活性的类似物的制品，该制品是用于同时、依次或分开地诱导妇女的卵泡发生的合剂，其中，LH(或相等剂量的hCG)与FSH和/或它们具有生物活性的类似物之IU比值范围是1.5∶1到20∶113.权利要求12所述的制品，其特征在于，所述比值范围是1.5∶1到20∶114.如权利要求13所述的制品，其特征在于，所述比值范围是1.5∶1到10∶115.如权利要求12、13或14所述的制品，其特征在于，所述制品含有375IU的r-hLH(或相等剂量的hCG)和37.5IU的r-hFSH16.如权利要求12、13或14中任一项所述的制品，其特征在于，所述制品用于诱导妇女产生少量卵泡或单一卵泡

本发明涉及促性腺激素在治疗妇女不排卵症中的应用具体而言，本发明涉及利用黄体生成素(LH)诱导不排卵妇女排卵时促进卵泡发育，特别是少量卵泡和单卵泡的发育促性腺激素被广泛应用于治疗WHO I类和WHO II类不排卵妇女的临床实践中(World Health Organization Technical Report 514，1973)通常，每天给予75-150IU的hMG(人绝经促性腺素)或u-hFSH(人尿促卵泡素)可诱导卵泡发生几天之后(通常为5天)增加该剂量，每次增加75 IU所给予的剂量很少超过450 IU/天当出现至少一个平均直径至少为18mm的卵泡和两个以下平均直径至少为16mm的卵泡时，给予高剂量(例如5000 IU)的hCG(人绒毛膜促性腺素)以诱导排卵已成功使用此“常规方案”20年以上然而，该方案带有些风险，主要是对多囊卵巢疾病患者(PCOD)而言这些风险包括卵巢刺激过多综合症(OHSS)的发生和相对高的发病率的多胎妊娠(multiple pregnancy)(Schenker等人，Fertil.Steril.，35105-123(1981))在英国，虽然大多数的多胎妊娠是双胞胎，但是有三份之一的多胞胎是源于排卵的诱导(Levene等人，Br.J.Obstet.Gynacol.，99607-613(1992))在超声波(US)治疗和血清雌二醇(E2)的评估过程中进行小心的监测可减少这些风险，但还不能完全防止所有患者的发病这些问题直接关系到难于获得单个优势卵泡的生长而导致了非生理的多卵泡发育在过去的10年里，为了进一步减少促性腺激素治疗的并发症，已设计了一种新的方案(即“长期低剂量方案”)并进行了试验〔Seibel等人，Int.J.Fertil.，29338-339(1984)；Buvat等人，Fertil.Steril.，52553-559(1989)；Hamilton-Fairley等人，Human Reprod，61095-1099(1991)；Sagle等人，Fertil Steril.，5556-60(1991)；Shoham等人，Fertil.Steril.，551051-1056(1991)；Meldrum，Fertil.Steril.，551039-1040(1991)〕这个方案从低剂量的FSH或hMG(75 IU/天)开始，并且在治疗的头7天、较佳14天不调整该剂量如果需要调整剂量，每次增加的量仅为37.5IU另外，接着的各次增加仅在进行给定剂量治疗的7天后进行长期低剂量方案的意思就是找出促进单卵泡发生所必需的FSH最低阈值迄今为止已公开了令人鼓舞的结果，该结果显示，这种方法减少了排卵前卵泡的平均数量、排卵前E2的平均水平和黄体中期卵巢的大小然而，尽管应用了该长期低剂量方案，由于超响应的原因(如出现3个以上平均直径为16mm或更多的卵泡)，一些治疗周期仍不得不被取消另外，当与常规方案比较时，多胎妊娠比率虽然有明显的改进，但仍高于自发受孕周期的比率，即相对于自发周期的1.5％，诱导排卵的比率为5-10％这是由于单一的排卵前卵泡的发育仅仅在大约2/3-3/4的诱导周期中获得，而在给予hCG那天评估排卵前卵泡数量时，通常没有考虑到具有15mm或小于15mm平均直径的卵泡〔Buvat等人，Fertil.Steril.，52553-559(1989)；Hamilton-Fairley等人，Human ReprodtReproduction 61095-1099(1991)〕然而，并不清楚在给予hCG的那天，具有14-15mm甚或更小直径的卵泡是否将被排出并导致健康的可受精卵母细胞的释放因而，需要改进FSH诱导的卵泡发育治疗，在该改进的方案中减少了多胎妊娠的比率和周期的删减窦卵泡的生长由FSH诱导一些卵泡进入生长期，但其生长在达到排卵前的完全成熟期之前被退化和闭锁中断，这种现象一直持续到绝经期〔Hillier，Hum.Report，9181-191(1994))在该生长期期间，如果卵泡被放置在足量浓度的FSH中，任何卵泡可从闭锁中被救护防止卵泡闭锁和促进其进一步生长的FSH水平称为“FSH最低阈”水平〔Brown，Aus.NZJ.Obstet.Gynecol.，1847-55(1987)〕该FSH最低阈水平随时间而改变，在给定的时间点，正处于生长期的卵泡有不同的FSH最低阈水平这就是“长期低剂量”方案的合理基础使用FSH渐进和谨慎增加的剂量来寻找最小数量卵泡的最低阈水平，并有希望获得单排卵已知黄体生成素(LH)也在卵泡显性和单排卵现象中起作用实际上，虽然在卵泡发生过程中，一些LH对于雌激素的合成是必要的，但是有证据表明过度暴露于LH中将引发卵泡闭锁和抑制粒层增殖因而，发育的卵泡对LH刺激表现出有限的需要，超过了该限度，正常的卵泡发育将停止这就是“LH最高限度”概念〔Hillier，Hum.Reprod，9181-191(1994)〕人们认为，在给定的时间点正处于生长期的卵泡具有不同的LH最高阈值可认为较成熟的卵泡比之较少成熟卵泡对LH的闭锁作用更具抵抗力已报道单独使用FSH或采用递升方案的hMG治疗WHO I类不排卵的两个例子〔Glasier等人，Journal of Endocrinology，119A-159(1988)〕相对于hMG周期，“单独使用FSH”周期有多得多的成熟卵泡，这可能是对LH在次生卵泡的闭锁中起作用的支持后来公开了两个比较研究在第一个交叉研究的10例促性腺激素分泌不足的妇女中，记录了排卵前E2水平的显著不同，但没有记录卵泡数量〔Couzinet等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.，66552-556(1988)〕在另一对9例促性腺激素分泌不足的妇女的交叉研究中，报道了在给予hCG的当天具有超过16mm平均直径的卵泡的平均数值为2.0〔0.7在hMG治疗周期，1.2在FSH治疗周期，Shoham等人，Fertil.steril.，551051-1056(1991)〕没有较小卵泡的数量的资料最近，已公开了给予其血清FSH、LH和雌二醇浓度低到不可测量的患者以150 IU hFSH(人FSH)和75 IU r-hLH(重组人LH)的结果〔Hall等人，The Lancet.，344(8918)334-335(1994)〕与单独给予hFSH相比，一起给予r-hLH和hFSH导致E2水平的提高和直径为10mm以上的卵泡的数量的减少然而，大卵泡的数量还是足够多，这意味着意想不到的高多胎妊娠比率另一研究比较了在子宫内着床前用FSH治疗以刺激多卵泡发育的正常排卵的妇女给予r-hLH(300 IU/天或750 IU/天)和r-hFSH的效果〔Sullivan等人，Journal ofClinical Endocrinology and Metabolism，84，228-232，(1999)〕其结果显示，虽然没有测量卵泡的数量和大小，但接受了LH的妇女的血清E2水平提升了，并且接受750 IU/天的组发生了多胎妊娠本发明一方面提供LH和/或其生物活性类似物在制备诱导不排卵妇女卵泡发生的药剂中的应用，其日剂量范围是100-1500IU本文所用的“IU比值”是指一种组分与另一种组分IU数量的比值很明显，促性腺激素现在可以用(mass/μg)表示而不用生物学的IU表示在这种情况下，必须使用一个换算因子来将新的值折算成IU出于便利，下文涉及LH、FSH和hCG的物质都包括它们的具有生物活性的类似物本发明者已发现以100-1500 IU/天的剂量给予LH能促进少量卵泡发育，这即是说，与LH的给予剂量不是100-1500 IU/天的周期相比，该给药方案能使进行卵泡诱导治疗的患者的每个治疗周期的排卵前卵泡的数量减少根据本发明给予LH能诱导单卵泡发生，即单一的排卵前卵泡的发育已发现200-800 IU/天的剂量、更佳225-450 IU/天的剂量有特别的疗效多卵泡发育的减少能减少由于过多卵泡发育而被删减的周期数量，即当存在过多数量的卵泡时能不删减那些周期，使得排卵诱导过程更有效另外，也可减少多胎妊娠和OHSS的发病率所需的日剂量可以以单一剂量的形式每天给予因而，该药剂的包装可以仅仅提供日剂量的LH，如包装在单位剂量容器中(如小瓶)然而，LH在当天可分两次或多次给药这种情况也是可能的，但条件是当天给予的LH的总量等于该日剂量，从而药剂也作相应的包装，即包装在多剂量容器中LH隔天给药或以更长的时间间隔给药也是可能的这些决定将由给药的医生作出，并将依赖于如患者体质指数(BMI)、病史、接受LH时卵泡的发育期、新陈代谢、对治疗的应答、药剂的半衰期等参数采用常规的方案或上述长期低剂量方案或其他的方案，给予不排卵妇女以FSH通常可诱导卵泡发生LH应在恰当的卵泡发育期给予，如卵泡发育的中期至后期该时期可由给药的医生决定，并可依赖于诱导排卵的方式当至少一个单卵泡的平均直径达到8mm时、或者当至少一个卵泡的平均直径为10-15mm(较佳11-14mm)时、或者当超过3个卵泡的平均直径为8-13mm且没有比它们更大的卵泡时，通过实施例可判断恰当的卵泡发育期已经到达当给予高剂量的hCG诱导排卵时，通常终止LH的给药而且，给予hCG以诱导排卵的时间选择可由医生决定例如，当直径为18mm以上的卵泡至少有一个以及直径为11mm以上的卵泡不超过3个(较佳为2)时可以给药仅当要求的卵泡发育期达到时才可给予LH在这种情况下，可以完全停止给予FSH或可以用与先前一样或低于或高于的剂量继续给药如果继续给予FSH，但其剂量比先前少，那么其剂量低于LH的剂量或者，可以常规方案或长期低剂量方案的方式同时给予LH，即在卵泡发育达到恰当时期之前给药当要求的卵泡发育期达到时，如果LH是以适当的剂量给予，可停止给予FSH或者以与以前一样剂量、或者低或高于以前的剂量给药或者，可配置该药剂，使它可用在取代常规方案或长期低剂量方案的方法中因而，FSH和/或其具有生物活性的类似物可用在药剂的制备中在这个实施例中，LH对FSH的IU比值较佳为1.5∶1到20∶1该范围更佳为1.5∶1到10∶1当该药剂用于恰当的卵泡发育期达到后的给药，LH∶FSH的IU比值可为10∶1该药剂更佳的日剂量是375IU的r-hLH和37.5IU的r-hFSH本发明的第二方面提供LH和FSH和/或它们的具有生物活性的类似物在制备诱导妇女卵泡发生的药剂中的应用，LH对FSH的IU比值范围是1.5∶1到20∶1本发明第一和第二方面的应用可改为LH被相当剂量的hCG和/或其具有生物活性的类似物所取代本文所用的人绒毛膜促性腺素(hCG)的“相当剂量”指在Vab Hell生物测定药典中(Van Hell H.，等人Effects of human menopausal gonadotrophin preparations indifferent bioassay methods，Acta Endocrin.，47409-418，1964)1 IU hCG相当于5-7 IU LH出于便利，本文涉及的黄体生成素(LH)包括hCG，LH的剂量包括hCG的相当剂量本发明的第三方面提供作为组合制剂的制品，为同时、依次或分开使用于诱导妇女卵泡发生，该制品含有LH(或相当剂量的hCG)和FSH和/或它们的具有生物活性的类似物，LH(hCG)对FSH的IU比值范围是1.5∶1到20∶1与本发明第二和第三方面一致，可以给予不排卵妇女以LH或hCG和FSH，较佳是该过程持续整个周期直到给予高剂量hCG产生的排卵诱导为止或者，可在卵泡发育达到恰当的时期时给予LH或hCG和FSH本发明还提供了一种诱导不排卵妇女卵泡发生的方法，该方法包括给予100-1500 IU/天的LH或其具有生物活性的类似物，或者给予相当剂量的hCG或其具有生物活性的类似物可从自然资源(如从尿、垂体或胎盘中分离)获得LH、FSH和hCG，或者可采用重组DNA技术获得(见WO85/01959和Loumaye等人，Human Repord，1195-107，1996)它们的生物活性类似物包括肽类似物、非肽类似物和嵌合体本发明较佳使用人LH和FSH用于本发明的化合物常常与药学和/或兽医可接受的载体制成任何方途径的给药方式较佳的是，该化合物被制成肠道外给药的方式较佳的是，皮下给予LH和FSH(存在时)，优选经前腹壁给药肠道外给药的制剂通常是无菌的适合于肠道外给药的药学制剂包括水和非水无菌注射溶液，该溶液含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使该制剂与预期受体的血液等渗的溶质；水和非水无菌悬浮夜可包括悬浮剂，稠化剂也在本发明的范围之内该制剂可存在于单位剂量容器和多剂量容器中，例如，密封的安瓿和小瓶，且该制剂可保存在冷冻干燥的(冻干的)条件下，需要时仅需在使用前加入无菌的液体载体，例如用于注射的水临时的注射溶液和悬浮液可由无菌的粉末、颗粒和药片制得该制剂可通过预充满的注射器、自动注射器或多剂量的自动注射器给药口服和其他肠内给药的制剂不需是无菌的，可以是单位剂量或多剂量的形式口服的制剂可以是固体的形式，如粉末、颗粒、药片、胶囊(例如硬的或软的凝胶胶囊)或锭剂；或者是液体的形式，如糖浆或酏剂可适当地存在填充物和/或载体，药学制剂领域中熟练的人员能提供这些可能需要的或理想的额外的或可选择的赋形剂增香剂是其中的一个例子口服的任何制剂可制成肠抗性的，以避免和减轻可能在胃中或小肠进端部分发生的化合物的消化，从而将该制剂传送到小肠药片和胶囊可以是包有肠溶衣的，例如通过常规的方法进行液体制剂可有效地通过包括或与合适的试剂(如中链甘油三酯)共给药而提供肠抗性经肠而不是口服的组合物包括直肠组合物，它可以是栓剂栓剂一般包括栓剂赋形剂，如可可油另外，含有该活性组分的特殊的制剂可由药学制剂领域中熟练的技术人员按常规的方法制得本发明各方面的较佳特征与各其他方面一样，已作必要的修正整篇说明书所涉及的所有的专利和文献都被纳入，并以法律所允许的最大程度作为参考现在，将通过下面的非限制性实施例进一步描述本发明实施例1在根据ICH GCP(International Conference on Harmonisationn -Good ClinicalPractice)的指导原则进行的临床研究过程中，在WHO II类不排卵妇女身上检验经FSH刺激后给予LH的效果患者具有以下特征绝经期前；18-39岁；由于排卵功能障碍而不育；已有自发的月经，这几年内月经由枸橼酸氯米芬治疗或积极的黄体酮诱导的停药性出血(withdrawalbleed)引起；BMI为35以下〔以体重(kg)/(身高×体重)(m2)计算〕；甲状腺机能正常；没有会妨碍LH吸收、分布、代谢或排泄的医疗情况(medicalcondition)；没有临床上的系统疾病；没有已知的对促性腺激素制剂的过敏性；没有卵巢子宫内膜瘤(由超声波测定)或11mm以上的持久的卵巢囊肿；先前或目前没有激素依赖肿瘤；没有临床上相关的生殖道疾病；没有滥用活性物质患者用FSH进行常规的排卵诱导，直到出现4个以上直径为8-13mm的卵泡、没有更大的卵泡并且子宫内膜厚8mm以上为止然后随机将他们分成3个盲组(blinded group)，一组接受安慰剂，一组接受225 IU/天的r-hLH，最后一组接受450 IU/天的r-hLH表1总结了各组患者表1 r-hLH(LHadi?，Serono)以冻干的形式存放在小瓶中，该小瓶含有75 IU r-hLH和47.75mg蔗糖、磷酸盐缓冲剂和Tween 20从基因工程改造的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中制得LHadi，已通过重组技术将编码人LHα链和β链的基因导入该细胞LHadi的特异性活性大约是15000 IU LH/mg对于225 IU剂量，使用了3小瓶一个小瓶中加入1ml水重新配置，并轻轻地摇动，注意不使其与橡皮塞子接触将所得的溶液全部吸出并用来重新配置第二小瓶的药剂轻轻摇动后，将所得的溶液全部吸出并用来重新配置第三小瓶的药剂再轻轻摇动，然后将所得溶液全部吸出，并立即用新的针在前腹壁进行皮下注射对于450 IU剂量，制备了两个225 IU的注射剂安慰剂放置在与r-hLH并匹配的小瓶中，但仅含有蔗糖、磷酸盐缓冲剂和Tween 20r-hLH/安慰剂治疗持续7天，除非出现至少一个卵泡的平均直径至少为18mm以及3个以下卵泡的平均直径是11mm以上在这种情况下，经皮下给予5000 IU的单剂量u-hCG(Profasi?，Serono)在进行r-hLH/安慰剂治疗之前和期间，每隔1-2天使用超声波(US)测量卵泡的平均直径(由两条最长的垂直直径的平均值确定)和子宫内膜的厚度〔指子宫内膜和子宫肌层的产生回波的界面到相反界面之间的距离，包括较强的中线回波(子宫内膜的界面)〕记录所有平均直径为11mm以上的卵泡在r-hLH/安慰剂治疗期间，在每次进行超声波扫描之前以及扫描的同时采取血样，并分析所得血清的E2(雌二醇)、P4(黄体酮)、LH、FSH和雄烯二酮使用DPC Coat-a-count，RIA固相包被的试管分离方法分析E2和P4，采用MAIACLONE IRMA分析LH(血清和尿)和FSH，采用Diagnostic SystemLaboratories方法(RIA)分析雄烯二酮其结果总结在表2-4和