人工合成染色体的必需原料是什么?
人工合成染色体的必需原料是氨基酸和脱氧核苷酸。
酵母菌为真核生物,而大肠杆菌为原核生物,故酵母菌具有以核膜为界限的细胞核;人工酵母中存在人工合成的染色体,故人工酵母与天然酵母细胞中的染色体不完全相同;染色体的主要成分是蛋白质和DNA,所以人工合成染色体必需的原料包括氨基酸和脱氧核苷酸;大肠杆菌为原核生物,没有核膜,转录和翻译均在细胞质中进行。
必须含有三种必需成分:着丝粒,端粒和复制起点。着丝粒(CEN)位于染色体中央,呈纽扣状结构,在有丝分裂时结合微管并调控染色体的运动,也是姐妹染色单体配对时的最后位点,接收细胞信号而使姐妹染色体分开。端粒(TEL):主要功能是防止染色体融合,降解,确保其完整复制。端粒酶以其自身RNA为模板,在染色体端部添加上端粒重复序列,并参与端粒长度和细胞增殖的调控。
复制起点:DNA复制通常由起始蛋白与特定的DNA序列相互作用开始。DNA合成的起始位点和DNA复制起点(遗传位点)所需的Cis靶区常位于同一段长约100bp的DNA上。
YAC的主要缺点
1.存在高比例的嵌合体,即一个YAC克隆含有两个本来不相连的独立片段;
2.部分克隆子不稳定,在转代培养中可能会发生缺失或重排;
3.难与酵母染色体区分开,因为YAC与酵母染色体具有相似的结构;
4.操作时容易发生染色体机械切割;
以细菌寄主系统为基础的克隆载体形成嵌合体的频率较低,转化效率高,又易于分离。科学家用“染色体建造”法用F质粒及其调控基因构建细菌载体,克隆大片段DNA。该质粒主要包括oriS, repE(控制F质粒复制)和parA, parB(控制拷贝数)等成分。
BAC的优点
1. 易于用电击法转化E.coli(转化效率比转化酵母高10-100倍);
2. 超螺旋环状载体,易于操作;
3. F'质粒本身所带的基因控制了质粒的复制;
4. 很少发生体内重排。
有人把人类染色体端粒DNA上单个α-卫星DNA单元多聚化形成1Mb左右的大片段并与人类基因组DNA混合,产生了能被复制,能正常分裂并得到长期稳定保存的人工合成的染色体,长度约为6-10Mb,称为MAC或HAC。
合成DNA的原料为四种脱氧核苷酸:腺嘌呤脱氧核苷酸(dATP)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGTP)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCTP)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTTP) 。