专利名称：一种淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂及其制备方法和应用的制作方法淡紫拟青霉是一种生物试剂，在杀线虫过程中具有高效、安全、持效久的特点，另外淡紫拟青霉还能促进植物的生长，达到增产的目的。现有的淡紫拟青霉剂型有粉剂、可湿性粉剂。各种剂型各有优缺点，粉剂是真菌最早开发以及使用的剂型，其制备方法简单；但是孢子粉剂存在贮存时间短、使用不方便、分布不均匀以及药效发挥慢等缺点。可湿性粉剂和粉剂相比，使用方便，且能兑水使用符合常规用药习惯，但是也存在孢子贮存期短的问题。在国内，淡紫拟青霉的专利有多个，但大多集中于发酵培养，制成的剂型也大多为粉剂或颗粒剂，两种剂型在贮存时间及施用效果方面有缺陷。登记注册的生物农药主要种类如下潘沧桑等研制的高浓缩吸附型粉剂——线虫清，主要作用于根结线虫；刘杏忠等人研制的大豆保根剂菌剂，主要用于防治大豆胞囊线虫。作为生物农药登记的公司国内有两家德强生物股份有限公司和福建凯利生物制品有限公司，另外国内也有一些生产企业正在对淡紫拟青霉孢子制剂进行探索与研究。虽然国内对淡紫拟青霉制剂的研究已经开始起步，但仍然局限于一些简单的剂型，如粉剂和颗粒剂，新型的剂型还未见报道。油悬浮剂是指一种或一种以上农药有效成分(其中至少有一种为固体原药)在非水系分散介质中形成高分散、稳定的悬浮体系。相对于其他剂型，油悬浮剂主要有以下几个优势一是从环保角度来看，油悬浮剂是水基化、颗粒化的绿色制剂的一个补充，适用于在水中稳定性差、易分解、制粒困难的农药；二是对于一些亲油性很强的农药，制成油悬浮齐U，有助于提高药效，起到增效作用；三是在亲脂性物质中完全不溶的农药，制成油悬浮剂之后，则可以提高有限成分的渗透性和内吸性，促使药剂发挥作用；四是油悬浮剂是以油为载体，对靶标有良好的亲和性，可以更好地发挥药效；五是在缺水干旱地区施药或飞机施药时，应尽可能减少用水稀释，而直接用油喷雾更为有效方便。
本发明通过筛选与淡紫拟青霉孢子相容性较佳的溶剂油、乳化剂、分散剂、增稠齐U，进行淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂配方及加工工艺研究，研究开发出一种具有较好线虫寄生效果，对环境友好且耐贮存的真菌孢子剂型。本发明的目的是提供一种杀线虫效果好的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂；本发明的另一目的是提供一种淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂的制备、使用方法。本发明的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂是由下列组分制成的按照重量百分比计，淡紫拟青霉真菌孢子粉占1%_20%，乳化剂占10%_30%，增稠剂占2%-10%，分散剂占3%-15%，植物油占25%-84% ；、本发明的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂另一优选的配比组成是按照重量百分比计，淡紫拟青霉真菌孢子粉占3%-10%，乳化剂占10%_20%，增稠剂占2%-8%，分散剂占3%-10%，植物油占52%-82% ；本发明的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂的制备方法如下(I)按照重量百分比计，称取淡紫拟青霉真菌孢子粉1%_20%，乳化剂10%_30%，增稠剂2%-10%，分散剂3%-15%，植物油25%-84% ；(2)在环境温度不高于30°C的条件下，将步骤(I)所述各物质加入到搅拌机中，搅拌0. 5-1小时，混合均匀；或者在环境温度不高于30°C的条件下，将步骤(I)所述各物质加入砂磨机中，在1000-15000r/min的转速下研磨10-20分钟，混合均匀；或者用高剪切机在10000-50000r/min的转速下剪切5_10min，混合均匀；即得到淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。 所述的淡紫拟青霉真菌孢子粉优选为淡紫拟青霉高孢粉，含孢量大于I X IO8个/g，活孢率大于70% ；所述的乳化剂为非离子型乳化剂，为EL-12、EL-20、EL-60、By-120、By-130、NP-4、NP-7、AEO-3、AEO-5、AE0-7、农乳700#、农乳34#、农乳36#和农乳37#中的一种或者多种的混合剂；所述的增稠剂为凡士林、黄原胶、阿拉伯树胶、白炭黑、硅酸镁铝中的一种或者多种的混合剂；所述的分散剂为YUS-EP60P、YUS-CHl 100、YUS-FS7PG、YUS-110, YUS-D935、SP-SC36、SP-SC390中的一种或者多种的混合剂；所述的植物油为大豆油、花生油、色拉油、葵花油、菜籽油、芝麻油或甲酯化大豆油。本发明的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂的使用方法如下使用时，将淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂用水稀释2000-5000倍，在土壤整理时结合播前整地采取沟施或穴施的方式均匀施入；或者用水稀释200-1000倍，配制成孢子悬浮液用于蘸根使用；或者将淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂用水稀释1000-3000倍，在作物苗期或生长前期用于灌根使用；或者用水稀释2000-5000倍配制成菌液随水冲施或者与冲施肥混合冲施使用。本发明的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂可用于防治多种线虫，如根结线虫、胞囊线虫、肾形线虫、接根结线虫等；可用于多种作物，如大豆、烟草、番茄、黄瓜、茄子、胡萝卜、辣椒、南瓜、菜豆、甘薯、葡萄、草莓、桃、西瓜、甜瓜等。本发明的有益效果为本发明解决了目前市场上淡紫拟青霉剂型缺乏的缺点，提供了一种施用成本低、使用方便、杀线虫效果好的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。本发明提供的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂中的淡紫拟青霉真菌孢子存活时间更长，能用水稀释成孢子悬浮液进行蘸根、冲施、灌根使用，具有高活性、乳化完全稳定、使用方便的优点。本发明提供的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂与市场上的化学杀线虫相比，具有以下优点( I)对线虫防效显著，能有效抑制线虫侵染植物，并且线虫不易产生抗药性；(2)药效持续时间长，淡紫拟青霉为活体微生物，在土壤中大量繁殖、自然传播，从而保护作物整个生长季节不受线虫的危害；(3)能促进植物生长，淡紫拟青霉的代谢产物中有一类类似吲哚乙酸的产物，能促进植物根系与植株的生长，提高作物产量； (4)环保安全，因为是纯微生物菌剂，不污染环境，无药害，无残留，对人畜安全。本发明提供的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂与目前市场上的淡紫拟青霉粉剂、可湿性粉剂及颗粒剂相比具有以下优点(I)采用植物油作为载体，隔绝空气与水分，淡紫拟青霉真菌孢子的贮存期延长；(2)所选择的乳化剂、分散剂安全，与淡紫拟青霉真菌孢子兼容性好，对制剂的贮存期没有较大影响；(3)油悬浮剂经兑水稀释之后，呈透明或者半透明状的乳状液，乳化完全，稳定性良，淡紫拟青霉真菌孢子包裹在油滴中从而免受环境的影响；(4)油悬浮剂经兑水稀释后，孢子在水中均匀分散，施用时分布均匀；(5)该油悬浮剂经室内生测后，活性高，毒杀根结线虫效果很好；(6)与可湿性粉剂相比，田间使用方便，一个生长周期只需施用一次；(7)制备方法简单，产品原料来源广泛，适合工业生产。
淡紫拟青霉真菌孢子粉3wt%
乳化剂(NP-4 和 EL-20)15wt%分散剂(YUS-EP60P)3wt%
增稠剂(黄原胶)5 wt% 植物油(色拉油)补足到100 wt %
实验结果表明，淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂贮存一个月后孢子活性为80%，通过线性关系计算得出淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂在常温下货架期大约为8个月，和市场上的淡紫拟青霉粉剂的贮存期为4个月相比，本发明的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂能明显延长制剂的贮存时间。实施例2 :淡紫拟青霉孢子油悬浮剂室内杀线虫活性测定(I)淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂的制备淡紫拟青霉为食线虫真菌，通过孢子萌发生长出菌丝侵染线虫。在环境温度不高于30°C的条件下，将72wt%的甲酯化大豆油、7wt%的EL-20、4wt%的NP_4、4wt%的AE0-3、3wt%的YUS-CHl 100、5 wt %的凡士林和5 wt%的淡紫拟青霉真菌孢子粉加入到砂磨机中，在1000-1500r/min的速度下研磨10分钟，制成淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂；将淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂分别稀释I X 105、I X IO7,1 X IO9倍，配成悬浮液，用于室内杀线虫活性 测定；(2)线虫悬浮液的制备从活体寄主植物上挑取南方根结线虫的卵块用水清洗，胞囊线虫的胞囊用
0.4mmol/L氯化锌(ZnCl2)溶液清洗，置于培养皿的湿滤纸上，20°C 25°C下孵化，获得龄期一致的二龄幼虫。用水将培养好的茎线虫、松材线虫从培养基上洗脱，过滤，lOOOr/min下离心2min，弃上清液，加水，再离心，最后用水将线虫重悬浮至每毫升> 100头线虫，备用。(3)淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂的杀线虫活性测定用移液枪取配制好的悬浮液Iml分别加入到各个试管中，然后再向各个试管中加入制备好的线虫悬浮液1ml，使药液与线虫悬浮液等量混合均匀。用移液枪移取混合液于24孔细胞培养板中，在25°C人工气候培养箱中培养。使用每种稀释度的悬浮液的试验均重复3次，以清水作为对照。室内生测结果发现，当淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂稀释IO9倍时，对南方根结线虫二龄幼虫仍然有较强的毒杀作用，线虫死亡率为100%。说明淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂对线虫的毒杀效果很好。在室内试验中是将淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂稀释IO5倍，在田间应用时推荐稀释200-5000倍用于不同的施药方式。实施例3在环境温度不超过30°C的条件下，将10wt%的淡紫拟青霉真菌孢子粉、8wt%的EL-20、7wt% 的 AE0-3、5wt% 的 EL_12、5wt% 的 YUS_CH1100、5wt% 的凡士林和 60wt% 的大豆油加入到搅拌机中搅拌30分钟，即配制成10wt%的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。使用时，用水稀释2000-5000倍，在土壤整理时结合播前整地采取沟施或穴施的方式均匀施入。实施例4在环境温度不超过30°C的条件下，将10wt%的淡紫拟青霉真菌孢子粉、12wt%的NP-4、3wt%的EL-20、5wt%的YUS-CHl 100、5wt%的黄原胶和65wt%的大豆油加入到搅拌机中搅拌30分钟，即配制成10wt%的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。使用时，用水稀释200-1000倍，配制成孢子悬浮液用于蘸根使用。实施例5在环境温度不超过30°C的条件下，将5wt%的淡紫拟青霉真菌孢子粉、7wt%的By-120、8wt%的NP-4、5wt%的YUS_EP60P、3wt%的凡士林和67wt%的甲酯化大豆油加入到搅拌机中搅拌I小时，即制成5wt%的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。使用时，用水稀释1000-3000倍，在作物苗期或生长前期用于灌根使用。实施例6在环境温度不超过30°C的条件下，将8wt%的淡紫拟青霉真菌孢子粉、6wt%的By-120,5wt% 的 EL-12、5wt% 的 AE0_3、4wt% 的 NP_4、5wt% 的 YUS_EP60P、3wt% 的凡士林和62wt%的色拉油加入到砂磨机中，在1000-1500r/min的转速下研磨10分钟,混合均勻即制成8wt%的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。使用时，用水稀释2000-5000倍配制成菌液随水冲施或者与冲施肥混合冲施使用。实施例7在环境温度不超过30°C的条件下，将10wt%的淡紫拟青霉高孢粉，4wt%的EL-12、6wt% 的 EL-20、5wt% 的 AE0-5、5wt% 的农乳 34#、5wt% 的 YUS-EP60P、lwt% 的黄原胶、2 wt% 的 娃酸镁招和62wt%的色拉油加入到砂磨机中，在1000-1500r/min的转速下研磨15分钟,混合均匀即制成8wt%的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。使用时，用水稀释200-1000倍，配制成孢子悬浮液用于蘸根使用。实施例8在环境温度不超过30°C的条件下，将5wt%的淡紫拟青霉真菌孢子粉、4wt%的EL-12、6wt% 的农乳 700#、5wt% 的 NP_4、5wt% 的 SP_SC36、5wt% 的凡士林和 67wt% 的甲酯化大豆油加入到高剪切机中，在10000-50000r/min的转速下剪切5分钟，即制成8wt%的淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。使用时，用水稀释1000-3000倍，在作物苗期或生长前期用于灌根使用。


本发明公开了一种淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂及其制备方法和应用，属于农药技术领域。本发明的悬浮剂是由下列组分制成的按照重量百分比计，淡紫拟青霉真菌孢子粉占1%-20%，乳化剂占10%-30%，增稠剂占2%-10%，分散剂占3%-15%，植物油占25%-84%。将按照上述比例称取的各成分在环境温度不高于30℃的条件下，在搅拌机中搅拌0.5-1小时或在砂磨机中于1000-15000r/min的转速下研磨10-20分钟或在高剪切机中以10000-50000r/min的转速剪切5-10min，即得到淡紫拟青霉真菌孢子油悬浮剂。本发明的悬浮剂对线虫防效显著，药效持续时间长，环保安全，能促进植物生长。