一种高特异高敏感检测副溶血性弧菌的方法【技术领域】，具体的说，是一种高特异高敏感检测副溶血性弧菌的方法。[0002]副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus)是一种嗜盐性细菌。副溶血性弧菌食物中毒，是进食含有该菌的食物所致，主要来自海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。本菌存活能力强，在抹布和砧板上能生存I个月以上，海水中可存活47天。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。本病多在夏秋季发生于沿海地区，常造成集体发病。近年来由于海鲜空运，内地城市病例也渐增多。快速检测副溶血性弧菌，对提高副溶血性弧菌引起的检测和诊断效率，确定有效治疗方案具有很大意义。[0003]环介导等温扩增技术是由日本荣研(EIKEN)株式会社开发的高特异性敏感度的核酸检测系统，无须昂贵的设备，已经成为核酸快速检测法的良好手段，本发明结合环介导等温扩增技术，设计针对副溶血性弧菌的特异性基因序列的一对外引物(VP-F3和VP-B3)和一对内引物(VP-FIP和VP-BIP)进行环介导等温扩增。
[0004]本发明公开了一种高特异高敏感检测副溶血性弧菌的方法，提高了它的检测和诊断效率。[0005]为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现: 一种高特异高敏感检测副溶血性弧`菌的方法，包括以下步骤:
步骤I)制备反应液 反应液组成及含量为
8u/ul Bst核酸聚合酶8u
IOX耐热聚合酶反应缓冲液lX，MgS04 2mM
4M甜菜碱IM
IOmM d-NTP 混合液400 μ M
内引物
VP-FIP40umol
VP-BIP40umol
外引物
VP-F35umol
VP-B35umol
标本核酸20ng
添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul;步骤2)使用副溶血性弧菌的核酸，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，多次进行反应，观察它们的阴阳性。
[0006]进一步的，所述外引物VP-F3的序列为GCGCAAGGTTACAACATC。
[0007]进一步的，所述外引物VP-B3的序列为CACACTCAGAGCGCAATG。
[0008]进一步的，所述内引物VP-FIP的序列为 TCACGAAACCGTGCTCTTCTG-GTTGTTTGATACTCACGCCT。
[0009]进一步的，所述内引物VP-BIP 的序列为 GCGAGCGATCCTTGTTTGGA-GTACTTGATGCATGTAATCGA。
[0010]进一步的，所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。
[0011]本发明的有益效果是:
本发明通过配制反应液，设计引物序列，能快速、准确的检测副溶血性弧菌，并及时采取相应的措施，减少了疾病的发生率。

[0012]下面将结合实施例，来详细说明本发明。
[0013]一种高特异高敏感检测副溶血性弧菌的方法，包括以下步骤: