Pdlim5基因突变检测特异性引物和液相芯片制作方法_许嘉森,杨惠夷专利（Pdlim,基因突变,特异性）-早鸽网

Pdlim5基因突变检测特异性引物和液相芯片制作方法

专利名称

Pdlim5基因突变检测特异性引物和液相芯片制作方法
发明者

许嘉森, 杨惠夷
公开日

2013年12月18日
申请日期

2012年5月31日
优先权日

2012年5月31日
申请人

益善生物技术股份有限公司
文档编号

C12N15/11GK103451269SQ201210179332
关键字

Pdlim 基因突变特异性检测
权利要求

1.一种rouM5基因突变检测液相芯片，其特征在于，包括有(A).针对rouM5基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为针对G76A位点的 SEQ ID N0.9 及 SEQ ID N0.10，针对 G277T 位点的 SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12,针对 C100T 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或针对 T132C位点的 SEQ ID N0.15及 SEQ ID N0.16 ;所述 tag 序列选自 SEQ ID N0.1 -SEQ ID N0.8 ； (B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.17-SEQ ID N0.24，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物2.根据权利要求1所述的H)UM5基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引物为针对 G76A 位点的 SEQ ID N0.25 及 SEQ ID N0.26，针对 G277T 位点的 SEQ ID N0.27 及SEQ ID N0.28，针对 C100T 位点的 SEQ ID N0.29 及 SEQ ID N0.30，和 / 或针对 T132C 位点的 SEQ ID N0.31 及 SEQ ID N0.323.根据权利要求1或2所述的基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述ASPE引物为针对G76A位点的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.9组成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.10组成的序列，针对G277T位点的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.11组成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.12组成的序列，针对C100T位点的由SEQ ID N0.5和SEQID N0.13组成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.14组成的序列，和/或针对T132C位点的由SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.15组成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.16组成的序列4.根据权利要求1所述的H)UM5基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述间隔臂为5— 10 个 T5.用于TOLIM5基因突变检测的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物序列为针对 G76A 位点的 SEQ ID N0.9 及 SEQ ID N0.10，针对 G277T 位点的 SEQ ID N0.11 及 SEQ IDN0.12，针对 C100T 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或针对 T132C位点的 SEQ IDN0.15 及 SEQ ID N0.16
技术领域

[0001]本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种rouM5基因突变检测特异性引物和液相芯片
专利摘要

本发明公开了一种PDLIM5基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为针对G76A位点的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，针对G277T位点的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12，针对C100T位点的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，和/或针对T132C位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
专利说明

PDLIM5基因突变检测特异性引物和液相芯片

专利详情
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权力要求
说明书
法律状态

Pdlim5基因突变检测特异性引物和液相芯片的制作方法[0002]PDLIM5 是一种 LIM 蛋白，同时也是 Enigmahomologue LIM domain(ENH)蛋白，英文名称为 Postsynaptic Density-95/discs large/Zone occludens-1 (PDZ)andLin-11, Isl-1, Mec-3 (LIM) domain 5,位于 4 号染色体 4q22.3 上,其组成与 Enigma 蛋白类似，由I个PDZ结构域和3个LIM结构域组成。作为衔接蛋白(adaptor protein)在神经系统中，ENH蛋白可与PKC β，ε , y相互作用，能被PKC ε，β I磷酸化。ENH还能和L/N型钙离子通道结合，影响这些通道的开闭。在心脏中，ENH被报道与心肌肥大相关，ENH介导PKDl对L型钙离子通道的磷酸化，而PKD的过度激活导致心肌肥大。可能和肿瘤相关，在hela S3k-562 molt_4等众多癌细胞系中，都有ENH表达。基因与前列腺癌，抑郁症和精神分裂症有相关性。[0003]目前，PDLIM5基因突变检测方法主要有=Illumina光纤微珠芯片技术、直接测序法和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要。而其它以PCR为基础的检测技术，如直接测序法和荧光定量PCR技术，则存在灵敏度低，样品易污染、假阳性率高的缺点，而且直接测序法和荧光定量PCR技术存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。[0004]本发明目标检测的PDUM5基因突变位点，如表所示:[0005]`

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