专利名称：抗氧化剂组合物的制作方法近年来人口老龄化和慢性代谢疾病例如高血压或者糖尿病的增加促进了慢性溃疡的存在。有时，由于患者(糖尿病)的健康病症或者组织内大量损伤(严重烧伤)的存在，会出现改变发生愈合必定经历的一系列进程的现象，从而形成慢性溃疡。慢性溃疡的形成与过度炎症性过程相关，其改变涉及调节愈合发生进程的信号分子的合成。最近的研究直接地将慢性溃疡的生理病理学与创面床中存在的氧化应激相关联，作为创伤区域的促炎症反应环境的结果。当氧化应激发生时，有机体有能够控制产生的活性氧类过量的解毒机制，相反地，当缺少有机体的解毒能力和创面床中的自由基之间的调节时，愈合进程减慢，引起慢性溃疡。活性氧代谢产物的解毒机制中调节`的缺乏是慢性溃疡的主要原因之一。慢性创伤的愈合可以通过使用抗氧剂创伤敷料来诱导，其特别地与过量活性氧类反应，并因此减少氧化应激的水平。在该技术中，描述了用于愈合目的的不同例子的材料。例如，US 6406712中，创伤敷料材料已有描述，其通过混合包含在密封包装的干的水胶体聚合物粉末和水而形成，所述密封包装具有一个临时的或者用手除去的屏障，这样干聚合物和水可以彼此之间分开地储存在包装中。另一个描述，专利申请WO 01/49258A2,包含组织接触材料，例如包含不可胶化的多糖(例如瓜尔胶)的生物相容的聚合物，其使氧进入能够在被调节组织位置提供或者维持最佳氧张力，并同时在需要时吸收过量液体和优化微环境以促使组织修复和再生的闭室泡沫样材料中。专利申请EP0781550A1，描述了生物粘附药物组合物用于抗溃疡等等活性成分的控制释放，该活性成分由醋酸乙烯酯和聚乙烯吡咯烷酮的共聚物以及一个其他成分(例如刺槐豆胶等等)组成。半乳糖甘露聚糖在减少遭受UVA辐射的系统的脂质过氧化作用方面的抗氧化活性也在最近被描述。它们增加不同混合物的水凝胶的弹性的能力以及它们吸收水的能力，能够给创面床提供愈合进程中所需的必要湿度，也是已知的。国际申请W02005/084650A1请求保护药物活性成分的储存稳定且干燥的活性成分递送系统，用于创伤愈合目的的皮肤使用。递送系统包含干凝胶，其中凝胶形成材料是多糖，例如半乳糖甘露聚糖衍生物。当干凝胶与液体接触时，它再水化并形成水凝胶，借此应用的活性成分得到溶解并以控制的速率从水凝胶中释放产生局部高的浓度。固体，用作创伤敷料的生物可吸收材料在专利申请EP0792653中被描述，其中这样的固体由黄原胶和至少一种半乳糖甘露聚糖例如瓜尔胶或者刺槐豆胶的混合物形成。材料还包含治疗剂，其中特别优选地是有效地促进创伤愈合的那些例如葡糖氨基聚糖。如上所述的相似操作中，国际申请W099/25395请求保护一种用于愈合目的的创伤敷料，其中基质包含生物相容的交联聚合物和不可胶化的多糖，半乳糖甘露聚糖，其还包括一种或多种活性成分，例如，创伤愈合剂像生长因子、粘多糖和蛋白质。其他类型的创伤愈合敷料被国际申请W02004/112850和W02005/049101所描述，其中材料普遍地由生物可吸收基底形成，其可以是用抗氧化染料染色的半乳糖甘露聚糖，其可以与活性氧类反应，以这种方式减少创伤的氧化应激的水平。N-乙酰半胱氨酸是已知的抗氧化分子，其通过增加细胞内谷胱甘肽(GSH)的合成而起作用。GSH的降低效果促成直接地消除活性氧类，并且还促成已经使用的抗氧化剂的重复利用。它在慢性溃疡中的用途将减少其氧化应激，从而有利于它们的愈合(马尼勘丹，P.等，分子和细胞生物化学，2006, 290，87-96 ;拉尼泰克，S.等，药物学在线，2009，1，369-376(Manikandan, P.et al,Molecular and Cellular Biochemistry, 2006, 290, 87-96 ；RaniThaakur, S.et al,Pharmacologyonline, 2009, I, 369-376))。姜黄素的抗氧化活性是已知的。姜黄素是姜黄的根的粗提取物的纯化状态，其中姜黄是一种主要在东南亚种植的植物并且在传统医药中广泛用于治疗皮肤相关的疾病。Gopinath, D.(Biomaterials, 2004, 25, 1911-1917)证明了由姜黄素抗氧化剂产生的改善的创伤愈合能力，当它加入到胶原基质中时，其还作为再生组织的支撑基质。尽管半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的抗氧化特性被很好地记载在现有技术中，但是没有迹象表明这两种成分的组合有特别的好处，特别是，在遭受广泛的氧化应激的细胞培养物中提供抗氧化剂协同作用。
本发明的作者已发现半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的组合提供了两组分的抗氧化能力的协同作用，其导致在治疗由受治疗者的皮肤中活性氧类产生导致的疾病或者紊乱或者涉及受治疗者皮肤中活性氧类产生的疾病或者病症的用途中有出乎意料的优点。实验性试验已显示，当半乳糖甘露聚糖例如刺槐豆胶，和N-乙酰半胱氨酸的组合给药培养细胞时，易受氧化应激的人皮肤细胞(成纤维细胞)经受了细胞存活能力/保护的增加。其他实验也已显示，当与单独地刺槐豆胶或者N-乙酰半胱氨酸相比较时，所述组合使得在存在过氧化氢下，易受氧化应激的成纤维细胞培养物中的活性氧代谢产物的细胞内水平显著减少。进一步地，当姜黄素(或者姜黄根Turmeric)加入到半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的组合中时，已观察到甚至更高的协同作用。因此，本发明 的第一个方面涉及一种抗氧化剂组合物，包含半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸，用于治疗或预防由受治疗者的皮肤中活性氧类产生导致的皮肤疾病或者病症或者涉及受治疗者皮肤中活性氧类产生的皮肤疾病或者病症的用途。特别优选的是使用刺槐豆胶作为本发明组合物中的半乳糖甘露聚糖。在一个特别的实施方式里，如上所定义的抗氧化剂组合物进一步包含姜黄素(姜黄根)作为额外的抗氧化剂成分。本发明还涉及一种治疗或者预防由受治疗者的皮肤中活性氧类产生导致的皮肤疾病或者病症或者涉及受治疗者皮肤中活性氧类产生的皮肤疾病或者病症的方法，该方法包含给予治疗有效量的包含半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的组合物。本发明的另一个方面涉及一种包含半乳糖甘露聚糖、N-乙酰半胱氨酸和姜黄素的抗氧化剂组合物。本发明的另一个方面涉及如上所定义的抗氧化剂组合物用作药物。本发明的另一个方面涉及一种包含半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的水凝胶，其中半乳糖甘露聚糖是以交联基质的形式，N-乙酰半胱氨酸结合到所述的半乳糖甘露聚糖的交联基质中。在一个特别的实施方式里，半乳糖甘露聚糖借由交联剂而交联，优选地交联剂是戊二醛。在另一个方面，本发明涉及如上所定义的水凝胶，其中半乳糖甘露聚糖基质进一步包含姜黄素结合在内。此外，本发明还涉及如上所定义的水凝胶，其进一步包含细胞。特别优选的是细胞选自成纤维细胞、角质化细胞、内皮细胞、分化或未分化的间质干细胞、角膜细胞、上皮细胞、来自白细胞系统的细胞、来自造血系统的细胞、分化或未分化的干细胞、软骨形成细胞、成骨细胞、肌细胞、脂细胞和来自外周或者中枢神经系统的神经元或者其他细胞。本发明的另一个方面设计制备如上所定义的水凝胶的方法，其包括:a)将半乳糖甘露聚糖溶解在水溶液中；b)通过将交联剂加入到半乳糖甘露聚糖的水溶液中使半乳糖甘露聚糖接受化学交联从而获得包含交联葡甘露聚糖基质的水凝胶；c)将N-乙酰半胱氨酸以及可选地姜黄素结合到交联葡甘露聚糖基质中。本发明的另一个方面涉及包含如上所定义的水凝胶的创伤敷料。本发明的另一个方面涉及如上所定义的水凝胶用作药物。本发明的另一个方面涉及如上所定义的水凝胶用于治疗和/或治愈急性外科的和外伤性创伤、烧伤、烫伤、瘘、静脉溃瘍、动脉溃瘍、压疮(pressure sores)(也称为褥疮(decubitus ulcers))、糖尿病性溃瘍、混合病因的溃瘍，以及其他慢性或者坏死性创伤和炎性病变和紊乱。本发明的另一个方面涉及包含半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的化妆品组合物。在另一个方面， 本发明涉及如上所定义的化妆品组合物，其进一步包含姜黄素。本发明的另一个方面涉及如上所定义的化妆品组合物用于治疗年龄相关的皮肤损伤的用途。本发明的另一个方面涉及如上所定义的化妆品组合物用作UV辐射防护剂的用途。图1显示:(a)MTT比色测定得到的成纤维细胞中的细胞增殖的结果，使用不同浓度的NAC ；以及(b)相较于对照的IC5tl值。图2显示:(a)MTT比色测定得到的成纤维细胞中的细胞增殖的结果，使用不同浓度的姜黄根；以及(b)相较于对照的IC5tl值。图3显示了当成纤维细胞培养物处于氧化的环境时以及当它与l%LBG、lmM NAC、I μ M姜黄根及其组合接触时，根据MTT比色测定得到的结果。图4显示了处于ImM H2O2的氧化环境的成纤维细胞的细胞内ROM水平，以及当成纤维细胞与l%LBG、5mM NAC,5 μ M姜黄根及其组合接触时的水平，通过用探针2’，7’ - 二氯荧光黄双乙酸盐标记而获得的荧光单位的方式得到。图5 显示了从用(a) 0%wt、(b) 0.5%wt、(c) l%wt 和(d) 2.5%wt 的戍二醒交联的刺槐豆胶水凝胶的扫描电子显微镜(SEM)中得到的照片。图6显示了在愈合动物模型猪的背部上的外科手术产生的皮肤病变的10-天进展的活组织检查的肉眼可见的视图。图7显示了在愈合动物模型猪的背部上的外科手术产生的皮肤病变的3-天进展的照片。
上述的局部用的组合物可以定期应用于任何需要频繁治疗的皮肤区域，并以必需量以达到预期的结果。治疗的频率取决于皮肤疾病或者病症的性质，即由皮肤中活性氧类的产生导致的皮肤疾病或者病症，以及皮肤损伤或者恶化的程度。由于半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的组合的抗氧化特性，它可以用于治疗或预防由受治疗者皮肤中的活性氧类产生导致的皮肤疾病或病症，或者涉及受治疗者皮肤中的活性氧类产生的皮肤疾病或者病症，尤其是在皮肤成纤维细胞和角化细胞中。这个治疗包括通过直接将上文所述的局部用制剂应用于皮肤而接触受治疗者的皮肤，以这种方式影响受治疗者，和/或受治疗者的皮肤组织和/或一个或多数细胞，以获得期望的药理学效果和/或生理学效果。该效果可以是预防的，完全地或部分地预防疾病或者紊乱例如由皮肤中活性氧类产生导致的病症或者涉及皮肤中活性氧类产生的病症，或其迹象或者症状；和/或该效果可以是治疗的，减轻症状或迹象或者对这样的紊乱或者疾病提供部分或者完全的治疗和/或基本上削弱紊乱或疾病引起的有害作用。相关的实施方式，期待通过实施例的方式:(i)预防疾病或者紊乱(例如由活性氧类产生导致的皮肤病症或者涉及活性氧类产生的皮肤病症)在受治疗者中发生，所述受治疗者可能易感染疾病或者紊乱，但是还没有被诊断为患有上述疾病或者紊乱；(ii)抑制疾病或者紊乱，即，阻止它的发展；或者(iii)减轻或者改善疾病或者紊乱，即，使复元。在一个特别的实施方式里，由活性氧类产生导致的皮肤疾病或者病症的治疗包括皮肤损伤位置的损伤或者受伤组织或者细胞的修复和再生。这种损伤可以是受治疗者受到可促进皮肤中的氧自由基的产生的氧化应激源的影响的结果，例如阳光辐射(光损伤)、化学试剂(包括其他局部试剂例如医疗、药物或者美容化合物)、放射治疗或者化疗。它还包括预防性治疗以防止这样的损伤，例如，在受治疗者暴露于可促进皮肤中的氧自由基的产生的氧化应激源之前，例如UV辐射、化学试剂(包括其他局部试剂例如医疗、药物或者美容化合物)，或者在放射治疗或者化疗之前。更特别地，由受阳光影响而引起的皮肤疾病或者病症，更特别地是暴露于UVA、UVB和UVC型的UV福射。暴露于这样的福射的后果(或者由此加剧，或者包括在危险因素中)的直接地或者间接地病症包括直接和即时效应，以及更长期的效应，以及由较长时期的直接损伤引起的并发症和后遗症。UV辐射被认为是通过直接和间接的机制影响皮肤。直接的损伤是指直接暴露于辐射而引起的，而间接效应包括那些在损伤的生物分子的产生和高度活性氧类的产生之后，然后动态产生其他生物和病理过程。活性氧类可能在产生它们的直接位置如皮肤中产生有害作用，或者在远的位置产生有害作用，这样的活性氧类在远的位置可能有更广泛的全身效应，其可以表现为“氧化应激”。因此，有效地减少活性氧类水平而具有抗氧化作用的干预可能减慢、改善或停止大范围疾病的发展。与暴露于UV辐射有关的健康问题包括皮肤病症或疾病，但是更广布且全身性病症也可以出现，或者是作为这样的皮肤病症或者疾病引起的并发症的一部分。相应地，这样的病症，全体地，可以包括晒伤、光敏感性、免疫抑制、过早衰老、银屑病、一些类型的皮肤癌和各种免疫疾病，以及局部或者广布的炎症、各种细菌或者真菌感染、皮疹，以及由UV辐射暴露和饮食引起的全身性氧化应激。光化性角化病，例如，是一种在阳光曝晒许多年后发展起来的癌前病变，其被理解为涉及皮肤局部过敏。与受阳光影响相联系的皮肤癌类型包括，按严重性增加的顺序，基底细胞癌、鳞状细胞癌和恶性黑色素瘤。在另一个特别实施方案里，涉及受治疗者皮肤中的活性氧类产生的皮肤疾病或者病症选自急性外科的和外伤性创伤、烧伤、烫伤、瘘、静脉溃疡、动脉溃疡、压疮(pressuresores)(也称为褥疮(decubitus ulcers))、糖尿病性溃瘍、混合病因的溃瘍，以及其他慢性或者坏死性创伤和炎性病变和紊乱。在本发明的一个特别的实施方式里，本发明的抗氧化剂组合物进一步包含姜黄素作为额外的活性成分。已发现半乳糖甘露聚糖与N-乙酰半胱氨酸和姜黄素的组合提供甚至更高的协同抗氧化作用，如本申请提供的实施例所示。姜黄素，也称为姜黄根，是一个天然存在的O-对甲氧酚衍生物，具有化学式:


本发明涉及一种包含半乳糖甘露聚糖和N-乙酰半胱氨酸的抗氧化剂组合物，用于治疗由皮肤中的活性氧类产生导致的或者涉及皮肤中的活性氧类产生的皮肤疾病或者病症，涉及一种包含所述组合的水凝胶以及包含所述水凝胶的创伤敷料和它在溃疡、创伤、烧伤和烫伤中的用途。