专利名称：包含胰蛋白酶原和/或糜蛋白酶原和选自硒化合物，类香兰素化合物和细胞质糖酵解减少 ...的制作方法包含胰蛋白酶原和/或糜蛋白酶原和选自砸化合物，类香兰素化合物和细胞质糖酵解减少剂的活性剂的用于治疗癌的药物组合物在治疗癌中使用蛋白酶的想法已有大于100年。在1905年，JohnBeard建议使用新鲜胰酶提取物作为可能的癌治疗，并用Jersen氏小鼠肉瘤模型进行了成功的实验。将小鼠用蛋白酶胰蛋白酶注射之后，观察肿瘤退行。由Beard获得的结果在当时产生大的兴趣，及自绵羊胰腺制备的粗酶提取物用于治疗人癌患者，以减少肿瘤进展及延长存活时间。近来，酶的口服施用已显示被在一系列癌包括胰，肠，结直肠和晚期阶段骨 髓瘤有良好存活率的患者良好耐受。已需要高剂量的酶的使用，因为通过消化的损失和灭活及来自血浆中的其他酶灭活剂，诸如丝氨酸蛋白酶抑制物。酶原(酶的无活性前体形式)已用于克服迎对酶的口服施用的问题。包括胰蛋白酶原(其为丝氨酸蛋白酶抑制物胰蛋白酶的酶原形式)的酶原混合物已显示在治疗癌中有用，并被相信在肿瘤细胞表面选择性地活化(Novak J and Trnka F, Proenzyme Therapy ofCancer, Anticancer Research, 25:1157-1178, 2005;US 5,858,357)。胰蛋白酶的作用机理被认为通过肿瘤细胞的蛋白水解的方式发生。存在对于鉴定及提供对于治疗癌有效的增强的酶原组合物的需求。发明概述第I方面提供包含蛋白酶酶原和活性剂的药物组合物，所述组合物能提供治疗癌的多-功能方法。第2方面提供药物组合物，其包含蛋白酶酶原，其能在肿瘤细胞的表面或接近肿瘤细胞的表面活化而增强肿瘤细胞的细胞间粘接，实现肿瘤细胞的蛋白水解，或诱导肿瘤细胞凋亡，分化或免疫识别；以及活性剂，其能诱导肿瘤细胞的细胞内活性。在第2方面的一实施方式中，细胞内活性是肿瘤细胞凋亡，免疫识别或分化。在第I或第2方面的一实施方式中，药物组合物包含蛋白酶酶原和活性剂，所述组合物能提供治疗癌的多-功能方法，其中蛋白酶酶原选自胰蛋白酶原和糜蛋白酶原中的至少一种，及活性剂选自下列中的至少一种硒化合物，类香兰素化合物和细胞质糖酵解减少剂，及任选地糖苷水解酶。在进一步实施方式中，蛋白酶酶原是胰蛋白酶原和糜蛋白酶原。第3方面提供癌治疗用剂或组合物，其中癌治疗用剂包含蛋白酶酶原和活性剂，它们一起能提供治疗癌的多-功能方法。第4方面提供癌治疗用剂或组合物，其中癌治疗用剂包含蛋白酶酶原，其能在肿瘤细胞的表面或接近肿瘤细胞的表面活化而增强肿瘤细胞的细胞间粘接，实现肿瘤细胞的蛋白水解，或诱导肿瘤细胞凋亡，分化或免疫识别；以及活性剂，其能诱导肿瘤细胞的细胞内活性。第5方面提供蛋白酶酶原用于制备包含癌治疗用活性剂的药物的用途。第6方面提供活性剂用于制备包含癌治疗用蛋白酶酶原的药物的用途。第7方面提供蛋白酶酶原和活性剂用于制备癌治疗用药物的用途。第8方面提供蛋白酶酶原用于制备用于治疗用活性剂治疗的受试者中的癌的药物的用途，其中活性剂和蛋白酶酶原一起能影响肿瘤细胞，且任选地其中活性剂能诱导细胞内活性而增强蛋白酶酶原的效应。第9方面提供活性剂用于制备用于治疗用蛋白酶酶原治疗的受试者中的癌的药物的用途，其中活性剂和蛋白酶酶原一起能影响肿瘤细胞，且任选地其中活性剂能诱导细胞内活性而增强蛋白酶酶原的效应。第10方面提供治疗癌的方法，其包括给受试者施用治疗有效量的蛋白酶酶原和活性剂。在第10方面的一实施方式中，方法包括蛋白酶酶原和活性剂，及任选地额外的活性剂的共施用或连续施用。共施用可包括施用包含第I和第2方面的药物组合物的单药物，或各包含蛋白酶酶原和活性剂，及任选地额外的活性剂的独立的药物的共施用。连续施用可涉及任何顺序施用蛋白酶酶原，活性剂或额外的活性剂。连续和共施用可涉及不同途径施用蛋白酶酶原，活性剂或额外的活性剂。根据第10方面的方法可包括给已分别用活性剂或蛋白酶酶原独立地治疗的受试者施用蛋白酶酶原或活性剂。第11方面提供制备第I和第2方面的药物组合物，或其制备物或制剂的方法，其通过将蛋白酶酶原与活性剂混合来实施。在第11方面的进一步实施方式中，方法可还包括将根据第I和第2方面的一实施方式的额外的活性剂与蛋白酶酶原和/或活性剂混合。 在以上方面的一实施方式中，蛋白酶酶原是丝氨酸蛋白酶酶原。丝氨酸蛋白酶酶原可为胰蛋白酶原，糜蛋白酶原或其混合物。在另一实施方式中，蛋白酶酶原包含第I和第2蛋白酶酶原，其中第I蛋白酶酶原是糜蛋白酶原，而第2蛋白酶酶原是胰蛋白酶原，且糜蛋白酶原胰蛋白酶原的重量比在4:1至8:1之间的范围内。在进一步实施方式中，糜蛋白酶原胰蛋白酶原的重量比在5:1至7:1之间的范围内。在进一步实施方式中，糜蛋白酶原胰蛋白酶原的重量比是6: I。在以上方面的一实施方式中，活性剂选自下列中的至少一种硒化合物，类香兰素化合物和细胞质糖酵解减少剂，及任选地糖苷水解酶。例如，活性剂可为硒化合物，或由下列组成的组合硒化合物，类香兰素化合物，糖苷水解酶和细胞质糖酵解减少剂。在以上方面的一实施方式中，药物组合物包含蛋白酶酶原和活性剂，所述组合物能提供治疗癌的多-功能方法，其中蛋白酶酶原选自胰蛋白酶原和糜蛋白酶原中的至少一种，而活性剂选自下列中的至少一种硒化合物，类香兰素化合物和细胞质糖酵解减少剂，及任选地糖苷水解酶。在以上方面的进一步实施方式中，硒化合物能提供可通过身体吸收进血浆或细胞间液的生物可利用的硒源。在一特定实施方式中，含硒化合物是甲基硒代半胱氨酸或其药学可接受的盐。在以上方面的一实施方式中，糖苷水解酶是淀粉酶，例如a-淀粉酶。在以上方面的另一实施方式中，细胞质糖酵解减少剂是2_脱氧-D-匍萄糖。在以上方面的另一实施方式中，类香兰素化合物选自辣椒酸酯，即4-羟基-3-甲氧基苄基(E)-S-甲基-6-壬烯酸酯，二氢辣椒酸酯，即4-羟基-3-甲氧基苄基8-甲基壬酸酯，及正二氢辣椒酸酯，即4-羟基-3-甲氧基苄基7-甲基辛酸酯。优选地，类香兰素化合物是辣椒酸酯。在以上方面的一实施方式中，活性剂选自下列中的至少一种甲基硒代半胱氨酸，辣椒酸酯，a-淀粉酶和2-脱氧-D-葡萄糖。在特定实施方式中，活性剂由下列组成甲基 硒代半胱氨酸，辣椒酸酯，a -淀粉酶和2-脱氧-D-葡萄糖。第12方面提供药物组合物，其包含第I和第2蛋白酶酶原，所述第I和第2蛋白酶酶原能在肿瘤细胞的表面或接近肿瘤细胞的表面活化而增强肿瘤细胞的细胞间粘接，实现肿瘤细胞的蛋白水解，或诱导肿瘤细胞凋亡，分化或免疫识别，其中第I蛋白酶酶原是糜蛋白酶原，而第2蛋白酶酶原是胰蛋白酶原，且糜蛋白酶原胰蛋白酶原的重量比在4:1至8:1之间的范围内。在第12方面的一实施方式中，糜蛋白酶原胰蛋白酶原的重量比在5:1至7:1之间的范围内。在另一实施方式中，糜蛋白酶原胰蛋白酶原的重量比是6:1。在第12方面的另一实施方式中，药物组合物还包含在上述实施方式中任一项中定义的活性剂。第13方面提供药物组合物，其包含第I和第2活性剂，所述第I和第2活性剂各能诱导肿瘤细胞的细胞内活性，其中第I活性剂是硒化合物，而第2活性剂是细胞质糖酵解减少剂。在第13方面的一实施方式中，细胞内活性是肿瘤细胞凋亡，免疫识别或分化。在一实施方式中，硒化合物是根据上述任何一实施方式定义的。在优选的实施方式中，硒化合物是甲基硒代半胱氨酸。在另一实施方式中，细胞质糖酵解减少剂是2-脱氧-D-葡萄糖。在第13方面的另一实施方式中，药物组合物还包含在上述实施方式中任一项中定义的蛋白酶酶原。在另一实施方式中，药物组合物还包含选自在上述实施方式中任一项中定义的类香兰素化合物和糖苷水解酶的活性剂。第14方面提供根据第12或第13方面的药物组合物用于制备癌治疗用药物的用途。第15方面提供治疗癌的方法，其包括给受试者施用治疗有效量的根据第12或第13方面的药物组合物。以上方面的药物组合物，蛋白酶酶原或活性剂，可提供到药学可接受的媒质，载体或稀释剂中，且可包括一种或更多药学可接受的赋形剂。在以上方面的进一步实施方式中，药物组合物，剂，用途或方法，可包含一种或更多额外的活性剂，其能增强蛋白酶酶原，活性剂或药物组合物的功效，或减少不期望的副作用。在以上方面的进一步实施方式中，药物组合物，蛋白酶酶原，活性剂和任选地额外的活性剂，可一起，独立地或以任何组合，以栓剂形式提供。附图 说明图IA D各显示以光学密度492nm的分别Caco2，HEK293, 0E33和Panel细胞的细胞数标准曲线的图；图2显示用酶原参照制剂B处理的0E33细胞的显微照片；图3显示用一系列浓度的酶原参照制剂B处理的0E33细胞的图；图4A C各显示分别用酶原参照制剂B，J和T处理的Panel细胞的图；图5A C各显示分别用酶原参照制剂B，J和T处理的Caco2细胞的图；图6A和6B各提供显示用酶原参照制剂J处理后0E33细胞中的P -连环蛋白的上调的显微照片；图7A和7B各提供显示用酶原参照制剂J处理后0E33细胞中的E-钙粘蛋白的上调的显微照片；图8A和SB各提供显示用酶原参照制剂J处理后Panel细胞中的￠-连环蛋白的上调的显微照片；图9A和9B各提供显示用酶原参照制剂J处理后Panel细胞中的E-钙粘蛋白的上调的显微照片；图IOA和IOB各提供显示用酶原参照制剂J处理后Caco2细胞中的E-钙粘蛋白的上调的显微照片；图IIA和IlB各提供显示用酶原参照制剂J处理后Caco2细胞中的P -连环蛋白的上调的显微照片；图12提供显示用酶原参照制剂T处理后Panel细胞中的P -连环蛋白和E-钙粘蛋白的上调的显微照片；图13提供显示用酶原参照制剂T处理后Caco2细胞中的P -连环蛋白和E-钙粘蛋白的上调的显微照片；图14提供A-549，HCT-15和MIAPaCa-2细胞中JBplvP和DCM的等效线分析；图15提供A-549，HCT_15和MIAPaCa-2细胞中胰蛋白酶原和糜蛋白酶原的等效线分析；图16提供A-549，HCT_15和MIAPaCa-2细胞中胰蛋白酶原和a-淀粉酶的等效线分析；图17提供A-549，HCT_15和MIAPaCa-2细胞中糜蛋白酶原和a -淀粉酶的等效线分析；图18提供A-549，HCT-15和MIAPaCa-2细胞中TA和糜蛋白酶原的等效线分析；图19提供A-549，HCT-15和MIAPaCa-2细胞中CA和胰蛋白酶原的等效线分析；图20提供A-549，HCT-15和MIAPaCa-2细胞中TC和a -淀粉酶的等效线分析；图21提供显示在安装纤维囊的小鼠的比较体内抗-血管发生研究中组I 5的各制剂的平均囊重量的条形图；图22k和22B提供HCT-15细胞中JBplvP和甲基硒代半胱氨酸的等效线分析；图23A和23B提供HCT-15细胞中JBplvP和2_脱氧葡萄糖的等效线分析；图24A和24B提供HCT-15细胞中JBplvP和辣椒酸酯的等效线分析；以及图25A和25B提供HCT-15细胞中2_脱氧葡萄糖和甲基硒代半胱氨酸的等效线分析。缩写说明在实施例中，参照下列缩写，其中


本发明总的涉及含有蛋白酶酶原的药物组合物和其癌治疗用途。药物组合物针对包含蛋白酶酶原和活性剂的组合物，组合物能提供治疗癌的多-功能方法。药物组合物也针对组合物，其包含第1和第2蛋白酶酶原，所述第1和第2蛋白酶酶原能在肿瘤细胞的表面或接近肿瘤细胞的表面活化而增强肿瘤细胞的细胞间粘接，实现肿瘤细胞的蛋白水解，或诱导肿瘤细胞凋亡，分化或免疫识别，其中第1蛋白酶酶原是糜蛋白酶原，而第2蛋白酶酶原是胰蛋白酶原。药物组合物也针对组合物，其包含第1和第2活性剂，所述第1和第2活性剂各能诱导肿瘤细胞的细胞内活性。