Slc22a3基因突变检测特异性引物和液相芯片制作方法_许嘉森,何嘉英专利（Slca,基因突变,特异性）-早鸽网

Slc22a3基因突变检测特异性引物和液相芯片制作方法

专利名称

Slc22a3基因突变检测特异性引物和液相芯片制作方法
发明者

许嘉森, 何嘉英
公开日

2014年2月12日
申请日期

2012年7月18日
优先权日

2012年7月18日
申请人

益善生物技术股份有限公司
文档编号

C12Q1/68GK103571922SQ201210250291
关键字

Slca 基因突变特异性检测
权利要求

1.一种SLC22A3基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有 (A).针对SLC22A3基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为针对G161A位点的SEQ ID N0.13及SEQ ID N0.14，针对G191T位点的 SEQ ID N0.15 及 SEQ ID N0.16，针对 C150T 位点的 SEQ ID N0.17 及 SEQ ID N0.18，针对T182C位点的 SEQ ID N0.19 及 SEQ ID N0.20，针对 C91A位点的 SEQ ID N0.21 及 SEQ IDN0.22，和/或针对C144T位点的SEQ ID N0.23及SEQ ID N0.24 ;所述tag序列选自SEQID N0.1 ~SEQ ID N0.12 ； (B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.25~SEQ ID N0.36，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物2.根据权利要求1所述的SLC22A3基因突变检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为针对G161A位点的 SEQ ID N0.37 及 SEQ ID N0.38，针对G191T 位点的 SEQ ID N0.39 及SEQ ID N(λ40，针对C150T位点的SEQ ID N0.41 及 SEQ ID N0.42，针对 T182C 位点的 SEQID N0.43 及 SEQ ID N0.44，针对 C91A 位点的 SEQ ID N0.45 及 SEQ ID N0.46，和 / 或针对C144T 位点的 SEQ ID N0.47 及 SEQ ID N0.483.根据权利要求1或2所述的SLC22A3基因突变检测液相芯片，其特征是，所述ASPE引物为针对G161A位点的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.13组成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.14组成的序列，针对G191T位点的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.15组成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.16组成的序列，针对C150T位点的由SEQ ID N0.5和SEQ ID N0.17组成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.18组成的序列，针对T182C位点的由SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.19组成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.20组成的序列，针对C91A位点的由SEQ ID N0.9和SEQ ID N0.21组成的序列及由SEQ ID N0.10和SEQ ID N0.22组成的序列，和/或针对C144T位点的由SEQ ID N0.11和SEQ ID N0.23组成的序列及由SEQ ID N0.12和SEQ ID N0.24组成的序列4.根据权利要求1所述的SLC22A3基因突变检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂为5-10 个 T5.用于SLC22A3基因突变检测的特异性引物，其特征是，所述特异性引物序列为针对G161A 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，针对 G191T 位点的 SEQ ID N0.15 及 SEQ IDN0.16，针对 C150T 位点的 SEQ ID N0.17 及 SEQ ID N0.18，针对 T182C 位点的 SEQ ID N0.19及 SEQ ID N0.20，针对 C91A 位点的 SEQ ID N0.21 及 SEQ ID N0.22，和 / 或针对 C144T 位点的 SEQ ID N0.23 及 SEQ ID N0.24
技术领域

[0001]本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种SLC22A3基因突变检测特异性引物和液相芯片
专利摘要

本发明公开了一种SLC22A3基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为针对G161A位点的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，针对G191T位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16，针对C150T位点的SEQ?ID?NO.17及SEQ?ID?NO.18，针对T182C位点的SEQ?ID?NO.19及SEQ?ID?NO.20；针对C91A位点的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22；和/或针对C144T位点的SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，能实现多个突变位点的野生型和突变型单独和并行检测。
专利说明

SLC22A3基因突变检测特异性引物和液相芯片

专利详情
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权力要求
说明书
法律状态

Slc22a3基因突变检测特异性引物和液相芯片的制作方法[0002]SLC22A3基因英文名称为Solute carrier family 22 member 3，又被称为有机阳离子运载体3(0CT3)或神经元外单胺递质载体(EMT)，位于6号染色体6q25.3上。SLC22A3基因编码阳离子转运蛋白3 (人类编码EMT蛋白，大鼠编码0CT3蛋白)，广泛分布于前中期胎盘、骨骼肌、前列腺、大动脉、肝脏、唾液腺和肾上腺等组织器官上。SLC22A3基因是不依赖于钠离子的多特异性的递质载体。转运的基质包括组胺，五羟色胺，去甲肾上腺素，多巴胺和1-甲基-4-苯基吡啶离子，转运的能力以及这些基质的亲和力在老鼠和人类之间有所不同。如果服用毒品和药物，例如摇头丸、五氯苯酚、地佐环平、安非他明、甲基安非他明和可卡因，就会抑制有机阳离子运载体3的转运能力。 [0003]目前，SLC22A3基因突变检测方法主要有:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD1-TOF MS)技术，荧光定量PCR技术，Illumina光纤微珠芯片技术和PCR-SSCP。基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术是一种软电离技术，在蛋白质等生物大分子的检测中有着强大而成熟的功能，但是在核酸检测领域，由于核酸分子本身的特殊性，检测受到一定的限制。而荧光定量PCR技术，则存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型的缺点。Illumina光纤微珠芯片技术虽然是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，也不能满足实际应用的需要。而PCR-SSCP技术虽然操作简单，但存在着假阴性和假阳性，一般对长度不超过300bp的待测片段的检出率为70~80%，且仅能检测是否存在突变，而不能区分具体突变的碱基类型，很难满足自动化的需要，难以大规模开展工作。[0004]本发明目标检测的SLC22A3基因突变位点，如表所示:[0005]

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