当归静脉注射液及其制备方法

周云峰

2002年10月30日

2002年4月10日

2002年4月10日

武汉大学

A61P29/00GK1376504SQ02115699

静脉注射 当归

1.一种当归静脉注射液，其基本组成为当归50～500克/升注射液、氯化钠8.0～8.5克/升注射液，其余为注射用水2.根据权利要求1所述的当归静脉注射液，其特征是当归250克/升注射液、氯化钠8.5克/升注射液3.权利要求1所述当归静脉注射液的制备方法，其特征是取全当归药材，用水洗净泥沙，沥干水分，每100公斤净药材用12.5公斤的48～49度白酒拌匀，闷润至软，切成1～2毫米的横头圆片；取上述横头圆片50～500克按7∶1加水煎煮60分钟，用6-8层纱布滤过；所得药渣按5∶1加水煎煮40分钟，用6-8层纱布滤过；所得药渣按4∶1加水煎煮30分钟，用6-8层纱布滤过；合并三次滤液，将滤液浓缩至w/v为1∶1，冷却至室温，在急速搅拌下缓缓加入乙醇，使药液含醇量达50％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第二次浓缩至5∶1，加入乙醇，使药液含醇量达75％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第三次浓缩至10∶1，加入乙醇，使药液含醇量达90％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第三次除尽乙醇后，树脂过滤，加注射用水稀释至1∶2，再加0.5％活性炭煮沸10-15分钟，静置3-10分钟，滤过脱碳；在滤液中按配制量加入氯化钠使其溶解，105℃下灭菌30分钟，冷藏48小时后用活性炭层过滤，滤液加注射用水充分稀释，再用氢氧化钠溶液调pH值至8-10，最后加注射用水至1000毫升；过滤至澄明、超声纯净、灌封，115℃灭菌30分钟即得所需当归静脉注射液

本发明涉及一种当归静脉注射液及其制备方法本发明提供的技术方案是一种当归静脉注射液，其基本组成为当归50～500克/升注射液、氯化钠8.0～8.5克/升注射液，其余为注射用水上述当归静脉注射液的制备方法，取全当归药材，用水洗净泥沙，沥干水分，每100公斤净药材用12.5公斤的48～49度白酒拌匀，闷润至软，切成1～2毫米的横头圆片；取上述横头圆片50～500克按7∶1(水∶当归，质量比，下同)加水煎煮60分钟，用6-8层纱布滤过；所得药渣按5∶1加水煎煮40分钟，用6-8层纱布滤过；所得药渣按4∶1加水煎煮30分钟，用6-8层纱布滤过；合并三次滤液，将滤液浓缩至w/v为1∶1，冷却至室温，在急速搅拌下缓缓加入乙醇，使药液含醇量达50％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第二次浓缩至5∶1，加入乙醇，使药液含醇量达75％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第三次浓缩至10∶1，加入乙醇，使药液含醇量达90％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第三次除尽乙醇后，树脂过滤，加注射用水稀释至1∶2，再加0.5％活性炭煮沸10-15分钟，静置3-10分钟，滤过脱碳；在滤液中按配制量加入氯化钠使其溶解，105℃下灭菌30分钟，冷藏48小时后用活性炭层过滤，滤液加注射用水充分稀释，再用氢氧化钠溶液调pH值至8-10，最后加注射用水至1000毫升；过滤至澄明、超声纯净、灌封，115℃灭菌30分钟即得所需当归静脉注射液临床使用表明，用本发明获得的当归静脉注射液，可用于静脉注射或静脉滴注，对血栓闭塞性脉管炎、脑梗塞、冠心病、高血压、间质性肺炎、缺血性劳损、股骨头坏死、风湿性肌病妇科疾病、类风湿性关节炎、突发性耳聋等症具有较好疗效实施例2当归静脉注射液，其基本组成为当归50克/升注射液、氯化钠8.5克/升注射液实施例3当归静脉注射液，其基本组成为当归100克/升注射液、氯化钠8.2克/升注射液实施例4当归静脉注射液，其基本组成为当归500克/升注射液、氯化钠8.0克/升注射液上述当归静脉注射液的制备方法，取全当归药材，最好为甘肃岷县产全当归药材，用水洗净泥沙，沥干水分，每100公斤净药材用12.5公斤的48～49度白酒拌匀，闷润至软，切成1～2毫米的横头圆片；按实施例中对应当归含量取上述横头圆片，按7∶1(水∶当归，质量比，下同)加水煎煮60分钟，用6-8层纱布滤过；所得药渣按5∶1加水煎煮40分钟，用6-8层纱布滤过；所得药渣按4∶1加水煎煮30分钟，用6-8层纱布滤过；合并三次滤液，将滤液浓缩至w/v为1∶1，冷却至室温，在急速搅拌下缓缓加入乙醇，使药液含醇量达50％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第二次浓缩至5∶1，加入乙醇，使药液含醇量达75％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第三次浓缩至10∶1，加入乙醇，使药液含醇量达90％，冷藏48小时，滤过，回收乙醇；第三次除尽乙醇后，树脂过滤，加注射用水稀释至1∶2，再加0.5％活性炭煮沸10-15分钟，静置3-10分钟，滤过脱碳；检查滤液中钾离子含量(用波长520nm绿色滤光片行光电比浊或火焰光度法测定，含钾量不得超过20mg/100ml，否则通过732型阳离子交换树脂进行交换至合格)，合格后，在滤液中按配制量加入氯化钠使其溶解，105℃下灭菌30分钟，冷藏48小时后用活性炭层过滤，滤液加注射用水充分稀释，再用氢氧化钠溶液调pH值至8-10，最后加注射用水至1000毫升；过滤至澄明、超声纯净、灌封，115℃灭菌30分钟即得所需当归静脉注射液本发明的当归静脉注射液的药理学实验1.对血液流变学的影响①对红细胞性状的作用采用人抗凝血分别加入Ca2+螯合剂A23187、高分子右旋糖酐，用红细胞聚集仪和激光衍射光学旋转细胞分析仪分别测定红细胞聚集性和变形性，清楚地发现用本发明的当归注射液可显著降低红细胞聚集速度，不影响红细胞解聚能力，可以显著逆转A23187导致的红细胞变形性降低②对血小板功能的影响用本发明的当归注射液处理腹主动脉内皮损伤的实验动物后，电镜观察到血小板在胶原组织上的粘附明显减少在动脉粥样硬化和心瓣膜病存在的情况下，这种胶原暴露是极其常见的， 也往往是TIA发生的原因本发明抗血小板的功能无疑有利于防止附壁血栓的形成及扩大③对细胞因子的作用内皮素是已知存在于哺乳动物体内的最强的血管收缩素；TXA2也是一种较强的血管收缩剂和血小板聚集剂，而PGI2则是一种较强的血小板抑制剂和血管扩张剂，它们均受缺血缺氧的刺激而表达量增加在动物实验中观察到本发明的当归注射液能降低血清和缺血组织内TXA2/PGI2或其前体物的比值2.抗自由基损伤①本发明的当归注射液能降低脑缺血模型大鼠脑组织匀浆内丙二醛(MDA)的含量，并阻止SOD活性的下降细胞培养研究发现本发明能明显抑制Cu2+介导的LEL氧化反应而后者在动脉粥样硬化的形成中起关键的始动作用本发明有增加SOD活性，清除氧自由基，抗脂质过氧化反应，减低MDA水平，升高PGI2，降低TXA2，调整PGI2/TXA2平衡和抑制血小板聚集的作用②心肌缺血再灌注损伤模型的实验研究中，本发明能减少心肌细胞内Ca2+、Na+的蓄积、MAD的生成、CPK、LDH、SGOT的释放；降低冠状动脉血管阻力和心肌含水量，心功能恢复及心肌超微结构改变较对照组好表明本发明具有良好的心肌保护作用③抗血管内皮损伤抗平滑肌细胞增殖及动脉粥样硬化的作用多年研究应用发现，本发明具有抗动脉粥样硬化的作用本发明可抑制血小板在胶原的粘附，阻断血小板源生长因子(PDGF)对血管平滑肌增殖的诱导作用④通过观察本发明的当归注射液干预后，培养兔主动脉平滑肌细胞(VSMC)摄入氚-胸腺嘧啶核苷的量、增殖细胞核抗原(PCNA)表达，同时检测培养液中SOD、LPO、PGI2以及cAMP，结果发现本发明的当归注射液可增加SOD的活性，降低LPO和升高PGI2和cAMP的水平，抑制PCNA的表达；使氚-胸腺嘧啶核苷的掺入量明显降低说明本发明有抑制平滑肌细胞增殖的作用3.实验性脑缺血/再灌注损伤①阻断Wistar大鼠大脑中动脉90min恢复再灌流，并持续滴注7.5ml本发明25％的当归注射液，第八天后处死，病理染色、图像分析，结果表明，当归组梗塞体积显著性缩小②线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉局灶性缺血模型，同时腹腔注射当归注射液(12g/kg，每12小时一次)，48小时后，用TUNEL法观察到当归组缺血半暗带内凋亡细胞数显著减少，免疫组化法观察到凋亡抑制基因Bcl-2的表达显著增加，Bax基因的表达无变化显示当归通过增加Bcl-2的表达发挥抑制缺血性神经细胞凋亡的作用③缺血模型制作阻断前30分钟鼠尾静脉注射当归注射液(6ml/kg)，结果缺血30分钟再灌60分钟后脑组织匀浆内MDA含量、TXB2/PGF1α比值在当归组明显下降，而其内SOD含量明显回升，电镜下缺血组织超微结构破坏减轻④用本发明治疗心肌缺血/再灌注模型，观察到血清MDA降低、SOD活性升高，热休克蛋白70的表达增加，蛋白激酶-C(CPK-C)的含量与活性增加，且分布转移到细胞膜，缺血心肌显微结构改善，梗死面积缩小4.应用膜片嵌全细胞记录技术观察本发明对单个鼠心室肌细胞膜钠通道电流(INa)、L型钙通道电流(ICa-L)的影响，结果发现，当归注射液使INa、ICa-L的电流-电压曲线上移，但均不改变其激活、峰值和反转电位，提示当归注射液对钠、钙(L)通道具有浓度依赖性阻滞作用5.以博莱霉素(国产名为平阳霉素)1次气管内灌注造成大鼠急性肺损伤，用当归注射液作用后，发现本发明能显著减轻肺泡炎的程度，减少肺部炎症介质的分泌，抑制丙二醛的产生6.结扎肝硬化犬的实验中持续输注本发明当归注射液80mg·kg-1·min-1达60min前后的血浆TXA2/PG I2水平分别增加80.12％、152.77％和299.31％，6-keto-PGF12水平分别下降60.48％、59.25％和56.56％，TXA2/`6-keto-PGF12比值恢复到正常犬的基础水平，说明本发明可通过改变TXA2/PGI2的代谢而降低门脉压7.在SD大鼠腹腔注射CCl4的同时，于不同阶段投予本发明当归注射液12周后，取肝脏作VG和HE染色，结果表明，早、中期投予当归注射液组，其肝纤维化程度显著轻于后期投药组，肝内胶原含量亦显著少于后者提示本发明可显著减轻肝纤维化程度，对CCl4所致的慢性肝损伤的肝脏超微结构有明显保护作用8.观察本发明对重症急性胰腺炎模型(SAP)血液流变学、TXA2/PGI2、肾脏、胰腺的变化的影响结果SAP制作后8小时胰、肾组织出现严重损害、肾功能明显下降，肾静脉血浆中TXA2/PGI2比值升高，肾动脉血液流变学异常，静脉注射当归注射液后明显降低了TXA2/PGI2的比值，改善了血液流变学的异常，胰、肾组织损害明显减轻，肾功能得到改善显示血液流变学的异常及TXA2/PGI2失衡参与了AHNP胰、肾损害的发生及当归注射液的保护作用9.应用直接测定门静脉压的方法，就本发明当归注射液对大白鼠门静脉压影响进行试验，结论显示当归注射液能显著降低大鼠的门静脉压，且起效快、持续时间长、降压幅度大10.本发明对博莱霉素致鼠纤维化的治疗作用采用BLM喂养30d(天)后，腹腔注射25％当归注射液，第45天处死观察，以生理盐水作对照，结果发现治疗组肺纤维化明显减轻显示本发明能延缓博莱霉素诱导的肺纤维化进程，缓解其所致的肺纤维化病变本发明当归注射液的临床应用一、对血液系统和脑血管系统的作用1.临床实验中观察到本发明能降低血清和缺血组织内TXA2/PGI2或其前体物的比值2.采用氧化高密度脂蛋白(OLDL)损伤培养的人脐静脉内皮细胞，以本发明当归注射液干预，干预后细胞外液中乳酸脱氢酶的漏出减少，用扫描电镜观察到内皮细胞结构受损减轻，用免疫组化的方法观察到动脉粥样硬化的抑制因子TGFβ表达增加，而促进因子bFGF表达减少；同时用免疫组化的方法观察到当归干预能拮抗受损内皮细胞NO表达的下降、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的升高；这一拮抗作用能为阿托品所阻断，提示本发明可通过兴奋M型胆碱能受体减轻内皮细胞受损，减少受损内皮细胞分泌促动脉硬化形成的细胞因子量，增加血管舒张因子的分泌量采用TNF-Q损伤培养的人脐静脉内皮细胞，导致细胞骨架的重排，加入本发明当归注射液处理后，这种重排被逆转3.武汉大学中南医院用本发明的当归注射液对52例血栓闭塞性脉管炎治疗的临床数据为治愈4例，显效11例，有效31例，总有效率88.5％4.武汉大学中南医院用本发明的当归注射液联合甘露醇治疗急性缺血性脑血管病(AICD)80例，有效率77.5％，与低分子右旋糖酐(低右)对照有明显差异同时观察到当归治疗组全血高切粘度，血浆高切粘度，全血还原粘度及红细胞聚集指数显著下降，这些改变持续到治疗后第15天，且治疗15天后红细胞变形指数明显高于入院时一个月后CT脑梗死灶明显缩小治疗中未发现明显毒副反应5.武汉大学中南医院对1404例AICD随机分为用本发明的当归注射液治疗组(692例)和两个对照亚组一组用低分子右旋糖酐治疗(322例)，一组用丹参治疗(390例)诊断标准及疗效评定采用全国第二次脑血管病学术会议推荐方案动态观察神经功能缺损评分(1、3、7、15、25d)并记录毒副反应，治疗满30d后复查头颅CT扫描并比较梗死体积的变化终点观察指标包括Barthel指数(一个月)、病死率(一年)及复发率治疗14d，结果当归组有效率为78.7％，显著高于两对照组(P＜0.005)，神经功能缺损评分得到有显著意义的改善时间点当归组在第7d、丹参组在5d、低右组在25d显示当归注射液起效早，可能对急性缺血性脑损伤有抑制作用Barthel指数评分当归组最高(P＜0.05)梗死灶较治疗前明显缩小(P＜0.05)未观察到明显毒副反应结果表明本发明治疗AICD有显著疗效；疗效优于目前临床常用的丹参和低分子右旋糖酐二、对心血管的作用1.临床观察结果显示，本发明能降低高血压病、冠心病患者血清ET-1、TXA2水平，提高PGI2水平，降低血小板的粘滞性2.冠心病患者静脉滴注本发明后，血浆SOD、6-酮前列腺素-F1α(6-keto-PGF1α)和6-keto-PGF1α/血栓素B2(TXB2)比值均升高，丙二醛、TXB2和血小板最大聚集率均降低表明本发明有增加SOD活性，清除氧自由基，抗脂质过氧化反应，减低MDA水平，升高PGI2，降低TXA2，调整PGI2/TXA2平衡和抑制血小板聚集的作用三、对其它血管性疾病的作用1.对肺循环的作用临床结果显示，本发明能降低COPD伴肺动脉高压患者肺动脉平均压、全血低切变率比粘度、红细胞比积、血浆TXA2含量均较治疗前明显降低而动脉血气、体循环血压及前列环素的含量无明显变化说明本发明具有扩张肺血管的作用另外，本发明不仅对患者平均肺动脉压、肺血管阻力降低外，还观察到血浆ET-I，AT-II和EDF明显降低、动脉血氧分压升高2.对肝门脉系统的作用静脉滴注本发明后，患者全身血液动力学无明显变化，门脉血液动力学则变化显著，表现为肝静脉嵌压(WHYP)和肝静脉压力梯度(HVPG)显著下降，门静脉和脾静脉血流量显著减少，但其降压效果与基础WHVP呈反比说明本发明可通过减少门静脉血流量而降低门脉压，但没有全身性副作用本发明的功能与主治(适应症)活血化淤，用于血栓闭塞性脉管炎、脑梗塞、冠心病高血压、间质性肺炎、缺血性劳损、股骨头坏死、风湿性肌病、妇科疾病、类风湿性关节炎、突发性耳聋等症用法与用量静脉注射或静脉滴注，一日一次，每次10-500ml，1-2周为一个疗程或遵医嘱