专利名称：一种含有海洋深层水的保健饮用液在制备预防或治疗高脂血症的药物或保健品中的应用的制作方法随着人们生活水平的不断提高，生活方式以及饮食结构都发生了重大的变化，高脂血症等心脑血管疾病的发病率也越来越高。高脂血症又称为脂质代谢紊乱或异常，主要是指血液中的TC、LDL-C及TG高于正常范围及/或HDL-C水平过低。脂质代谢紊乱可引起血液粘稠度增高，血流缓慢，血液中过多的脂质沉积于动脉内壁，形成粥样硬化斑块，造成动脉狭窄，血流受阻，靶器官供血減少进而形成损伤。脑部动脉硬化可引起脑溢血或脑血栓；心脏冠状动脉硬化可引起胸闷、心慌，严重者可导致心肌梗塞。此外，高脂血也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的ー个重要危险因素。研究发现在心脑血管疾病的发病机理中，高脂血症是ー个主要的独立危险因素，血清脂质水平下降1%，冠心病的发病率就会降低2%，所以控制高脂血症的发生及发展对于预防心脑血管疾病有着重要的意义，高脂血症的预防和治疗已经成为目前的研究热点。在高脂血症的治疗中，他汀类药物应用最广泛，能够有效降低血液中LDL-C的浓度，长期使用后能降低心血管意外事件的发生率和冠心病死亡率。但是这种药物具有一定的副作用，诸如肝功能损害、横纹肌溶解症、肌肉疼痛、乏力、皮疹等；而且停药后血脂回升较快，难以达到长期治疗和预防的目的。调整饮食习惯和改善生活方式是治疗各种高脂血症的基础，尤其对于原发性的高脂血症患者，应首选饮食治疗。杨卫国等人的研究表明随着膳食结构的改变，75%的患者血脂水平有不同程度的下降。美国近20年来人群血脂水平的下降与医师和患者对饮食治疗的重视程度有夫。因此，研究开发具有降脂作用的食物，对通过调整膳食结构从而改善闻血脂症具有重要意义。研究表明，矿物元素与高脂血症等心脑血管疾病的发生和发展密切相关，通过饮食补充有益矿物元素镁、钙、铬、锰、锌、硒，同时减少有毒微量元素汞、铅等的接触，以维持体内矿物兀素含量的相对稳定，对预防闻脂血症等心脑血管疾病的发生具有积极意义。海洋深层水通常是指阳光照射不到，不能进行光合作用，约200m深度以下的海 水。海洋深层水处于无阳光进入的海洋无光层，而且远离来自人类、陆地以及大气的化学物质的影响和污染。研究表明，海洋深层水具有以下几个主要特点(I)低温恒定性-不受阳光照射，不像海洋表层水温度变化无常，海洋深层水终年温度不变，恒定于5°C左右；(2)矿物元素丰富且稳定性-与海洋表层水相比，海洋深层水富含人体所必需的钙、镁、钾、钠、铁、铜、锂、钥、锰、锌、锗、碘、磷、氟、硒、三价铬、硅酸根离子等92种矿物元素，涵盖了人体新陈代谢所需的元素种类。除了其含量丰富外，由于这些水以漫长的时光流动于“无光层”的海洋深层，无光合作用发生、不受外界影响，因此所含矿物元素的成分十分稳定，完美地解决了人体平衡摄取各种所需矿物元素的要求；(3)无菌清洁性-处于海洋“无光层”的深层水，除了远离人类现代文明的影响以及不受陆地、大气化学物质、病菌的污染外，本身也无生成病原菌等细菌的条件。因此，海洋深层水是非常清洁的无菌自然之水；(4)海洋深层水水质呈弱碱性。由于具有以上特点，海洋深层水作为ー种新的天然资源正在受到世人的瞩目。海洋深层水富含各种矿物质和微量元素，理论上它对高脂血症具有很好的改善作用。我国海域宽广，海岸线漫长，海洋资源丰富，但尚无海洋深层水开发应用方面的研究；而且我国水资源紧缺，水污染严重，开发我国的海洋深层水资源具有十分重要的意义。
针对目前我国水资源日益紧缺、水污染日趋严重且高脂血症发病率急剧升高等热点问题，本发明提供了ー种含有海洋深层水的保健饮用液在制备预防或治疗高脂血症的药 物或保健品中的应用。为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现ー种含有海洋深层水的保健饮用液在制备预防或治疗高脂血症的药物或保健品中的应用，所述保健饮用液包括A液和B液，所述A液为淡水，所述B液经以下步骤制得 海洋深层水经反渗透装置后分离出的浓水部分，将浓水部分进行减压浓縮，使其体积浓缩至原来体积的0. 67-3. 33%，然后过滤除去析出的氯化钠，得到的高度浓缩液即为B液，所述保健饮用液的硬度在200-1000ppm，所述海洋深层水为海平面500m以下且经脱盐处理后的海水。对上述技术方案的进ー步改进所述保健饮用液中镁钙钾钠元素的浓度比值为2. 5-3. 5 0.45-1 0.3-1 0. 3-1. 5，不含有机物，且水质呈弱碱性。对上述技术方案的进ー步改进所述镁钙钾的浓度最优比为3 : I : I。对上述技术方案的进ー步改进所述保健饮用液的水质呈弱碱性，25°C測定的pH值 I. 5±0. 3。对上述技术方案的进ー步改进所述保健饮用液中的有益元素含量为锌0.0325-16. 4 u g/L ;硒 0. 0395-0. 712 y g/L ;铬 0. 104-4. 54 u g/L ;锰 0. 156-5. 52 u g/L。对上述技术方案的进ー步改进所述保健饮用液中的有害元素含量为铅<5 u g/L ;萊< 0. 5 y g/L ;砷< 5 u g/L ;镉< I u g/L。对上述技术方案的进ー步改进所述海洋深层水取自于距离海岸线20km以外。对上述技术方案的进ー步改进所述淡水来源于海洋深层水经反滲透装置循环后分尚出的淡水。对上述技术方案的进ー步改进日常饮食对矿物质的摄取较少的高脂血症患者选用硬度为600-1000ppm的保健饮用液，反之选择硬度为200-400ppm的保健饮用液。与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是本发明提供的含有海洋深层水的保健饮用液富含有益微量元素镁、钙、钒、铬、锰、锌、硒，而有毒微量元素汞和铅的含量很低，该保健饮用液可以显著降低血清脂质水平及动脉粥样硬化指数(LDL-C/HDL-C)，同时减少肝脏脂质蓄积，并且显著降低空腹血糖含量，提示该保健饮用液能显著调节机体脂质代谢紊乱及其并发的脂肪肝和糖尿病，对高脂血症等代谢性疾病具有较好的预防和治疗作用。下面结合对本发明的技术方案作进ー步详细的说明。实施例I一、保健饮用液的制备本发明所述保健饮用液的制备方法如下I)海洋深层水预处理将取自距离海岸线20km以外，海平面500m以深的海洋深 层水放入储水罐中，采用滤器过滤，除去海水中的浮游植物及微生物，并通过活性炭过滤器过滤，进ー步除去有机物。2)淡水和浓水分离将预处理后得到的海洋深层水通过高压泵进入反滲透装置将海洋深层水分为淡水部分和浓水部分(淡水部分水质与纯浄水相同，或水质接近纯净水；浓水部分中各种阴阳离子的浓度接近原海水中各种离子浓度的2倍)，分离出的淡水部分即A液进入淡水储水罐，分离出的浓水部分进入浓水储水罐。反滲透装置的エ艺參数为运转压4MPa，功率I. 5KW，产水量IT/d。3)浓水脱钠处理将浓水储水罐中的浓水部分进行减压浓缩，使其体积浓缩至原来体积的0. 67-3. 33%，然后过滤除去析出的氯化钠，得到高度浓缩的浓缩液即为B液，所述浓缩液中镁:钙钾:钠元素的浓度比值为2. 5-3. 5 0. 45-1 0. 3-1 0. 3-1. 5，所述镁、钙、钾、钠元素在浓缩液中的含量浓度单位为mg/L。其中微量元素铬，锌，硒，锰等的浓度与浓缩倍数呈倍比关系。或者，也可以采用选择性电渗析对反渗透后分离出的浓水部分进行脱钠处理，电渗析装置采用I价阳离子选择性透过膜，阴膜采用普通离子交換膜。在电渗析过程中所有阴离子都可透过阴膜，仅单价阳离子透过阳膜，脱钠之后的浓水中的多价阳离子与原浓水中的浓度相近。4)保健饮用液灌装将经过步骤I)反滲透装置出来的淡水A液和步骤3)所得到的B液可以按照需求混合制得不同硬度的保健饮用液，所述硬度以CaCO3的含量计算(GB5749-2006生活饮用水卫生标准)，其计算公式为硬度=Ca (ppm)) X2. 5+Mg(ppm) X 4. 1，经过高温灭菌，分装即可。采用电感耦合等离子质谱(ICP-MS)对保健饮用液中的无机元素含量进行测定以硬度为1000的保健饮用液为例，其中几种主要矿物质及微量元素含量为镁200-224mg/L ;钙33-67mg/L ;钾20-67mg/L ;钠:20_100mg/L(钠的含量越低越好);锌
0.0325-16. 4 u g/L ；硒:0. 0395-0. 712 y g/L ;铬:0. 104-4. 54 u g/L ；锰 0. 156-5. 52 u g/L,铅< 5 u g/L ;汞< 0. 5 u g/L ;砷< 5 u g/L ;镉< I y g/L。本发明所述200-1000硬度下的保健饮用液中矿物质及微量元素含量与其硬度成正比。所述保健饮用液中镁I丐钾钠元素的浓度比值为
2.5-3.5 0. 45-1 0.3-1 0. 3-1. 5，富含有益微量元素锌，硒，铬，锰，有毒微量元素铅，汞，神，镉含量较低，不含有机物，且水质呈弱碱性。所述有益微量元素含量如下锌:0.0325-16. 4 U g/L； :0. 0395-0. 712 U g/L ；铬0. 104-4. 54 u g/L M 0. 156-5. 52 u g/L。
所述有毒微量兀素含量如下铅< 5ii g/L ;萊< 0. 5 U g/L ;砷< 5 ii g/L ；镉< I U g/L。
使用pH计对其pH值进行測定(25°C )，结果表明保健饮用液pH值在7. 5±0. 3范围内，水质呈弱碱性。ニ、保健饮用液预防高脂血症的药效学实验-细胞水平I、实验方法取对数生长期的IfepG2细胞，经胰酶消化后5 X IO5ceIVmL接种于6孔板；待细胞长汇合度约70%，换为不含血清的DMEM，饥饿12h ;分别加入不同硬度的保健饮用液(硬度分别为 200，400，600，800，IOOOppm)，I u mol/L 的洛伐他汀(Lovastatin, Lova)作为阳性对照，空白组给予蒸馏水；24h后，吸除剰余培养液，冰PBS洗2適，加入100 u L细胞裂解液，吹打均匀，冰水中孵30分钟，期间不断用细胞刮涂抹，使裂解液和细胞充分接触；将裂解液转移至I. 5mLep管中，低温超声破碎IOs ；12000rpm 15min 4°C离心，_80°C冷冻保存，用于检测细胞内的脂质含量；蛋白质含量測定用BCA蛋白浓度測定试剂盒測定，按试剂盒说明书操作；分别测定细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量TC含量按胆固醇测定试剂盒 Amplex Red Cholesterol Assay Kit 的说明书进行測定；TG 含量按 Infinity Triglycerides Reagent说明书进行；单位以姆毫克蛋白质中脂质含量O g/mg protein)计算。2、实验结果由表I可以看出，经过24h的孵育，该保健饮用液可以剂量依赖性地降低H印G2胞内脂质含量，其中硬度为800和IOOOppm的保健饮用液可以显著降低H印G2胞内的TC的含量，硬度为IOOOppm的保健饮用液可以显著降低胞内TG的含量。表I :保健饮用液对H印G2细胞胞内脂质含量的影响
组别TCTG
空白组59.98±4.1872.64±2.87
20053.98±4.8766.71±1.79
40052.18±4.3065.26±2.35
60049.35±1.2163.16±0.99
80046.84±0.82#58.35±1.62
100042.16±1.25#54.61±2.03#^Lova 组 _35.63±4.32## _ 59.06±1.79 —注与空白组对比#p< 0. 05，##p < 0. 01 ；三、保健饮用水预防高脂血症的药效学实验-动物水平I、实验方法Wistar大鼠40只，雄性，体重180_220g，随机分为空白组、模型组、阳性对照(Lova)组和保健饮用液组，每组10只。实验期间大鼠自由进食普通饲料和饮水，空白组、模型组、Lova组均给予蒸馏水，保健饮用水组给予硬度为IOOOppm的保健饮用液。每天上午Lova组灌胃洛伐他汀(5mg kg_l)，其余各组灌胃5%。CMC-Na ;下午空白组灌胃等体积土温-80和丙ニ醇混合物(体积分数I : 1)，其余各组灌胃高脂乳剂(25%猪油、10%胆固醇、2 %胆酸钠、I %丙基硫氧嘧啶，20 %吐温80，20 %丙ニ醇和22 %水)，灌胃剂量均为10mL*kg-l。毎日观察大鼠生长情况，包括行为、毛发等，准确记录摄食量、摄水量；每周固定时间称量体重。实验周期为28d。于末次给药后，大鼠禁食不禁水12h，摘眼球取血，离心取血清，測定血清中总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，丙ニ醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)含量；剥离肝脏、肾脏，称重，计算脏器指数；制备肝匀浆，离心，取上清液測定肝脏TC和TG ;动物肝脏用固定液固定，石蜡包埋后切片，HE染色，进行组织病理学检查。2、实验结果I)保健饮用液对高脂血症大鼠体重、摄食量和饮水量的影响实验期间空白组大鼠状况良好，毛色有光泽，活动自如，摄食、饮水正常；模型组大鼠开始进食良好，随着造模时间的延长，大鼠毛色渐偏黄，光泽度差，蜷缩少动，体重减轻，进食进水減少；而给予保健饮用液之后，大鼠的行为、毛发等都有所改善，而且体重、摄食量和饮水量都有恢复正常的趋势。 表2 :保健饮用液对高脂血症大鼠体重的影响(，n = 10，g)


本发明提供了一种含有海洋深层水的保健饮用液在制备预防或治疗高脂血症的药物或保健品中的应用，保健饮用液包括A液和B液，A液为淡水，所述B液为海洋深层水经反渗透装置分离出的浓水部分，再经减压浓缩得到的高浓度浓缩液，硬度范围为200-1000ppm。该保健饮用液以自由饮用的方式给予高脂乳剂造模的高脂血症大鼠，给药28天后，能显著降低高脂血症大鼠的血脂水平，抑制脂质过氧化，并显著提高脂蛋白代谢酶LCAT，LPL及HL的活性，从而改善高脂血症大鼠体内的脂质代谢紊乱状态及其并发的脂肪肝和糖尿病。该保健饮用液来源于海洋深层水，具有资源丰富，易于产业化等优点，在高脂血症的防治方面具有广阔的市场和应用前景。