五节芒快速繁殖方法_易自力专利（五节,繁殖,快速）-早鸽网

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五节芒快速繁殖方法

专利名称

五节芒快速繁殖方法
发明者

易自力, 艾辛, 蒋建雄, 覃静萍, 陈智勇
公开日

2012年7月18日
申请日期

2012年3月23日
优先权日

2012年3月23日
申请人

湖南农业大学
文档编号

A01H4/00GK102577983SQ20121008058
关键字

五节繁殖快速
权利要求

1.五节芒快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括如下步骤1)外植体的选择与灭菌选用五节芒的幼穗，将幼穗外包裹的多层叶或叶鞘去除，仅保留幼穗外的旗叶，用无菌水清洗3 4次后，在无菌操作台上用70%酒精处理15-30秒，再用O. I %的升汞消毒18 20分钟,用无菌水冲洗6 7次备用；2)胚性愈伤组织的诱导将灭菌处理后带旗叶的幼穗，在超净台剥去旗叶，将幼穗切成穗段，接种在MS+2. 0-6. Omg/L 2，4-D+0-0. 2mg/L 6-BA的愈伤组织诱导培养基；在 250-3001ux光照下培养，保持温度24±2°C，诱导产生愈伤组织；3)丛生芽诱导及增殖愈伤组织接种在MS+1.0-4. Omg/L 6-BA的分化培养基；在 20001ux光照下培养，保持温度24±2°C，直至形成丛生芽；4)生根培养以MS+1. Omg/L IAA+0. lmg/L I BA+1. Omg/L CCC 诱导芽和根2.根据权利要求I所述的五节芒快速繁殖方法，其特征在于，步骤I)中所述外植体的选择取幼穗时叶枕距为0-2cm3.根据权利要求I或2所述的五节芒快速繁殖方法，其特征在于，步骤I)中所述的外植体选用五节芒处于颖花原基形成期的幼穗4.根据权利要求I所述的五节芒快速繁殖方法，其特征在于，步骤2)中将幼穗切成O. 3-0. 5cm长度的穗段5.根据权利要求I或4所述的五节芒快速繁殖方法，其特征在于，步骤2)中接种瓶内每瓶接种2-5个穗段6.根据权利要求I所述的五节芒快速繁殖方法，其特征在于，步骤3)中愈伤组织生长至直径O. 5-0. 8cm，挑选淡黄色并致密的愈伤组织，接种在分化培养基
技术领域

本发明属于植物细胞工程领域，涉及植物组织工程技术，具体地说是一种五节芒的组织快繁方法
背景技术
具体实施例方式

以下结合实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明实施例I取材五节芒(M. floridulus)02117采自湖南郴州，保存于湖南农业大学芒属植物资源圃内I、外植体的选择与灭菌选用五节芒优良单株，切取叶枕距为O的处于颖花原基形成期的幼穗首先将幼穗外部叶清除干净，仅留旗叶，用无菌水清洗3次后，在无菌操作台上用70%酒精处理15秒左右,再用O. I %的升汞消毒18分钟,用无菌水冲洗6次备用；2、胚性愈伤组织的诱导将灭菌处理后带旗叶的幼穗，在超净台上去除旗叶，将幼穗切成O. 3cm左右的穗段，接种在愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D2. 0mg/L+6-BA0. lmg/L 接种瓶内每瓶接种5个穗段，在培养室下300Iux光照，保持温度24±2°C，培养7天左右诱导出愈伤组织；3、丛生芽诱导及增殖愈伤组织生长至直径为O. 5cm左右，挑选淡黄色并较为致密的愈伤组织，接种在MS+6-BA2. Omg/L的分化培养基在20001ux光照下培养，保持温度 24+2°C，直至形成丛生芽，增殖系数为4. 6以上；在生根培养基MS+1. Omg/L IAA+0. lmg/ LIBA+1. Omg/L CCC诱导芽和根，生根率达95%以上，只需35天左右形成完整植株；4、试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽I个月后，移栽成活率达到90%以上实施例2取材五节芒(M.f Ioridulus) 04405采自安徽马鞍山，保存于湖南农业大学芒属植物资源圃内I、外植体的选择与灭菌选用五节芒优良单株，切取叶枕距为I. 5cm的幼穗首先将幼穗外部叶清除干净，仅留旗叶，用无菌水清洗4次后，在无菌操作台上用70%酒精处理 20秒左右,再用O. I %的升汞消毒20分钟,用无菌水冲洗6次备用；2、胚性愈伤组织的诱导将灭菌处理后带旗叶的幼穗，在超净台上去除旗叶，将幼穗切成O. 4cm左右的穗段，接种在愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D4. 0mg/L+6-BA0. 2mg/L 接种瓶内每瓶接种4个穗段，在培养室下2501ux光照，保持温度24±2°C，培养7天左右诱导出愈伤组织；3、丛生芽诱导及增殖愈伤组织生长至直径为O. 7cm左右，挑选淡黄色并较为致密的愈伤组织，接种在MS+6-BA4. Omg/L的分化培养基在20001ux光照下培养，保持温度24+2°C，直至形成丛生芽，增殖系数为4. 8以上；在生根培养基MS+1. Omg/L IAA+0. lmg/ LIBA+1. Omg/L CCC诱导芽和根，生根率达95%以上，只需35天左右形成完整植株；4、试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽I个月后，移栽成活率达到90 %以上实施例3取材五节芒(M. floridulus)02155采自湖南常德，保存于湖南农业大学芒属植物资源圃内I、外植体的选择与灭菌选用五节芒优良单株，切取叶枕距为2cm的处于颖花原基形成期的幼穗首先将幼穗外部叶清除干净，仅留旗叶，用无菌水清洗4次后，在无菌操作台上用70%酒精处理30秒左右，再用O. I %的升汞消毒20分钟，用无菌水冲洗7次备用；2、胚性愈伤组织的诱导将灭菌处理后带旗叶的幼穗，在超净台上去除旗叶，将幼穗切成O. 5cm左右的穗段，接种在愈伤组织诱导培养基MS+2，4-D6. Omg/L+6-BAOmg/L接种瓶内每瓶接种3个穗段，在培养室下2501ux光照，保持温度24±2°C，培养7天左右诱导出愈伤组织；3、丛生芽诱导及增殖愈伤组织生长至直径为O. 8cm左右，挑选淡黄色并较为致密的愈伤组织，接种在MS+6-BA4. Omg/L的分化培养基在20001ux光照下培养，保持温度 24±2°C，直至形成丛生芽，增殖系数为4. 2以上；在生根培养基MS+1. Omg/L IAA+0. lmg/ LIBA+1. Omg/L CCC诱导芽和根，生根率达95%以上，只需35天左右形成完整植株；4、试管苗的移栽选取根系生长良好的试管苗，放入清水中把根部的琼脂清洗干净，移栽到天然泥土中，注意保水保湿，移栽I个月后，移栽成活率达到90%以上

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权力要求
说明书
法律状态

专利名称：五节芒快速繁殖方法五节芒(Miscanthusf Ioridulus)属于禾本科(Poaceae)芒属(Miscanthus Andersson)(陈守良，1997)，是一种高光效的C4植物，具有生物质产量高、抗逆性强、纤维素含量高、燃烧充分等特点，被认为是一种开发潜力巨大的生物质能源植物，在我国主要分布在热带和亚热带地区(萧运峰，1995)。目前，五节芒在组织培养有少量报道，胡恒康等 (植物生理学通讯，2009)利用种子为外植体，萌发的小苗切去胚根诱导出丛生芽。刁英等在一种芒属植物五节芒体胚组培快速繁殖方法中，以幼穗为外植体，诱导胚性愈伤组织，幼穗取材长度及消毒方法与本发明不同，并且本发明诱导愈伤组织过程中使用的培养基等均未见报道。
本发明的目的是提供一种五节芒的快速繁殖方法。五节芒快速繁殖方法，包括如下步骤I)外植体的选择与灭菌选用五节芒的幼穗，将幼穗外包裹的多层叶或叶鞘去除，仅保留幼穗外的旗叶，用无菌水清洗3 4次后，在无菌操作台上用70%酒精处理 15-30秒,再用O. I %的升汞消毒18 20分钟,用无菌水冲洗6 7次备用；2)胚性愈伤组织的诱导将灭菌处理后带旗叶的幼穗，在超净台剥去旗叶，将幼穗切成穗段，接种在MS+2. 0-6. Omg/L 2,4-D+0-0. 2mg/L 6-BA的愈伤组织诱导培养基；在 250-3001ux光照下培养，保持温度24±2°C，诱导产生愈伤组织；(6_8天左右产生愈伤组织)；3)丛生芽诱导及增殖愈伤组织接种在MS+1. 0-4. Omg/L 6_BA的分化培养基；在 20001UX光照下培养，保持温度24±2°C，直至形成丛生芽；增殖系数为4以上；4)生根培养以 MS+1. Omg/L IAA+0. lmg/L I BA+1. Omg/L CCC 诱导芽和根。生根率达95%以上。步骤I)中所述外植体的选择取幼穗时叶枕距为0-2cm。步骤I)中所述的外植体选用五节芒处于颖花原基形成期的幼穗。步骤2)中将幼穗切成O. 3-0. 5cm长度的穗段。步骤2)中接种瓶(5. 6X6. 9X9. Icm( 口径X胸径X高))内每瓶接种2_5个穗段。步骤3)中愈伤组织生长至直径O. 5-0. 8cm，挑选淡黄色并致密的愈伤组织，接种在分化培养基。本发明提出的五节芒的组织培养方法，采用幼穗外植体，保证了遗传稳定性；避免幼穗直接与酒精和升汞接触，以免幼穗褐化，降低出愈率；同时，本发明方法仅需35天左右形成完整植株，3 5个月内可获得大量完整植株。

图I为五节芒幼穗诱导愈伤组织的图片；图2为五节芒胚性愈伤组织分化的图片；图3为五节芒增殖培养的图片；图4为五节芒生根培养的图片。

本发明公开了五节芒快速繁殖方法，以五节芒的幼穗为外植体，选用五节芒处于颖花原基形成期的幼穗，灭菌，切成穗段，接种在愈伤组织诱导培养基MS+2.0-6.0mg/L 2，4-D+0-0.2mg/L 6-BA，250-300lux光照下，24±2℃培养，7天左右产生愈伤组织；愈伤组织接种在分化培养基MS+1.0-4.0mg/L 6-BA，2000lux光照下，温度24±2℃培养，直至形成丛生芽，增殖系数为4以上；以MS+1.0mg/L IAA+0.1mg/L IBA+1.0mg/L CCC诱导芽和根，生根率达95％以上，只需35天左右形成完整植株。

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