增强的多重fish制作方法

I·P·斯里普顿, W·斯坦·弗雷赫冯

2012年12月26日

2011年3月4日

2010年3月4日

米阿科姆诊断有限公司

C12Q1/68GK102844445SQ201180012360

fish 多重 增强

1.ー种能与靶标核酸序列杂交的核酸分子的组合，其中所述组合包含 (a)至少ー个第一核酸分子，包含 (i)能与靶标序列杂交的序列， ( )能形成茎干的两段互补序列，和 (iii)发光基团和淬灭基团，如果核酸形成茎环结构，淬灭基团使荧光基团淬灭；如果寡核苷酸与靶标序列杂交，荧光基团能在激发后发射发光信号， (b)第二核酸分子，第三核酸分子和可选的至少ー个其他核酸分子， 其中，所述第二核酸分子、第三核酸分子和可选的至少ー个其他核酸分子与靶标序列在位于第一核酸杂交序列5’或/和3’的序列杂交2.如权利要求I所述的组合，其特征在于，所述核酸适用于原位杂交，特别是FISH3.如权利要求I或2所述的组合，其特征在于，所述靶标核酸序列选自DNA序列和RNA序列，并且其中所述靶标核酸序列优选rRNA序列或mRNA序列4.如权利要求1-3中任ー项所述的组合，其特征在于，所述各核酸分子与靶标序列的杂交位点彼此直接相邻，或其中至少两个核酸分子与靶标序列的杂交位点相隔至少ー个核苷 酸5.如前述权利要求中任ー项所述的组合，其特征在干，至少ー个与所述靶标序列杂交的核酸分子序列长16-26核苷酸6.如前述权利要求任ー项所述的组合，其特征在干，所述组合的各核酸分子与靶标序列独立杂交 (i)AG 范围为-15-25kcal/mol，(ii)总AG 范围为-60- -150kcal/mol、-80- _150kcal/mol 或-100- _120kcal/mol,或/和 (iii)比靶标序列自然重新折叠所产生AG更负的AG7.如前述权利要求中任ー项所述的组合，其特征在于，所述组合用于诊断应用，特别是诊断细胞存在8.如前述权利要求中任ー项所述的组合，其特征在于，所述组合用于测定抗生素抗性、毒素生产或/和癌基因表达9.包含如前述权利要求中任一项所述组合的试剂盒或芯片10.一种鉴定样品中细胞的方法，所述方法包含步骤 (a)提供样品， (b)将(a)样品与权利要求1-8中任一项所述的核酸分子组合在允许寡核苷酸与细胞中靶标序列杂交的条件下接触，和 (C)測定第一核酸分子的发光基团的发光， 其中，第一寡核苷酸的荧光指示靶标序列的出现11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述样品选自生物样品，特别是临床样品O12.如权利要求10或11所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)和(c)在原位完成，特定通过FISH13.如前述权利要求10-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中使用的杂交缓冲液不含二价阳离子14.如前述权利要求1-8中任一项所述的组合或如权利要求9所述的试剂盒或芯片在鉴定细胞中的应用15.如前述权利要求1-8中任一项所述的组合或如权利要求9所述的试剂盒或芯片在诊断细胞存在的药物组合物生产中的应用