专利名称：脂肽组合物和相关方法达托霉素为适用于治疗复杂性皮肤和皮肤结构感染以及菌血症(包括具有可疑的或者被证实的感染性心内膜炎的菌血症)的环状脂肽抗生素。用于注射的达托霉素可静脉内给药以治疗由多重革兰氏阳性微生物的易感菌株包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methici 11 in-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)引起的指定的感染。用于注射的达托霉素(CUB1CIN⑩，Cubist Pharmaceuticals, Inc. , Lexington, MA)作为冻干粉末来提供，将其重建且复合为用于肠胃外给药的药物组合物。所述重建的达托霉素组合物可复合为用于肠胃外给药的药物组合物，例如通过与医药上适当量的药物稀释剂(例如0. 9%氯化钠水溶液)组合。所述稀释剂可相同或者不同。所述包含达托霉素的肠胃外药物组合物可通过静脉内输注来给药。含有达托霉素的冻干粉末可能需要15-45分钟来在药物稀释剂中重建，这取决于重建操作。达托霉素(图I)可由微生物玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)与正癸酸的填料的发酵产物衍生得到。Baltz 在 Biotechnology of Antibiotics. 2nd Ed. , ed.ff. R. Strohl (New York:Marcel Dekker, Inc.), 1997, pp. 415-435 中开始尝试由发酵产物中的结构相似的组分中分离达托霉素，这导致鉴别出其它结构相似的化合物包括无水-达托霉素(图2)、达托霉素的￠-异构体(图3)和达托霉素的内酯水解产物(图4)。无水-达托霉素(图2)可在进行由发酵产物中的结构相似的组分中分离达托霉素的技术的过程中形成。无水-琥珀酰亚胺形式的再水化产生第二降解产物，其含有3-天冬氨酰基且指定为达托霉素的异构体形式(图 3)。Kirsch et al. (Pharmaceutical Research, 6:387-393，1989，“Kirsch”)披露了在纯化达托霉素过程中产生的无水-达托霉素和达托霉素的3 _异构体。Kirsch描述了通过控制pH条件和温度条件而使无水-达托霉素和￠-异构体的水平最小化的方法。然而，Kirsch不能使达托霉素稳定且不能防止达托霉素向无水-达托霉素的转化及其随后向￠-异构体的异构化。Kirsch也不能防止达托霉素降解为与无水-达托霉素和￠-异构体不相关的其它降解产物。美国专利6，696，412披露了存在于发酵产物中的若干额外的化合物，其中达托霉素由所述发酵产物衍生得到，且该专利提供了产生增加的纯度的纯化达托霉素的方法。所述额外的化合物包括具有图4的化学结构的达托霉素的内酯水解产物。所述达托霉素纯化方法可包括形成达托霉素胶束、通过滤过除去低分子量污染物，然后将含有达托霉素的胶束滤液转化为非胶束状态，接着进行阴离子交换和反渗透渗滤以获得高纯度达托霉素，然后将其冻干。在冻干达托霉素粉末中的达托霉素的化学稳定性的一种测量为相比于结构相似化合物包括无水-达托霉素(图2)、达托霉素的￠-异构体(图3)和达托霉素的内酯水解产物(图4)的量而言的存在于重建达托霉素组合物中的达托霉素(图I)的量。相比于这些结构相似化合物的量而言的达托霉素的量可在含水稀释剂中重建之后通过高效液相色谱(HPLC)来测量。达托霉素的纯度和结构相似化合物(例如图2-4)的量可根据由HPLC(例如本申请实施例4)获得的峰面积来确定以提供固体形式的达托霉素化学稳定性的测量。达托霉素纯度和化学稳定性也可随时间的推移在液体重建达托霉素组合物中测量，如同液体形式的重建达托霉素化学稳定性的测量。需要在药物稀释剂中快速重建(例如在小于约5分钟的时间内)以形成可复合为药物组合物的重建脂肽组合物的固体脂肽组合物。例如，为了重建500mg小瓶的冻干的用于注射的达托霉素(CUB1C1N ),将冻干粉末与IOmL 0. 9%氯化钠水溶液合并，静置10分钟(或者更长时间)然后轻微旋转或者涡旋“几分钟”以形成重建达托霉素组合物，之后成形以制备肠胃外达托霉素药物组合物。还需要在固体和/或者重建形式中具有改善的化学稳定性(即随时间的推移，较高的总体达托霉素纯度百分数)的固体达托霉素组合物，这提供了较长的贮存期限、对更多不同的贮存条件(例如更高的温度或者湿度)的增加的耐受性以及在重建为用于肠胃外给药的液体制剂之后增加的化学稳定性。
本发明涉及用于在含水稀释剂中重建以形成药物组合物的固体脂肽组合物。通过 将包含所述脂肽的药用水溶液转化为固体脂肽组合物(例如通过冻干、喷雾干燥等)来制备所述脂肽组合物。所述固体脂肽组合物可随后在含水药用稀释剂中重建以形成用于肠胃外给药的药物产物。在第一个实施方案中，通过增加脂肽水溶液的pH(优选增加至约6. 5-7. 5的pH，最优选地约7. 0)、之后冻干所述溶液以形成固体脂肽组合物可不预期地减少在含水稀释剂中重建固体脂肽组合物的时间。例如，相比于其它可比较的在约4. 7的pH冻干的达托霉素制齐U，通过冻干PH为约7.0的液体达托霉素溶液(不含糖或者甘氨酸)制备的固体达托霉素组合物在0. 9%氯化钠水溶液中更快地重建。通过将脂肽与甘氨酸或者糖(优选非还原性糖)合并、之后将溶液转化为固体脂肽也加速了某些固体脂肽组合物在含水稀释剂中的重建速率。例如，由包含达托霉素和非还原性糖或者甘氨酸的PH为约7. 0的溶液形成的表6中的500mg的冻干药物达托霉素组合物在0. 9%氯化钠水溶液中在小于2分钟的时间内重建，其中大部分组合物在小于I分钟的时间内重建。固体药物脂肽制剂可为通过以下方法获得的产物(a)形成pH高于脂肽等电点(例如高于达托霉素的约3. 8)的脂肽水溶液；(b)将甘氨酸或者糖(优选非还原性糖)在含有脂肽的水溶液中溶解以形成液体脂肽制剂；(c)将液体脂肽制剂的pH调节为约6. 5至7.5;和(d)将液体脂肽制剂转化为固体药物脂肽组合物(例如冻干)。例如，在0.9%氯化钠水溶液稀释剂中在小于约2分钟的时间内重建的冻干达托霉素药物制剂可通过如下制备(a)形成pH为约4. 5-5. 0 (例如pH为约4. 7)的达托霉素水溶液；(b)将包含磷酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐或者它们的组合的缓冲剂加入达托霉素水溶液中以形成缓冲的达托霉素制剂；(c)将一种或者多种糖在缓冲的达托霉素制剂中溶解以形成含有约2. 5%w/v至约 25%w/v (例如约 3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%或者24%)的糖的缓冲的达托霉素糖制剂，所述一种或者多种糖选自海藻糖、蔗糖、甘露醇和它们的组合；(d)调节缓冲的达托霉素糖制剂的pH至约6. 5至7. 5(例如7.0)的pH;和(e)冻干所述缓冲的达托霉素糖制剂以形成固体药物达托霉素组合物。优选地，所述一种或者多种糖包括蔗糖、蔗糖和甘露醇，或者海藻糖。在第二个实施方案中，本发明提供了具有改善的达托霉素化学稳定性的达托霉素 组合物，如随时间的推移较高的总体达托霉素纯度百分数所测量(如通过实施例4的方法的HPLC所确定)。令人惊讶的是，相比于在不含糖或者甘氨酸的达托霉素固体制剂中的达托霉素而言，在含有某些优选的组合物(例如达托霉素与蔗糖或者海藻糖合并)的固体制剂中包含的达托霉素在化学上更加稳定。通过比较来自根据实施例4分别获得的多个固体达托霉素制剂的总体达托霉素纯度测量结果来测量固体形式的达托霉素的化学稳定性。较高的化学稳定性作为根据实施例4在两个样品之间较高的可比较的达托霉素总体纯度测量结果来测量。例如，在0. 9%氯化钠水溶液中重建之前的6个月贮存期内，由含有一种或者多种非还原性糖诸如蔗糖的固体达托霉素组合物测量的达托霉素的化学稳定性不预期地增加10%和大于90%之间的数值(相比于由不含任何糖的固体达托霉素组合物测量的达托霉素化学稳定性而言)。同样令人惊讶的是，相比于可比较的不含糖或者甘氨酸的达托霉素制剂而言，在含有一种或者多种某些非还原性糖(例如蔗糖)的达托霉素制剂中，在各个温度条件下在重建液体达托霉素溶液中观察到持续多达14天的较高的达托霉素化学稳定性。例如，对于含有达托霉素以及某些非还原性糖(例如蔗糖)的组合物而言，历时14天的重建溶液中的达托霉素的化学稳定性同样不预期地增加。固体药物达托霉素制剂的优选实例包含约2. 5%至25. 0%的一种或者多种非还原性糖或者甘氨酸。固体药物达托霉素制剂的其它优选实例包含约2. 5%至25. 0%的选自蔗糖、甘露醇和海藻糖的糖。特别优选的固体药物达托霉素制剂基本上由达托霉素、蔗糖、磷酸钠缓冲剂(例如磷酸氢二钠，Na2HPO4)和多达约8%的其它物质(例如根据实施例4在214nm经HPLC峰面积所测量)组成。固体药物达托霉素制剂可通过转化包含达托霉素和非还原性糖(例如在溶液中15-20w/v%的蔗糖)的pH高于达托霉素的等电点(例如pH为约3. 7或者更高)的水溶液来获得。优选地，当转化为固体药物达托霉素制剂(例如粉末剂)时，含有达托霉素和非还原性糖(例如蔗糖)的水溶液的PH为约4. 5-8. 0 (包括例如pH值为4. 5-7. 5,4. 7-7. 5、5. 0-7. 5、5. 5-7. 5、4. 7-7. 0、5. 0-7. 0、5. 5-7. 0、6. 0-7. 0 和 6. 5-7. 0 以及介于它们之间的值)。优选地，具有约2分钟或者更少的在含水稀释剂中的重建时间的冻干达托霉素药物制剂通过如下制备(a)形成pH为约4. 7-5. 0的达托霉素水溶液；(b)将包含磷酸盐、枸橼酸盐、TRIS、马来酸盐或者它们的组合的缓冲剂加入至达托霉素水溶液中；(c)将糖(例如非还原性糖诸如蔗糖)在含有达托霉素的水溶液中溶解以形成缓冲的达托霉素糖制剂；(d)调节缓冲的达托霉素糖制剂的pH为约6. 5至8. 0(包括例如pH值为6. 5-7. 5,6. 5-7. 0,6. 5、7.O、7. 5、8. O、7. 0-8. O、7. 0-7. 5以及介于它们之间的值)；和(e)冻干所述缓冲的达托霉素糖制剂以形成固体药物达托霉素制剂。本申请所使用的所有科技术语的含义与本发明所属领域技术人员通常所理解的含义相同，除非另作限定。以下描述适宜的方法和物质，但类似于或者等同于本申请所述方法和物质的方法和物质也可用于本发明的实施或者测试。将本申请提及的所有公开出版物、专利申请、专利和其它参考文献的全部内容通过引用的方式并入本申请。在出现矛盾的情况下，由本申请的说明(包括定义)决定。另外，物质、方法和实施例仅仅是示例性的而不是限制性的。通过说明书和权利要求，本发明的其它特征和优势将是显而易见的。 图I为达托霉素的化学结构。图2为无水-达托霉素的化学结构。图3为达托霉素的P -异构体的化学结构。图4为达托霉素的内酯水解产物的化学结构。图5为表6，其列出优选的达托霉素组合物的实例。这些组合物制备为液体溶液，然后冻干以提供在含水药物稀释剂中在小于2分钟的时间内重建的固体药物达托霉素制剂(包括在小于I分钟的时间内重建的组合物)。在表6中，“重建时间”是指“制剂(固态)”栏中所述的约500mg冻干达托霉素组合物在室温(约25°C )在IOmL 0. 9%氯化钠水溶液中溶解所需的时间。图6为表7，其列出其它达托霉素组合物的实例。这些组合物制备为液体溶液，然后冻干以提供在含水药物稀释剂中在2分钟或者更长的时间内重建的固体药物脂肽制剂。在表7中，“重建时间”是指约500mg冻干达托霉素溶液在室温(约25°C )在IOmL 0. 9%氯化钠水溶液中溶解所需的时间。图7为表8，其列出含有糖的达托霉素组合物的实例。图8为表9，其显示根据实施例4各种达托霉素制剂所测量和计算的总体达托霉素纯度的变化百分数。
缓冲剂任选加入至pH高于约4. 7的脂肽水溶液中。缓冲剂可包括例如，包括磷酸根、枸橼酸根、马来酸根或者碳酸根部分或者它们的组合，以及药用抗衡离子的试剂。缓冲剂的量可基于缓冲剂与达托霉素的摩尔比(例如表6所述)进行选择。缓冲剂可以无水或者含水形式加入。缓冲剂的具体实例为磷酸的钠盐或者钾盐、硼酸的钠盐或者钾盐、枸橼酸的钠盐或者钾盐、碳酸的钠盐或者钾盐、磷酸钠(例如磷酸氢二钠)、TRIS (三(羟基甲基)氨基甲烷和马来酸盐。在一个方面，所述缓冲剂选自磷酸氢二钠(Na2HPO4)、枸橼酸钠、碳酸氢钠、组氨酸一盐酸盐TRIS和马来酸盐。对于达托霉素水溶液，所述缓冲剂优选包括加入至pH为约4. 5-6. 0 (优选地pH为约5. 0)的达托霉素水溶液的约50mM磷酸盐缓冲剂(例如磷酸氢二钠)。可在加入缓冲剂之前，通过在冷冻条件(2-10° C)下加入3N氢氧化钠提高酸性脂肽水溶液(例如PH为约3. 0)的pH。一种或者多种糖(例如非还原性糖)和/或者甘氨酸可加入至脂肽水溶液中，之后将溶液转化为药物脂肽制剂(例如通过冻干)。优选地选择甘氨酸或者一种或者多种糖与脂肽水溶液的组合的量和方式以提供液体脂肽溶液，其可随后调节为约6. 5至7. 5的pH(例如通过在约2-10°C加入3N氢氧化钠)。对于液体达托霉素制剂，优选地通过在适当温度(例如2-10°C )搅拌来合并甘氨酸和/或者一种或者多种糖。所述一种或者多种糖优选为非还原性糖，尽管达托霉素水溶液可由甘氨酸、海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、果糖、右旋糖以及它们的组合在约5. 0或者更高的pH来制备。可选择脂肽与甘氨酸和/或者一种或者多种糖的总量的摩尔比以获得具有在含水溶剂中更快的重建速率的固体组合物(例如表6中所述的组合物)。例如，液体达托霉素糖溶液优选包含[I. 00:1. 12]至约[1.00:8. 98]的达托霉素蔗糖摩尔比的达托霉素和蔗糖。在合并脂肽、一种或者多种糖或者甘氨酸以及一种或者多种缓冲剂之后，但在将液体脂肽溶液转化为固体药物制剂之前，脂肽溶液的PH可调节为约6. 5-7. 5。优选地，所述脂肽包含达托霉素，且在转化为固体形式之前，但在加入一种或者多种缓冲剂和甘氨酸和/或者一种或者多种糖之后，所述液体达托霉素制剂调节为约6. 5-7. 0的pH且最优选地调节为约7.0的pH。图5(表6)描述了优选的液体达托霉素组合物的实例，其冻干以提供在含水稀释剂中快速重建(溶解)的固体药物脂肽制剂。对于表6中含有甘氨酸和非还原性糖的每种组合物，500mg的固体达托霉素糖组合物在0. 9%氯化钠水溶液中在小于I分钟的时间内溶解。相反地，相比于表6中的组合物，由pH为约4. 7的液体达托霉素组合物获得的表7 (图3)中所述的许多固体药物制剂具有较长的重建时间(例如表7中所述的500mg的固体药物达托霉素组合物需要2分钟或者更长时间在IOmL 0. 9%氯化钠水溶液稀释剂中在25°C重建)。液体脂肽制剂可通过任何适当方法包括冻干、喷雾干燥或者流化床干燥来转化为固体药物脂肽组合物。实施例3描述了在测量表6中同时提供的重建时间之前，用于将表6中的某些液体达托霉素制剂转化为固体药物达托霉素制剂的冻干方法。固体达托霉素组合物可为冻干、冷冻干燥、喷雾干燥、流化床干燥、喷雾凝结、沉淀或者结晶的粉末或者无定形固体。在一个方面，所述粉末为冻干或者喷雾干燥的粉末。在本发明的另一个方面，所述粉末为冻干的粉末。固体药物达托霉素制剂中的达托霉素与糖的摩尔比优选在约[1:1.12]至约 [1:21.32]的范围内。例如，固体药物达托霉素制剂可包含具有以下达托霉素与蔗糖的摩尔比的蔗糖约[1:1.12]至约[1:8.98]，包括[1:4. 49]至[1:8.98]、[1:6. 73]至[1:8.98]、[1:1.12]、[1:1.344]、[1:1.792]、[1:2.24]、[1:2.688]、[1:3.136]、[1:3.584]、[1:4.032]、[1:4.49]、[1:4.928]、[1:5.376]、[1:5.824]、[1:6.272]、[1:6. 73]、[1:7. 168]、[1:7. 616]、[1:8. 064]、[1:8. 512]或者[1:8. 98]的达托霉素:蔗糖摩尔比。在一个方面，赋形剂为甘露醇且达托霉素与甘露醇的摩尔比为约[1:2. 52]至约[1:5.04]。在另一个方面，达托霉素与甘露醇的摩尔比为[1:2. 52]、[1:3. 36]、[1:4. 20]或者[1:5. 04]。在另一个方面，所述赋形剂为蔗糖且达托霉素与蔗糖的摩尔比为约[1:1. 12]至约[1:8.98]。在另一个方面，所述达托霉素与蔗糖的摩尔比为[1:4.49]至约[1:8.98]。在另一个方面，所述达托霉素与蔗糖的摩尔比为约[1:6.73]至约[1:8.98]。在另一个方面，所述达托霉素与蔗糖的摩尔比为[1:1.12]、[1:1.344]、[1:1.792]、[1:2.24]、[1:2.688]、[1:3.136]、[1:3.584]、[1:4.032]、[1:4.49]、[1:4.928]、[1:5.376]、[1:5.824]、[1:6.272]、[1:6.73]、[1:7.168]、[1:7.616]、[1:8.064]、[1:8.512]或者[1:8.98]。在另一个方面，所述赋形剂为海藻糖且达托霉素与海藻糖的摩尔比为[1:2.13]至约[1:21. 32]。在另一个方面，所述达托霉素与海藻糖的摩尔比为[1:2. 13]、[1:2. 556]、[1:3. 408], [1:4. 26] , [1:5. 112], [1:5. 964]、[1:6. 816], [1:7. 668]、[1:8. 53],[1:9. 372]、[1:10. 224]、[1:11.076]、[1:11.928]、[1:12. 78]、[1:13.632]、[1:14.484]、[1:14. 91], [1:15. 336]、[1:16. 188]、[1:17. 04], [1:17. 892]、[1:18. 744]、[1:19. 592]、[1:20. 448]或者[1:21. 32]。固体药物脂肽组合物可重建且与一种或者多种药用稀释剂合并以获得用于肠胃外给药的药物组合物。在重建液体组合物中达托霉素与稀释剂的比值优选在25mg/mL与200mg/mL之间。例如，包含达托霉素的冻干组合物可在小瓶中通过将0. 9%氯化钠水溶液加入至冻干组合物中来重建。重建达托霉素溶液可与药用稀释剂合并且静脉内给药。药用稀释剂包括无菌注射用水(sWFI)、0.9%无菌氯化钠注射液(sSCl)、抑菌性注射用水(bWFI)和林格溶液。适当稀释剂的额外的实例可在Remington’ s PharmaceuticalSciences, 17thEd. , A. R Gennaro, Ed. , Mack Publishing Co. , Easton, PA 1985 中找到。所述稀释剂可为无菌注射用水或者无菌氯化钠注射液。优选的稀释剂为sWFI或者乳酸盐林格注射液。优选地，所述稀释剂并未缓慢加入同时以45度角旋转。同样优选地，在加入稀释剂后，在振动之前，含有达托霉素的小瓶并未平稳静置10分钟。任选地，所述稀释剂进一步包括药用防腐剂。在一个方面，所述防腐剂为苯甲醇、三氯叔丁醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯氧乙醇、对羟苯甲酸丙酯、硫柳汞、乙酸苯基汞、硝酸苯基汞、苯扎氯铵、氯甲酚、苯基汞盐和羟苯甲酯。一种重建方法包括将稀释剂快速加入至含有表6的冻干达托霉素组合物的小瓶中，接着在需要时回荡小瓶。所述稀释剂优选为sWFI或者sSCI。例如，所述稀释剂可在
1-60秒的时间内，更优选地在1-30秒的时间内加入，且最优选地所述稀释剂在小于20秒的时间内加入。优选地，组合物中达托霉素的重量与稀释剂的体积比在25mg/mL与200mg/mL的范围内。包含达托霉素的肠胃外药物组合物可根据认可的适应症通过静脉内输注来给药。例如，针对治疗复杂性皮肤和皮肤结构感染，用于注射的达托霉素可在0. 9%氯化钠中静脉 内给药，每24小时给药一次,给药7-14天。具有增加的达托霉素化学稳定性的组合物不预期地，将达托霉素与一种或者多种非还原性糖(例如蔗糖、海藻糖、蔗糖和甘露醇)在固体药物制剂中合并增强了达托霉素在固体和重建液体相中的化学稳定性。通过比较来自贮存于已知时间段(例如至多12个月)已知条件(例如恒温)下的多个固体样品的总体达托霉素纯度的测量结果来测量达托霉素化学稳定性。根据实施例4通过高效液相色谱(HPLC)(使用表3中的参数)测量各个样品的达托霉素总体纯度。此外，相对于选自无水-达托霉素(图2)、达托霉素的￠-异构体(图3)和达托霉素的内酯水解产物(图4)的物质的量而言来测量达托霉素(图I)在重建达托霉素溶液中的量。类似地，为了确定达托霉素在重建达托霉素溶液中的化学稳定性，在制备重建达托霉素溶液之后至多14天，根据实施例4在不同的时间间隔重复进行达托霉素在重建达托霉素溶液中的纯度的HPLC测量和计算。在一个方面，具有增加的达托霉素稳定性的固体药物达托霉素制剂可包含达托霉素和有效增加达托霉素在固体达托霉素制剂中的总体稳定性的量的非还原性糖，如根据实施例4通过总体达托霉素纯度所测量。在另一个方面，相比于不含甘氨酸或者糖的达托霉素制剂的稳定性而言，具有增加的达托霉素稳定性的固体药物达托霉素制剂可包含达托霉素和非还原性糖，所述非还原性糖的量有效降低选自无水-达托霉素(图2)、达托霉素的^ -异构体(图3)和达托霉素的内酯水解产物(图4)的物质在作为固体和/或者液体重建形式的达托霉素制剂中的的量(如通过实施例4所测量)。相比于不含甘氨酸或者糖的达托霉素制剂而言，具有增加的达托霉素稳定性的固体药物达托霉素制剂可包含达托霉素和有效增加达托霉素的化学稳定性的量的糖，如通过达托霉素在作为固体形式的达托霉素制剂中的总体纯度的变化所测量，其中所述达托霉素纯度根据实施例4测量。如在实施例5中所述，具有增加的脂肽化学稳定性的固体脂肽组合物包含非还原性糖(例如诸如蔗糖或者海藻糖)；或者非还原性糖的组合(例如蔗糖和海藻糖)。在根据实施例4重建之后，测量在各个固体达托霉素药物制剂中的达托霉素的纯度(或者将重建溶液冷冻并在解冻所述重建溶液之后，根据实施例4确定达托霉素纯度)。相比于选自无水-达托霉素(图2)、达托霉素的P -异构体(图3)和达托霉素的内酯水解产物(图4)的物质而言，在重建后包含非还原性糖的固体药物达托霉素制剂可含有更多的达托霉素(图I)。相比于不含非还原性糖的固体达托霉素制剂而言，在至少6个月的时间内，含有非还原性糖的优选的固体药物达托霉素制剂具有增加的达托霉素纯度(以及增加的贮存稳定性(shelf stability))。如在实施例5中所述，固体达托霉素制剂在小瓶中在不同温度范围(例如2-8°C、25°C和40°C )贮存不同的时间段(例如I个月、2个月、3个月和6个月)，接着重建固体制剂，然后检测达托霉素和结构上类似于达托霉素的物质在重建液体组合物中的量，如在实施例4中所述。如在实施例6中所述，相比于不含任何糖的重建达托霉素制剂而言，在含有一种或者多种非还原性糖的重建液体药物达托霉素制剂中的达托霉素不预期地显示改善的化学稳定性。含有非还原性糖的重建达托霉素制剂的增加的化学稳定性通过比较根据实施例4对贮存于5°C、25°C和40°C的温度的样品进行多达14天的总体达托霉素纯度的测量结果 的差异来进行测量。例如，在多达14天的时间内，在含有约15. 0-20.0%蔗糖的冷冻(例如2-10°C )的重建达托霉素制剂中的达托霉素的纯度(根据实施例4测量并计算)不预期地大于不含任何糖的重建达托霉素制剂中的达托霉素的纯度。重建达托霉素制剂可与一种或者多种药用稀释剂合并以获得用于肠胃外给药的药物组合物(例如在用于静脉内给药的容器诸如袋子或者注射器中形成或者贮存)。为了评估达托霉素在重建溶液中的化学稳定性，在重建(或者如果是冷冻的话，解冻)后的多个时间间隔包括至多14天(3、7和14天)的时间段测量达托霉素的纯度。达托霉素在重建液体组合物中的化学稳定性在实施例6所述的不同时期后根据实施例4通过测量达托霉素纯度来测量。相比于具有较低的达托霉素化学稳定性的组合物而言，具有增加的达托霉素化学稳定性的组合物具有较高的相对于图2-4中的结构上类似于达托霉素的物质的总体检测量的达托霉素的检测量(如通过实施例4的方法所测量)。具有改善的化学稳定性的固体达托霉素制剂(作为固体和/或者重建液体形式)通过将达托霉素与非还原性糖包括蔗糖和海藻糖以及非还原性糖诸如蔗糖和甘露醇的组合合并来制备。在一些实施方案中，固体和液体达托霉素制剂包含至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%或者至少98%纯的达托霉素，如经实施例4所测量。优选地，固体药物达托霉素制剂的特征在于至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%或者至少98%的根据表3在214nm检测的总体HPLC峰面积由重建形式的固体药物达托霉素制剂中的达托霉素根据实施例4的方法获得。在一些固体药物达托霉素制剂中，至少92wt%、至少93wt%、至少94wt%、至少95wt%、至少96wt%、至少97wt%或者至少98wt%的制剂由达托霉素以及甘氨酸或者一种或者多种非还原性糖组成，其中所述药物达托霉素制剂的特征在于约500mg的固体药物达托霉素制剂在小于约2分钟的时间内溶解于约IOmL的含水稀释剂(例如0. 9%氯化钠水溶液)中。具有增加的重建和在粉末和重建形式中增加的达托霉素稳定性的优选的固体达托霉素制剂包括包含达托霉素、蔗糖和磷酸盐缓冲剂的固体达托霉素制剂；其中a.所述固体达托霉素制剂包含至少92%纯的达托霉素，其根据表3通过重建达托霉素溶液的高效液相色谱(HPLC)在214nm测量的达托霉素在214nm的吸光度(曲线下面积)除以总体曲线下面积的比值来计算；且b.所述固体达托霉素制剂通过如下获得i.形成包含105mg/mL(10. 5%w/v)达托霉素、7. lmg/mL(50mM)磷酸氢二钠缓冲剂和150mg/mL(15%w/v)鹿糖的pH为约7. 0的达托霉素水溶液；且i i.将含水达托霉素制剂转化为固体达托霉素制剂。优选的固体达托霉素制剂由包含约2. 5-25. 0%w/v的一种或者多种非还原性糖(例如蔗糖、海藻糖和甘露醇)以及任选进一步包含一种或者多种缓冲剂诸如磷酸氢二钠的达托霉素溶液获得。特别优选的固体达托霉素制剂通过冻干或者喷雾干燥含有达托霉素和蔗糖(且任选进一步含有约50mM磷酸氢二钠)的pH为约4. 5至7. 0 (包括例如pH值为4. 7-7.0)的液体溶液来制备。本发明也提供了含有固体达托霉素制剂的制品(例如，具有用于将含水稀释剂注射至小瓶的装置诸如自动包封的可刺穿的膜的封闭密封的小瓶)，以及含有配制用于肠胃外给药且包含溶解于含水稀释剂中的固体达托霉素制剂的达托霉素产物的产品(例如适用于静脉内给药达托霉素产物的袋子或者注射器)。优选地，500mg的固体药物达托霉素组合物在25°C在I分钟或者更少的时间内溶解于IOmL 0. 9%氯化钠水溶液。达托霉素水溶液的pH可调节为至少4. 7的pH，之后将非还原性糖溶解于含有达托霉素的水溶液中。任选地，所述达托霉素制剂通过将缓冲剂加入至达托霉素水溶液，之后将非还原性糖溶解于含有达托霉素的水溶液中来制备。所述液体达托霉素制剂可具有约105mg/mL的达托霉素浓度。液体达托霉素制剂中的糖可选自海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、果糖、右旋糖以及它们的组合。在一个优选的实例中，500mg的固体药物达托霉素组合物在25°C在I分钟或者更少的时间内溶解于IOmL 0. 9%氯化钠水溶液中，且所述固体药物达托霉素制剂通过如下制备a.形成pH为约4. 7-5. 0的达托霉素水溶液；b.将包含磷酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐或者它们的组合的缓冲剂加入至达托霉素水溶液中；c.将非还原性糖溶解于含有达托霉素的水溶液中以形成缓冲的达托霉素糖制剂；d.调节缓冲的达托霉素糖制剂的pH至约7. 0 ;且e.冻干所述缓冲的达托霉素糖制剂以形成固体药物达托霉素组合物。固体药物达托霉素制剂的其它实例可通过如下制备a.形成pH为约4. 7-5. 0的达托霉素水溶液；
b.将包含磷酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐或者它们的组合的缓冲剂加入至达托霉素水溶液中；c.将糖溶解于含有达托霉素的水溶液中以形成达托霉素糖制剂，所述糖选自海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、果糖、右旋糖和它们的组合；d.调节达托霉素糖制剂的pH至约7. 0 ;且e.冻干所述达托霉素糖制剂以形成固体药物达托霉素组合物。制备具有在0. 9%氯化钠水溶液稀释剂中加快的重建时间的冻干达托霉素药物制剂的方法可包括以下步骤a.形成pH为约4. 7-5. 0的达托霉素水溶液；b.将包含磷酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐或者它们的组合的缓冲剂加入至达托霉素水溶液中；c.将糖溶解于含有达托霉素的水溶液中以形成含有约2. 5%至约25%的糖的缓冲的达托霉素糖制剂，所述糖选自海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、果糖、右旋糖和它们的组合；d.调节缓冲的达托霉素糖制剂的pH至约6. 5至7. 5 ;且e.冻干所述缓冲的达托霉素糖制剂以形成固体药物达托霉素组合物。优选地，500mg的冻干达托霉素组合物在25°C在I分钟或者更少的时间内溶解于IOmL 0. 9%氯化钠水溶液中。所述缓冲的达托霉素糖制剂优选包含磷酸盐和约2. 5%至约25%的糖。实施例下述实施例为示例性的且不限制本申请所述的本发明。
改善的达托霉素固体制剂通过以下获得(a)如实施例2a和2b所述由含有达托霉素和一种或者多种糖或者甘氨酸的溶液形成固体药物制剂，且(b)如实施例3所述，将达托霉素溶液转化为固体药物制剂(例如通过冻干或者喷雾干燥)。随后可通过加入含水稀释剂以在约4分钟或者更少的时间内溶解固体药物制剂来重建固体药物制剂。优选地，所述固体药物达托霉素制剂在25°C (任选轻微搅拌)在约I分钟或者更少的时间内在含水稀释剂中溶解。根据销售商品名为C丨!BIClN^ (即不含甘氨酸或者糖的达托霉素)的用于注射的达托霉素的包装说明书"CUBICIN 500mg小瓶的内容物应使用如下无菌操作来重建注意为了最小化起泡，在重建过程中或者在重建之后避免剧烈振摇或者振荡小瓶。I.由CUBICIN小瓶移去聚丙烯翻转盖帽以暴露橡皮塞的中心部分。2.经橡皮塞的中心部分将IOmL 0. 9%氯化钠注射液缓慢转移至CUBICIN小瓶内，将转移针头指向小瓶壁。3.保证通过轻微旋转小瓶使整个CUBICIN产品湿润。4 使产品平稳静置10分钟。5.需要时，轻微旋转或者涡旋小瓶内容物几分钟以获得完全重建溶液。相反地，相比于不含糖或者甘氨酸的达托霉素，改善的达托霉素固体制剂在含水稀释剂中更快地重建。特别优选的固体制剂可在含水稀释剂中在25°C在小于2分钟的时间内重建，更优选地在25°C在小于约I分钟的时间内重建。表6(图5)和表5(图6)提供了对于各个固体达托霉素制剂的重建时间，其通过测量500mg的固体达托霉素制剂在IOmL
0.9%氯化钠水溶液稀释剂中在约25°C溶解所需的时间来获得。此外，实施例描述了改善的达托霉素固体制剂，其提供了达托霉素在实施例5中所述的固体形式中以及在实施例6中所述的重建液体形式中的较好的化学稳定性。相比于选自无水-达托霉素(图2)、达托霉素的￠-异构体(图3)和达托霉素的内酯水解产物(图4)的物质而言，所述改善的达托霉素制剂可包含更多的达托霉素，如经实施例4的HPLC方法所测量。优选地，所述固体达托霉素制剂通过如下获得将液体达托霉素溶液转化为固体形式，随后根据实施例4重建固体形式，且根据表3中的HPLC参数在重建液体中测量在214nm的总体HPLC峰面积，其中至少92%得自重建溶液中的达托霉素。所述固体达托霉素制剂由达托霉素、一种或者多种选自蔗糖、海藻糖和甘露醇的糖、药用盐(例如氯化钠)、一种或者多种缓冲剂诸如磷酸氢二钠以及提供至多8%的214nm的总体HPLC峰面积的物质(根据表3中的HPLC参数在实施例4中形成的重建液体中测量)组成。表8(图7)描述了各个达托霉素药物组合物。在表8中，名称“各个存在组分的摩尔比”是指达托霉素与按[B]、[C]和[D]所列组分(存在时)的以该顺序的摩尔比。例如，如果组合物包含达托霉素[A]和一种赋形剂[B]，则摩尔比将表示为[A]:[B]。如果组合物包含两种赋形剂[B]和[C]，则摩尔比将表示为达托霉素[A]:赋形剂[B]:赋形剂[C]等。如果组合物包含达托霉素[A]以及赋形剂[B]和缓冲剂[D]，则摩尔比将表示为[A] : [B] : [D]。 表6(图5)提供了在含水稀释剂中在小于2分钟的时间内重建的达托霉素组合物的非限制性实例。表7(图6)提供了在含水稀释剂中在约2分钟或者更长时间内重建的其它达托霉素组合物的实例。表6和表7中的不含糖或者甘氨酸的达托霉素组合物通过方法A(实施例Ia)或者方法B (实施例Ib)随后通过实施例3的冻干来获得。表6和表7中的含有糖或者甘氨酸的达托霉素组合物通过方法A (实施例2a)或者方法B (实施例2b)随后通过实施例3的冻干来获得。表6和7中的摩尔比基于表I中的分子量来计算。表I :达托霉素和赋形剂的分子量
达托霉素1620. 67
磷酸盐缓冲剂141.96
蔗糖342. 3~
乳糖342. 3~
麦芽糖342. 12
海藻糖180. 16
果糖180. 16
右旋糖180. 16
甘露醇182. 17
甘氨酸75707~将进一步参照下述非限制性实施例来理解本发明。提供下述实施例仅用于示例说明的目的且不应理解为以任何方式限制本发明的范围。实施例IA 比较制备方法A (在pH4. 7冻干不含糖或者氨基酸的达托霉素)不含糖或者甘氨酸的比较达托霉素制剂的复合在冷冻(2-10° C)条件下进行。达托霉素活性药物成分(API)作为125-130mg/mL的浓度范围的pH 3. 0的冷冻液体来提供。通过获得液体达托霉素API (例如解冻以约3. 0的pH提供的冷冻的达托霉素API)，随后使用3N NaOH将pH调节为约4. 7的目标pH来开始复合。将总体溶液(bulk solution)用sWFI进一步稀释为105mg/mL的目标浓度且混合以保证溶液均匀(同样在2-10° C)。将总体产物溶液0. 2 y m滤过并填充至IOmL小瓶中，随后根据在实施例3中阐述的当前冻干周期进行冻干。将药物产物制剂在氮气下封塞并密封。实施例IB 比较制备方法B (在pH 7.0冻干不含糖或者氨基酸的达托霉素)
总体制剂的复合在冷冻(2-10° C)条件下进行。达托霉素API作为125_130mg/mL的浓度范围的pH 3. 0的冷冻液体来提供。通过解冻API随后在冷冻(2-10° C)条件下使用3N NaOH将pH调节为约7. 0的目标pH，随后用sWFI稀释为105mg/mL的目标浓度且混合以保证溶液均匀来复合所述总体制剂。将配制的药物产物0. 2 y m滤过并填充至IOmL小瓶中，随后根据在实施例3中阐述的修改的冻干周期进行冻干。将药物产物制剂在氮气下封塞并密封。实施例2A :制备方法A (在pH4. 7冻干)改善的达托霉素制剂的复合在冷冻(2-10° C)条件下进行。达托霉素活性药物成分(API)作为125-130mg/mL的浓度范围的pH 3. 0的冷冻液体来提供。通过获得液体达托霉素API (例如解冻以约3. 0的pH提供的冷冻的达托霉素API)，随后使用3N NaOH将pH调节为约4. 7的目标pH，接着加入一种或多种糖(例如蔗糖)来开始复合。将总体溶液用sWFI进一步稀释为105mg/mL的目标浓度且混合以保证溶液均匀(同样在2-10° C)。将总体产物溶液0. 2 y m滤过并填充至IOmL小瓶中，随后根据在实施例3中阐述的当前冻干周期进行冻干。将药物产物制剂在氮气下封塞并密封。所述糖作为粉末或者适当溶液形式诸如sWFI来加入。实施例2B :制备方法B (在pH 7.0冻干)改善的达托霉素制剂的复合在冷冻(2-10° C)条件下进行。达托霉素API作为125-130mg/mL的浓度范围的pH 3. 0的冷冻液体来提供。通过解冻API，随后在冷冻(2-10° C)条件下使用3N NaOH将pH调节为约4. 7的目标pH，接着加入缓冲剂(磷酸盐、枸橼酸盐等)，随后加入甘氨酸或者一种或多种糖(蔗糖、海藻糖、甘露醇)来复合所述总体制剂。一旦赋形剂(糖、缓冲剂)完全溶解，所述溶液的pH用3N NaOH由4. 7调节为7. 0且用sWFI稀释为105mg/mL的目标浓度且混合以保证溶液均匀。将配制的药物产物0. 2 y m滤过并填充至IOmL小瓶中，随后根据在实施例3中阐述的修改的冻干周期进行冻干。将药物产物制剂在氮气下封塞并密封。实施例3 经方法A和B制备的组合物的冻干将产物小瓶载入至5±4° C的冷冻干燥器中且随机分散于各个架子上。将组合物冷冻干燥，用氮气回填并真空封塞。一旦完成封塞，使用滤过氮气使冻干单元返回至大气压，并将产物小瓶移去以用铝封口封盖。对于各个制剂的周期参数汇总于表2中。表2:对于各个组合物的冻干周期参数的汇总


本发明提供新的粉末达托霉素制剂，其在固态时具有改善的化学稳定性和较快的重建时间。该组合物的一些实例包含达托霉素和蔗糖。