一种天冬酰胺酶复配剂及其应用的制作方法 [0002]天冬酰胺酶是催化天冬酰胺水解为天冬氨酸和氨的酶，常用于医药和食品加工领域。食物材料中的天门冬酰胺在食品加工过程中由于高温(高于120°C )与与还原糖通过美拉德反应形成一种具有神经毒性的小分子化合物一一丙烯酰胺，它具有潜在的人体致癌性。丙烯酰胺广泛存在于油炸、烘焙食品中。天冬酰胺酶可通过去除丙烯酰胺形成的两大前体物质之一——天冬酰胺来控制食品中致癌物质丙烯酰胺的形成量。目前天冬酰胺酶已用于油炸土豆片、曲奇面团、面包、油条等食品中以降低产品中丙烯酰胺的含量，并取得了很好的效果。 [0003]在食品加工过程中，天冬酰胺酶的预处理过程通常在较高温度下进行，然而，天冬酰胺酶在较高温度下容易变性失去活性。本发明旨在寻找一种在高温条件下稳定天冬酰胺酶的方法。
[0004]本发明要解决的第一个技术问题是提供一种天冬酰胺酶复配剂，含有天冬酰胺酶，以及nh4+、甘氨酸中的至少一种。 [0005]在本发明的一种实施方式中，酶的含量为3-7.5U/mlo
[0006]在本发明的一种实施方式中，复配剂中NH4+的含量为0mmol/L-80mmol/L。
[0007]在本发明的一种实施方式中，复配剂中甘氨酸的含量为0% -8% (g/1OOmL)。
[0008]在本发明的一种实施方式中，复配剂中NH4+的含量为10mmol/L-40mmol/L。
[0009]在本发明的一种实施方式中，复配剂中甘氨酸的含量为1% _4%。
[0010]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有10mmol/L-40mmol/L的NH4+和0% -4% (m/v)的甘氨酸
[0011]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有0mmol/L-40mmol/L的NH4+和1% -4%(m/v)的甘氨酸。
[0012]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有NH4+40mmol/L。
[0013]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有甘氨酸4%。
[0014]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有NH4+30mmol/L、甘氨酸1%。
[0015]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有NH4+20mmol/L、甘氨酸2%。
[0016]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有NH4+10mmol/L、甘氨酸3%。
[0017]在本发明的一种实施方式中，复配剂中含有NH4+10mmol/L、甘氨酸1%。
[0018]本发明要解决的第二个技术问题是提供一种提高天冬酰胺酶热稳定性的方法，是向天冬酰胺酶溶液中添加复合稳定剂nh4+、甘氨酸中的至少一种。
[0019]本发明中使用的天冬酰胺酶可以是商业化产品或其他来源的酶制剂。
[0020]本发明所使用的复合稳定剂NH4+、甘氨酸在不同程度上改变了酶蛋白与溶剂环境间的相互作用，最终提高了酶的热稳定性。
[0021]NH4+、甘氨酸的用量可以是在目标高温条件下使残余酶活至少保持初始酶活的40%以上。
[0022]在本发明的一种实施方式中，天冬酰胺酶溶液是天冬酰胺酶水溶液。
[0023]本发明中所提到的NH4+可以是不同的无机盐形式，包括(NH4)2SCVNH4HCO3、NH4Cl,然而，NH4+并不局限于本文列出的无机盐形式。
[0024]本发明中使用的小分子稳定剂价格便宜，来源广泛，稳定化过程技术难度小，便于工业化应用，不同与基因水平的改造，不需花费太多的人力物力，在不影响酶活性与食品品质的前提下，提高了该酶的热稳定性，节约成本，为其进一步在食品中的应用提供技术支持。


[0025]所采用的酶的活力的测定方法为奈氏试剂法，以残余活力(相对与未经过高温处理的初始酶的活力)为评价指标。以下结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
[0026]实施例1
[0027]a) 3-7.5U/ml的天冬酰胺酶水溶液在60°C的高温中保温；
[0028]b)单独的小分子稳定剂NH4+(0-80mmol/L)添加到步骤a)中的酶溶液中；
[0029]c)步骤b)在步骤a)所述高温下保温；
[0030]e)结果表明:当不添加任何小分子稳定剂时，I小时后天冬酰胺酶的残余活力即降低到O。随着不同浓度的NH4+的加入，天冬酰胺酶的稳定性得到提升；添加40mmol/LNH ；时，8小时后酶的残余活力为43.66%,24小时后酶的残余活力为35.33%。
[0031]实施例2
[0032]a)天冬酰胺酶水溶液在60°C的高温中保温；
[0033]b)单独的小分子稳定剂甘氨酸(0-8% )添加到步骤a)中的酶溶液中；
[0034]c)步骤b)在步骤a)所述高温下保温；
[0035]e)结果表明:随着甘氨酸浓度的增加，8小时后，天冬酰胺酶仍具有一定的活性，当添加量超过4% (m/v)时，酶的热稳定性提高不明显；添加4% (m/v)甘氨酸时，8小时后酶的残余活力为64.18%，8小时后酶的残余活力为45.55%。
[0036]实施例3
[0037]a)天冬酰胺酶水溶液在60°C的高温中保温；
[0038]b) 1mmoI/L的NH/和3%甘氨酸复配添加到步骤a)中的酶溶液中；
[0039]c)步骤b)在步骤a)所述高温下保温；
[0040]e)结果表明:复配使用两种稳定剂，8小时后酶的残余活力为63.09%,24小时后酶的残余活力为50.67%。复配稳定剂相比较单一的稳定剂添加，更加提高了酶的热稳定性。
[0041]实施例4
[0042]a)天冬酰胺酶水溶液在60 °C的高温中保温；
[0043]b) 20mmol/L的NH/和2%甘氨酸复配添加到步骤a)中的酶溶液中；
[0044]c)步骤b)在步骤a)所述高温下保温；
[0045]e)结果表明:8小时后酶的残余活力为62.30 %，24小时后酶的残余活力为46.67%。复配使用后，小分子物质的添加量各自降低到一半，即可达到同样的热稳定性效果，且可在24小时内提高酶的热稳定性至残余活力大于40%。
[0046]虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。