专利名称：改善性功能障碍的a的制作方法 雄性和雌性的性功能障碍有不同的机制。对于雄性，阳痿是不能够获得和保持性交所需的足够长时间的勃起。勃起是血液流入阴茎海绵体的结果，血液流入使海绵体充血，接着阴茎勃起。估计有三千万美国男性患有一定程度的勃起功能障碍，该障碍的发病率随着年龄的增大而增长。阳痿的原因可分为两类1)器官的和2)心理的。基本的血管疾病(如与高血压有关的)、糖尿病蜜剂和处方药剂引起器官方面的阳痿。大约一半的阳痿患者是源于血管疾病的。因为是阴茎动脉中的血液流量增加和血液分流到海绵体的血管中引起勃起的生理过程，所以勃起功能障碍可能是由于阴茎的动脉不能膨胀、从而抑制血液流到勃起组织的原因引起。在阴茎勃起的神经控制中交感神经通道起主要作用。通常认为，在退肿状态下，作用于海绵状动脉和海绵体上的接合后α1-受体的去甲肾上腺素(NA)的释放使阴茎的平滑肌保持收缩。相反，在海绵窦内注射α1-拮抗剂如苯氧苄胺、酚妥拉明和百里胺引起膨胀和勃起。近来已报道了男性对经尿道的哌唑嗪的勃起反应，还报道了这种拮抗剂对分离出来的男性、狗和大鼠的阴茎组织和血管的松弛效果。对于雌性，性反应开始于引起血管充血的刺激，并导致阴道润滑，以为阴茎插入做准备。由于分泌物的形成产生润滑，它与生殖器充血一起产生了性欲高潮的前奏，即所谓的性欲高潮平台。简言之，雌性性功能障碍可能是性交不同阶段相互干扰的原因，还可能涉及器官的或机能的原因，或者两者都涉及。包括压力、忧虑、抑郁、疲劳、伙伴之间的人际冲突在内的几种原因，或仅仅是衰老可能导致血管充血不足，从而抑制正常的阴道润滑。不进行适当的治疗，患有这种病症的女性可能不能产生正常的性反应。近来已确证阴道血管充血和阴蒂勃起都依赖于血液流量的增加。而且，对于女性的性器官，已有报道证明在阴道局部注射α1-肾上腺素能拮抗剂(如酚妥拉明)能增加血液流量和阴道内压力，使其达到通过刺激骨盆神经所能达到的水平。这些数据清楚表明，去甲肾上腺素在维持与女性性区域有关的器官的柔软中其重要的作用。因而，识别具有α1-肾上腺素能拮抗剂活性的新产品是重要的，这对促进阴道壁和阴蒂的动脉的血管舒张是有用的，从而可改善其润滑状况并使性行为可持续进行。药理学、生物化学和放射性配体的综合研究显示了三种对哌唑嗪具有高亲和力的α1-受体亚型，分别命名为α1A-(α1a-)、α1B-(α1b-)和α1D-(α1d-)，其中小写字母下标表示重组受体，大写字母下标表示天然组织中的受体。在功能性研究中，也已确定了对哌唑嗪具有低亲和力的α1-受体，命名为α1L-。
一些研究已证明在动物和人的海绵状组织中存在这些α1-肾上腺素能受体亚型。与特异性寡核苷酸探针的原位杂交和保护试验技术(protection assay)已证明，人和大鼠的海绵体组织表达所有3种克隆的α1-肾上腺素能受体亚型。
另一方面，人们对男性阴茎组织的功能性研究有争议，争议在于是3种克隆的α1-ADR亚型都在该组织的NA引起的收缩中起介体的作用，或者是α1L-ADR亚型是主要的介体。相反，对阴道血管的研究却没到这个程度。
阴茎或阴道组织中被很好定义的α1-肾上腺素能受体亚型的单义存在的药理学证据显示了男性和女性性功能障碍治疗领域的重大进步，使选择性α1-拮抗剂的使用有了可能性。
目前主要用来治疗男性阳痿的α-拮抗剂产生了有害的副作用，如阴茎异常勃起，这种过长时间的勃起可能导致海绵状组织纤维化。其他副作用是阴茎疼痛和低血压。
作为其目的，本发明能满足所需的选择性α1-拮抗剂，使用该拮抗剂的患有阳痿的男性不会产生已知的副作用，特别是心血管类型的副作用。
发明概要本发明涉及性功能障碍的治疗。为此，本发明提供通式I化合物或者其对映异构体、非对映异构体或药用盐在制备治疗性功能障碍药剂中的应用。该药剂还可以含有前列腺素、直接的血管舒张药或5cGMP磷酸二酯酶抑制剂。 其中，A表示2-呋喃基、取代的2-呋喃基、2-四氢呋喃基、取代的烷氧基或取代的苯氧基烷基，B表示下面式B1、B2或B3基团中的一个 但条件是如果B是B1基团，那么A是取代的苯氧基烷基。
一些化合物I是新颖的。因此，本发明还提供通式II的化合物和其对映异构体、非对映异构体和其药用盐。 其中，A表示2-四氢呋喃基、取代的2-呋喃基、取代的烷氧基或取代的苯氧基烷基。
本发明还包括含有化合物II或其对映异构体、非对映异构体或其药用盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体的药学组合物。因此，本发明也包括含有化合物I或其对映异构体、非对映异构体或其药用盐的药学组合物，该组合物还含有前列腺素、直接的血管舒张药或5cGMP磷酸二酯酶抑制剂以及药学上可接受的稀释剂或载体。
另一方面，本发明提供化合物在制备治疗性功能障碍药剂中的应用，该化合物(a)能以至少约10-8M亲和力和哺乳动物α1b肾上腺素能受体结合；和(b)能以至少高于其与哺乳动物α1a或α1d或α1L肾上腺素能受体结合的亲和力的10倍的亲和力与哺乳动物α1b肾上腺素能受体结合。
另一方面，本发明提供一种鉴定用于治疗性功能障碍的化合物的方法。该方法包含以下步骤(a)采用放射性受体结合技术，分别地测定试验化合物对哺乳动物α1b肾上腺素能受体和哺乳动物α1a或α1d肾上腺素能受体的结合亲和力；(b)通过拮抗化合物对所选择的哺乳动物组织中的α1肾上腺素能受体的收缩作用，测定其对哺乳动物α1L肾上腺素能受体的亲和力；和(c)鉴定那些化合物，它们能够(1)以至少10-8M的亲和力与α1b肾上腺素能受体结合，和(2)以至少高于其与哺乳动物α1a或α1d或α1L肾上腺素能受体结合的亲和力的10倍的亲和力与哺乳动物α1b肾上腺素能受体结合。
发明的详细描述在化合物I中，B2基团优选具有下面立体化学 基团B3优选具有顺式立体化学，与其连接的氢原子具有同样的取向 前者较佳。同样，在化合物I中，优选的取代的苯氧基烷基A具有下式结构 其中，R1表示具有1-5个碳原子的直链或支链烷基，R2表示具有1-4个碳原子的烷氧基；最优选的取代的苯氧基烷基是6-异丙基-2-甲氧基苯氧基甲基。
最优选的化合物I包括4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[4-(2-甲氧基-6-异丙基苯氧基乙酰基)-1-哌嗪基]-喹唑啉(化合物A)，4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(4aR，8aS)-4-(2-呋喃甲酰基)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉(化合物B)，和4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[-3(S)-3-(t-丁基-氨基甲酰基)-4-(2-呋喃甲酰基)-1-哌嗪基]-喹唑啉(化合物C)。
在化合物II中，八氢喹喔啉环优选具有(4aR，8aS)构型。优选的取代的苯氧基烷基A与化合物I的优选A基团相同。取代的烷氧基适宜是苄氧基，取代的2-呋喃基优选是5-甲基-2-呋喃基。特别是，优选的化合物II包括4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(2-甲氧基-6-异丙基苯氧基乙酰基)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉，4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(5-甲基-2-呋喃基)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉，4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(2-四氢呋喃基)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉，和4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-苄基氧基羰基-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉。
式I喹唑啉衍生物的制备方法在下列文献中公开WO 95/25726；D.Giardinà等人，J.Med.Chem.，39，4602-7(1996)；WO 97/11698。
根据下面的方法可合成式I化合物 原料1可由市售得到(如从英国的Lancaster Synthesis公司得到)，或者如Althuis等人所述的方法制备〔J.Med.Chem.，20，146-149(1997))。胺H-B-H可适当地以外消旋或纯手性的形式存在，可由市售得到(如哌嗪)，或者根据文献中所描述的方法制备。例如，胺 可根据Brill等人所描述的方法制备〔J.Org.Chem.，28，1135-1138(1963))，或者通过Brill等人所描述的立体选择性合成制备〔J.Org.Chem.，29，579-581(1964))；胺 可如Tetr.Lett.所述〔35，673-676(1994)〕从2-吡嗪羧酸开始进行酰胺化作用(amidification)，接着进行还原和分拆而制得。该反应在150-200℃、没有溶剂或存在适当的极性溶剂(如i-戊醇或n-丁醇)以及回流温度下进行。
中间物ACOX可由市售得到，或者，当A是苯氧基烷基时，根据本领域周知的和实施例1所描述的方法，从相应的酚衍生物开始，使该衍生物与卤烷基酸酯反应，接着进行水解和氯化，可由该中间物ACOX制得 可通过ACOX参与的反应2进行获得I的缩合作用，其中X表示卤素原子(如氯)，该缩合作用进行的条件为氯化的溶剂(如氯仿或二氯甲烷)或质子惰性的极性溶剂(如二甲基甲酰胺)、存在碱(如三乙胺或二异丙基胺)、0-40℃。或者，当X表示羟基时，该缩合作用可在上述氯化的溶剂或质子惰性的极性溶剂中、存在缩合剂(如二环己基碳二亚胺)和促进剂(如4-二甲基氨基吡啶)、0-40℃的条件下进行，或者在其他相同的条件下进行。或者，可以采用下面的方法 合适的酰氯与极性溶剂(如二甲基甲酰胺、丙酮或乙腈)中的HBH化合物反应，任选地存在碱(如碳酸钾或碳酸铯或三乙胺)，温度为20-100℃。
中间物AC(O)BH随后与化合物1反应以获得化合物I。此烷基化作用可在极性质子溶剂(如i-戊醇和n-丁醇)或质子惰性溶剂(如二甲基甲酰胺)中、60℃的条件下回流进行。
其B是B2的化合物I的对映异构体可由合适的HB2H对映异构体获得，后者通过外消旋物与光学活性酸〔如在适当溶剂或溶剂混合物中的(S)-10-樟脑磺酸)的盐化作用、接着重结晶分离出非对映异构体盐而获得。类似地，其B是B3的化合物I的对映异构体可通过外消旋的中间物2与适当的光学活性酸的盐化作用、非对映异构体的分离获得。
筛选候选化合物(以鉴定可用于实施本发明的那些化合物)涉及测定该化合物对不同神经元的α1肾上腺素能受体〔如Testa等人的方法(Pharmacol.Comm.，679-86，1995)中的α1a、α1b和α1d亚型〕的特异性结合活性，这可采用本领域熟知的大量方法中的任一种方法进行，如与天然或克隆的受体的竞争性结合。
一般使用生物来源的受体如α1b肾上腺素能受体，该受体有足够高的浓度，因此可容易地测定所标记的配体的结合。该来源可含有哺乳动物组织或液体(原位的或从动物中取出来之后的)或组织培养细胞。靶受体可由内源(天然的)基因或转染的受体编码重组基因表达。例如，大鼠的肝含有丰富的(天然的)α1B肾上腺素能受体(Taddei等人，Life Sci.，53PL177-PL181，1993)。或者，仓鼠α1b肾上腺素能受体cDNA可在培养基中的COS-7细胞中被短暂地表达(Cotecchia S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，857159-7163，1998)，人α1b肾上腺素能受体cDNA可在培养基中的CHO细胞中被表达(Testa等人，Pharmacol.Comm.，679-86，1995)。
另外，人α1a和α1d肾上腺素能受体cDNA已在CHO细胞中被表达(Testa等人，Pharmacol.Comm.，679-86，1995)，而肾上腺素能受体的牛α1a克隆(先前的α1c，Schwinn等人，JBiol.Chem.，2658183-8189，1990)和大鼠α1d克隆(Lomasney等人，J.Biol.Chem.，2666365-6369，1991)已在COS-7细胞中被短暂地表达，并可通过放射性受体结合技术评估其对α1b肾上腺素能受体的选择能力。
然后测量试验化合物和适当的标记配体对受体结合(receptor binding)的竞争能力，并采用Cheng-Prusoff方程(Cheng等人，Biochem Pharmacol.，223099-3108，1973)或本领域周知的其他相同的计算方法计算其结合常数(Ki)。下面的实施例8将对此进行详细的描述。
相反，并不存在测定化合物对α1L肾上腺素能受体亚型的亲和力的放射性受体结合技术，即使在大量组织中可采用功能性技术研究这种亚型，如兔的肠系膜动脉和颈动脉、大鼠输送血管和小肠系膜动脉、人的前列腺(见Doherty J.R.的综述，Eur.J.Pharmacol.，3611-15，1998)，以及受氯乙基可乐宁(chloroethylclonidine)预处理的兔主动脉(Testa等人，J.Pharmaclo.Exp.Ther.，2811284-1293，1997)。
在这个方法中，测量了试验化合物抑制NA引起的血管收缩的能力，并采用Arunlakshana等人的方法(Br.J.Pharmacol.Chemother.，1445-58，1959)或本领域周知的相同的计算方法估算了其解离常数(Kb)。下面的实施例9将对此进行详细的描述。
如上所述，用于实施本发明的化合物以至少10-8M的Ki与α1b肾上腺素能受体结合，并对α1a、α1b和α1L肾上腺素能受体具有至少低于10倍的亲和力。一旦鉴定出某化合物具有上述特征，则可使用研究雄性勃起的一个或多个动物模型系统来确定该化合物的药理学活性。有用的动物模型系统包括麻醉大鼠和/或狗的海绵窦内压力增加的系统。
在此方法中，给予海绵体以化合物并测量海绵窦内压力的发展，同时测量血压。较佳通过评估严格相关的海绵窦内压力和血压的比值来测定该化合物的效力。通过这种方法可获得活性指数(activity index)，它由百分比值表示，反映ICP与血压的百分比，该值能达到最大值100％。下面的实施例10和11将对这些方法做详细的描述。
根据上述在体内模型中测得的结果，当局部给予10-1000μg的有用的化合物时，引起ICP/BP比值的显著增加，血压下降不超过20％(仅在最高剂量时下降30％)。测量本发明产物对阴道和阴蒂压力的作用的模型在实施例12中描述。
治疗应用本发明包括含有治疗雄性和雌性性功能障碍(具体是源于血管的)的上述α1b肾上腺素能受体拮抗剂的药学制剂。
不愿被任何理论所束缚，交感神经控制维持阴茎和阴道壁以及阴蒂的松弛状态，并在这些组织中使交感神经介体对抗选择性α1b肾上腺素能受体拮抗剂，克服这种负面控制，使阴茎平滑肌松弛，雄性海绵状动脉血管舒张和雌性血管充血。结果，流到雄性海绵体小梁空间的血液量增加，导致阴茎充血(膨胀)。小梁壁对白膜的扩张压缩了膜下小静脉(subtunical venule)并阻止小静脉中血液的流出，导致持久的膨胀，即勃起。对于雌性，血管充血使得阴道润滑，因而获得满意的性快感。
治疗性功能障碍的化合物的“有效量”是引起勃起的改善的可测量的量。对于雄性，另一参数是勃起的持续时间，而对于雌性，该有效量是在阴蒂和阴道壁产生的可测量的血流量的量。
可采用本领域周知的方法进行实验以确定治疗性功能障碍的有效量，如通过建立剂量和次数矩阵，比较一组试验单元(unit)或者与矩阵中各点对比。给予患者的准确的给药量可依该患者的状态和疾病的严重程度以及其身体状况而改变。任何症状或参数的可测量改善可由本领域熟练的医生确定，或者由患者向医生报告。可以理解任何显著的临床或统计学上的改善都在本发明的范围内。临床上的显著改善指对于患者和或医生来说的显而易见的改善。
较佳的是，在给药前先将本发明化合物与合适的药学上可接受的载体混合。这些组合物含有治疗有效量的本发明化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。例如，当注射给药时，可以制备通过海绵窦内注射到阴茎的可接受的水溶液。在这个例子中，载体包括但不限于水、盐水、缓冲盐水、盐、甘油和乙醇，它们可单独或混合使用。另外，可在该组合物中加入非刺激性的防腐剂，如苯扎氯胺(benzalkonium chloride)。
在尿道内、皮下或局部给药的例子中，该药学上可接受的载体包括但不限于凝胶(如石油凝胶)、油膏、霜剂、溶液、喷雾剂、粉末、泡沫和脂质体形式。载体是水溶性和非刺激性的，不会引起皮肤过敏。在一个较佳实施例中，这种类型的给药所用的载体具有半松软的乳剂样的稠度(consistency)。这可通过使用水凝胶(如羟丙基甲基纤维素)获得。
对于阴道内的阴道灌洗给药，载体包括但不限于单独或混合使用的水、盐水、缓冲盐水、盐、甘油和乙醇。而且，可在该组合物中加入非刺激性的防腐剂，如苯扎氯胺。
以乳剂或阴道卵状小体形式给药的载体包括但不限于丙二醇、氢化羊毛脂、甜杏仁油、脂肪酸的聚乙二醇酯、十六醇、单硬酯酸甘油酯、乙底酸酯、脂肪酸三甘油酯、明胶、甘油、二氧化钛、对羟基苯甲酸酯。
本发明药学组合物可任选地包含其他提高或补充本发明化合物性行为改善效果的活性剂。这些活性剂包括但不限于前列腺素(如前列腺素E2)、直接的血管舒张药(如罂栗碱)和V型磷酸二酯酶抑制剂〔如1-{[3-(4，7-二氢-1-甲基-7-氧-3-丙基-1H-吡唑[3，4-d]嘧啶-5-基-4-乙氧基苯基}-4-甲基哌嗪，即周知的秀点那佛(sildenafil)〕。这些化合物在产生所需的改善效果方面补充了本发明化合物的直接作用。口服或静脉混合给药或按下面段落所讨论的方法给予本发明化合物与秀点那佛可减少后者的剂量，使不良的副作用最小化。
较佳的是，根据下述任一方法给予本发明化合物。可注射给予本发明化合物，其中，本发明化合物溶解在0.2-20mg/ml的盐水中。经海绵窦内注射0.5ml。在较佳使用方法的另一实施例中，本发明化合物被配制于石油凝胶中，然后外敷于一个尿道内导管。本发明化合物的剂量范围是所使用的凝胶的1-10重量％。将该导管插入尿道，以给予尿道内本发明化合物，产生勃起所需的血管舒张。
可注射给予上述可有效解除人的性功能障碍的化合物的任何数量。单剂药为约0.1-10mg/剂，优选为约0.3mg/剂到3mg/剂。
对于阴道灌洗剂，浓度范围可为0.2-5％，而对于阴道霜剂，其浓度范围为1-10％。通过阴道卵状小体给药的量可为1-100mg。
通过以下实施例和所参考的表和图阐述本发明。
实施例14-氨基-6，7-二甲氧基2-[4-(2-甲氧基6-异丙基苯氧基乙酰基)-1-哌嗪基]-喹唑啉盐酸盐(IA＝2-甲氧基-6-异丙基苯氧基甲基，B＝B1)(化合物A)2-甲氧基-6-异丙基苯氧基乙酸(1A)室温下，在15分钟内将11.1ml溴乙酸乙酯在10ml甲苯中的溶液滴加到NaOH(20g)、H2O(30ml)、三乙基苄基铵氯(1.1g)、2-异丙基-6-甲氧基苯酚(8.4g，根据Johnson等人的描述制备，Tetrahedron.，38，1397-1404(1982))和甲苯(40ml)的混合液中。同样温度下用力搅拌该混合液2小时，然后60-65℃搅拌2小时，回流6.5小时。在最后一步加入6ml溴乙酸乙酯在10ml甲苯中的溶液。最后用250ml水稀释该混合液。分离出水相并用浓盐酸处理；用Et2O抽提(3×50ml)乳化的沉淀物，用水洗涤有机相。另一次抽提用40ml Na2CO3(20％)，用浓盐酸处理该微碱性溶液，并用Et2O抽提(3×40ml)。集中抽提液，蒸发去除溶剂，得到8g(72％)标题化合物；b.p.190℃/0.7mmHg。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[4-(2-甲氧基-6-异丙基苯氧基乙酰基)-1-哌嗪基]-喹唑啉盐酸盐将3.6ml SOCl2滴加到沸腾的6g中间物1A在30ml CCl4中的溶液中，并将该混合液回流搅拌2小时。用26ml CHCl3溶解由蒸发该反应混合液得到的油性残留物，然后，在30分钟内将该溶液滴加到搅拌着的4-氨基-6，7-二甲氧基-2-(1-哌嗪基)-喹唑啉(7.75g)和Et3N(4.1ml)的DMF(50ml)溶液的混合液中。搅拌2小时后，蒸干溶剂。用250ml CHCl3溶解残留物。先后用2.5％NaHCO3、H2O洗涤该溶液，最后蒸干。采用柱色谱法进行纯化，使用100∶3的CHCl3/MeOH作为洗脱液。将残留物悬浮在100ml沸腾的乙醇中，然后加入稍微过量的HCl的乙醇溶液，直到残留物溶解。冷却后，通过抽吸(suction)收集盐酸盐，并从乙醇中结晶得到6.4g(45％)产物；m.p.252-254℃。
实施例24-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(4aR，8aS)-4-(2-呋喃甲酰)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉盐酸盐(IA＝2-呋喃基，B＝B3)(化合物B)(±)-(2-呋喃甲酰)-cis-八氢喹喔啉(2A)40-45℃边搅拌边将1.44g氢溴酸(48％)滴加到顺式-八氢喹喔啉(3.85g，根据Brill等人所述的方法制备，J.Org.Chem.，28，1135-1138，1963)))的26ml乙醇溶液和4ml H2O中。在15分钟内将1.16g 2-呋喃甲酰氯化物滴加到所得的溶液中，并在80℃持续搅拌3小时。将该溶液浓缩成小体积，用水稀释，用氯仿抽提。采用快速色谱法(洗脱液是8∶6∶2∶0.2的石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶28％的铵的水溶液)纯化蒸发溶剂后所得的残留物，得到2.35g(40％)所需的化合物。m.p.178℃分解。(+)-1-(2-呋喃甲酰)-cis-八氢喹喔啉(2B)用(S)-(+)-苯乙醇酸(1.54g)在甲醇(22ml)中的溶液处理上述中间物2A(2.35g)在甲醇(22ml)中的溶液。蒸干该混合液，将所得残留物固体溶解在265ml热乙酸乙酯中，然后蒸发使体积减少到130ml，使结晶。用同样的溶剂将该沉淀物重结晶6次，得到0.4g(+)-苯乙醇酸盐，其m.p.为188-190℃，〔α〕20D＝+79.4°(c＝1，MeOH)。将该盐水中，经冰冷却的溶液用2N NaOH处理成碱性，然后用氯仿(3×22ml)抽提所得溶液。去除溶剂，得到0.21g所需化合物，为腊状固体，其m.p.为47-50℃，〔α〕20D＝+70.1°(c＝1，MeOH)。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(4aR，8aS)-4-(2-呋喃甲酰)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉盐酸盐将上述中间物2B(0.21g)、4-氨基-2-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉(0.18g)和N，N-二异丙基乙胺(0.2g)在13ml异戊醇中的混合液加热回流72小时，冷却后，将该混合液0℃过夜。然后收集固体，将其放在冷的2N NaOH中研磨，过滤，用水洗涤，该固体转变为盐酸盐。在MeOH/15％EtOH中结晶，得到0.06g标题化合物。其m.p.为262-264℃，〔α〕20D＝+74.4°(c＝1，MeOH)。
实施例34-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(3S)-3-(t-丁基氨基甲酰基)-4-(2-呋喃甲酰)-1-哌嗪基]-喹唑啉(IA＝2-呋喃基，B＝B2)(化合物C)4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(3S)-3-(t-丁基-氨基甲酰基)-1-哌嗪基]-喹唑啉(3A)将4-氨基-2-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉(0.36g)、(S)-N-叔丁基-2-哌嗪氨甲酰二-(1S)-(+)-10-樟脑磺酸(1.08g，如US 5700364所述制备)和二异丙基乙胺(0.94ml)在10ml异戊醇中的溶液加热回流9小时。冷却至室温后，在真空中蒸发溶剂，然后将50ml二氯甲烷加到残留物中。用水(3×20ml)、5％ Na2CO3水溶液(30ml)、水(3×20ml)洗涤该混合物，干燥(Na2SO4)并蒸干。采用快速色谱法(以100∶3的氯仿∶2N甲醇铵为洗脱液)纯化该残留物，得到0.173g(30％)所需化合物。
1H-NMR(CDCl3，δ)1.35(s，9H，C(CH3)3)，1.65-2.10(m，1H，哌嗪的NH)，2.30-3.40(m，5H，哌嗪的CH)，3.95(s，6H，OCH3)，4.45(d，1H，哌嗪的CH)，4.68(dd，1H，哌嗪的CH)，6.00-6.45(m，2H，NH2)，6.85-7.10(m，2H，CONH和喹唑啉的H8)，7.18(s，1H，喹唑啉的H5)。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(3S)-3-(t-丁基氨基甲酰基)-4-(2-呋喃甲酰)-1-哌嗪基]-喹唑啉将上述中间物3A(0.243g)、二异丙基乙胺(0.17ml)、2-呋喃甲酰氯(0.08ml)在二氯甲烷(10ml)中的溶液的混合液室温搅拌10小时。用二氯甲烷(10ml)稀释该溶液，用水(4×10ml)、NaOH(4×10ml)、水(4×10ml)洗涤，用Na2SO4干燥，蒸干。采用快速色谱法(以100∶2的石油醚∶乙酸乙酯为洗脱液)纯化，获得0.2g(68％)象牙色固体标题化合物。
1H NMR(DMSO-d6，δ)1.14(s，9H，C(CH3)3)，3.08-3.22(m，1H，哌嗪的CH)，3.32-3.47(m，2H，哌嗪的CH5)，3.77(s，3H，OCH3)，3.81(s，3H，OCH3)，4.10-4.25(m，1H，哌嗪的CH)，4.35-4.50(m，1H，哌嗪的CH)，4.82-4.98(m，2H，哌嗪的CH5)，6.61-6.66(m，1H，呋喃的H4)，6.69(s，1H，呋喃的H3)，6.95-7.18(m，3H，CONH和NH2)，7.42(s，1H，喹啉的H8)，7.55(1H，喹啉的H5)，7.85(s，1H，呋喃的H5)。
实施例44-氨基-6，7二甲氧基-2-[(±)-4-(2-甲氧基-6-异丙基苯氧基乙酰基)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O(IA＝2-甲氧基-6-异丙基苯氧基甲基，B＝B3)4-氨基-6，7-二甲氧基-2[(±)-cis-八氢-1-喹喔啉基]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O(4A)将4-氨基-2-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉(7.85g)、三乙胺(13.3g)、二甲基氨基吡啶(0.4g)、cis-十氢喹喔啉(11.5g)和i-戊醇(80ml)的混合液回流搅拌72小时。冷却至室温后，蒸干溶剂，采用快速色谱法(以8∶6∶2∶0.2的石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶28％氢氧化铵为洗脱液)纯化残留物。将所获得的残留物转换成盐酸盐，并从1∶1的i-丙醇∶甲醇中结晶得到14.7g(73％)所需化合物，其m.p.为290-295℃。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[4-氯乙酰基-(±)-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐(4B)0℃下，在15分钟内将氯乙酰氯(0.26g)的二氯甲烷(6ml)溶液滴加到搅拌着的上述中间物4A(0.5g)和二异丙基乙胺(0.21g)的二氯甲烷(15ml)溶液的混合液中。室温搅拌4小时后，将其放在冰箱中静置72小时。抽空收集该固体，并从氯仿中结晶得到0.12g(33％)所需产物，其m.p.＞270℃。
1H NMR(CDCl3，δ)1.30-2.35(m，8H，八氢喹喔啉5、6、7和8位上的CH)，3.70-4.18(m，10H，八氢喹喔啉2和3位上的CH以及2个OCH3)，4.20-4.36(m，1H，八氢喹喔啉的H4a)，4.47(s，2H，CH2Cl)，4.60-4.78(m，1H，八氢喹喔啉的H8a)，7.48(s，1H，喹啉的H8)，7.75(s，1H，喹啉的H5)，8.66(br，1H，NH)，8.90(br，1H，NH)，11.95(br，1H，NH)。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(2-甲氧基-6-异丙基苯氧基乙酰基)-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O将10ml新配置的0.095M EtONa溶液加到搅拌着的2-异丙基-6-甲氧基苯酚(0.16g)的乙醇(5ml)溶液中，搅拌在室温持续0.5小时。在氮气气氛中，将所得的溶液在15分钟内滴加到搅拌着的上述中间物4B(0.2g)的乙醇(50ml)溶液中。室温搅拌该混合液5小时，然后回流20小时。将溶剂蒸干后所获得的残留物转换为盐酸盐，并从i-丙醇中结晶得到0.64g(21％)标题化合物，其m.p.为208-209℃。
实施例54-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(5-甲基-2-呋喃甲酰)-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O(IA＝5-甲基-2-呋喃基，B＝B3)5-甲基-2-呋喃甲酰氯(5A)0℃下，在氮气气氛中，将SOCl2(0.31g)在苯(2ml)中的溶液滴加到5-甲基糠酸〔0.22g，根据Robert等人(Eur.J.Med.Chem.，30，915-924(1995)所述的方法制备〕在5ml苯中的溶液中。将该混合液80℃搅拌1小时，并蒸馏去除过量的SOCl2。残留物(0.24g，理论得率为97％)不需进一步纯化即可由于下一步。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(5-甲基-2-呋喃甲酰)-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O0℃下，将上述中间物5A(0.24g)在5ml二氯甲烷中的溶液滴加到搅拌着的中间物4A(0.56g)和三乙胺(0.25g)在10ml二氯甲烷中的溶液中。室温搅拌该混合液3小时，然后保持0-4℃过夜。抽空收集沉淀物，采用快速色谱法(以8∶8∶2∶0.2的石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶28％氢氧化铵为洗脱液)纯化该沉淀物。将该纯化的碱转换成盐酸盐，并从i-丙醇中结晶得到0.2g(27％)标题化合物，其m.p.为268-270℃。
实施例64-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(2-四氢呋喃甲酰)-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O(IA＝2-四氢呋喃基，B＝B3)2-四氢呋喃甲酰氯(6A)将0.22g 2-四氢-2-糠酸和SOCl2(0.5ml)在10ml苯中的溶液的混合液80℃搅拌1小时。蒸馏去除过量的SOCl2和苯，得到0.25g油性残留物，该残留物可认为有80％的纯度，不需进一步的纯化即可用于下一步。4-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-(2-四氢呋喃甲酰)-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐·2.5H2O根据实施例5所述的方法制备此化合物，但使用中间物6A而不是5A，并使用8∶6∶2∶0.1的石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶14％氢氧化铵为洗脱液进行快速色谱法。纯化的碱转换成盐酸盐，从乙醇中结晶得到得率为21％的标题化合物，其m.p.为220-223℃。
实施例74-氨基-6，7-二甲氧基-2-[(±)-4-苄氧基羰基-cis-八氢-1-喹喔啉]-喹唑啉盐酸盐·0.75H2O(IA＝苄氧基，B＝B3)根据实施例5所述的方法制备此化合物，但使用苄氧基羰基氯而不是中间物5A，并使用8∶5∶0.6∶0.025的石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶14％氢氧化铵为洗脱液进行快速色谱法。纯化的碱转换成盐酸盐，从乙醇中结晶得到得率为14％的标题化合物，其m.p.为243-245℃。
实施例8克隆的α1-肾上腺素能受体的放射性配体结合试验在短暂表达牛α1a、仓鼠α1b和大鼠α1d-肾上腺素能受体的COS-7细胞(CV-1猴肾上皮细胞)的膜上进行[3H]哌唑嗪与牛α1a、仓鼠α1b和大鼠α1d-肾上腺素能受体的结合。如先前所述的进行单个α1-肾上腺素能受体的构建和转染(Schwinn等人，J.Biol.Chem.，2658183-8189，1990；Cotecchia S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA，857159-7163，1988；Lomasney等人，J.Biol.Chem.，2666365-6369，1991)。
25℃下，在含有10μM帕吉林和0.1％抗坏血酸的50mM Tris(pH7.4)和1.1nM[3H]哌唑嗪的总体积为0.22ml的溶液中〔在竞争性药物(1pM-10μM)的存在或不存在下〕培养COS-7细胞膜30分钟(α1b、α1a和α1d的蛋白/样本分别为35、35和70μg)。在100μM酚妥拉明的存在下测定到非特异性的结合。加入冰冷的Tris缓冲液终止培养，并用经0.2％聚乙烯亚胺预处理的WhatmanGF/B或Schleicher & Schuell GF52过滤器进行快速的过滤。
在CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)的膜上进行与克隆的人α1-肾上腺素能受体亚型的结合，该细胞通过电穿孔转染了编码各α1-肾上腺素能受体亚型的表达基因的DNA。如先前所述进行α1-肾上腺素能受体基因的克隆和稳定的表达(Testa等人，Pharmacol.Comm.，679-86，1995)。在竞争性药物(1pM-10μM)的存在或不存在下，在50mM Tris(pH7.4)和0.2nM[3H]哌唑嗪的总体积为1.02ml的溶液中25℃培养CHO细胞膜(30微克的蛋白质)30分钟。在10μM的酚妥拉明的存在下测定非特异性的结合。加入冰冷的Tris缓冲液终止培养，并用被Whatman GF/B或Schleicher & Schuell GF52过滤器(经0.2％聚乙烯亚胺预处理)进行快速的过滤。
分析放射性配体的特异性结合被试验药物的抑制，采用非线性曲线-拟合程序(fitting program)评估IC50值(Delean等人，A.J.Physiol.，235E97-E102，1978)。采用Cheng & Prusoff方程将该IC50值转化为亲和常数(Ki)(Cheng等人，Biochem.Pharmacol.，223099-3108，1973)。数据以平均的Ki表示。
实施例1-7的化合物具有所需的对α1b-肾上腺素能受体的效力，它们的Ki值高于1×10-8M(表1)。化合物A、化合物B和化合物C也对α1b-肾上腺素能受体有选择性，它们对其他α1-亚型的亲和力至少低10倍。
表1

实施例9α1L-肾上腺素能受体的功能性亲和力根据Testa所述的方法(Testa等人，J.Pharmacol.Exp.Ther，2811284-1293，1997)评估对于兔主动脉(用氯乙基可乐定预处理受体α1L)该试验化合物抗去甲肾上腺素引起的收缩的功能性α1-拮抗活性。通过颈错位处死成年雄性新西兰兔。取出主动脉，将其放置在Krebs-Henseleit缓冲液中，并分开黏附的组织。从各主动脉中制得环(ring)(每个主动脉8个环，大约4-5mm宽)并将其悬浮在20ml含有Krebs重碳酸盐缓冲液的器浴(organ bath)中，该缓冲液含有下列物质(mM)NaCl 112.0、KCl 5.0、CaCl22.5、KH2PO41.0、MgSO41.2、NaHCO312.0和葡糖11.1，使其在37℃、95％O25％CO2中平衡。在缓冲液中加入封阻神经细胞和神经细胞外的NA的摄取的去甲基丙咪嗪(0.1μM)和皮质酮(1μM)、封阻β肾上腺素能受体的(±)-心得安(1μM)和封阻α2-肾上腺素能受体的育亨宾(0.1μM)。将该组织呈递给2g的无源负载(passive load)，并使用等长传感器(isometric transducer)测量展开张力(developed tension)(Basile 7003)。
使该制品平衡60分钟，然后每30分钟加入10μM NA，共3次。然后将主动脉环与烷基化试剂氯乙基可乐定(5×10-5M)培养30分钟，之后在绘制NA浓度-响应曲线之前将培养物充分地洗涤3次(在0.5小时内)。洗去NA和将该组织重平衡(45分钟)后，加入要试验的药物，30分钟后，绘制另一NA累积的浓度-响应曲线。用2-3个从不同兔子得到的主动脉环测试各拮抗剂浓度。
计算化合物各浓度的剂量比例(即在有和没有试验拮抗剂的情况下产生最大响应的一半的去甲肾上腺素浓度的比例)。将这些剂量比例-1的对数对化合物浓度的对数绘制成曲线(Schild曲线)，评估亲和常数Kb。当仅使用试验化合物的一个或两个浓度时，近似的Kb值用Kb＝[B]/(剂量比例-1)计算，其中B是拮抗剂浓度。
与α1L-肾上腺素能受体相比，试验化合物对α1b-肾上腺素能受体具有选择性。实际上，它们对这种受体的功能性亲和力比对α1b-亚型至少低10倍(表2)。
表2

实施例10在大鼠中记录到的海绵窦内压力和血压根据Giuliano等人所述的方法(Giuliano等人，J.Urol.，150519-524，1993)进行不同化合物作用于大鼠所产生的勃起特性的评估。
腹膜内注射尿烷(1.5g/kg，在无菌盐水中)将大鼠麻醉。然后将其放在恒温表面上。它们的温度维持在37℃。将大鼠的气管切开以利于进行自发的呼吸，并防止吸入唾液。将充满肝素化盐水(25IU/ml)的导管插入颈动脉，以记录平均的血压(BP，mmHg)。阴茎脱去外皮，海绵体暴露。将25号的不锈钢针插入海绵体，记录海绵窦内压力(ICP，mmHg)。该针连接着充满肝素化盐水(25IU/ml)的导管。压力导管连接到压力传感器上(750型，Elcomatic公司，Glasgow，UK)。
静止10分钟后，在海绵窦内中传送化合物溶剂(50μl/注射剂)。然后，每10分钟通过同样的途径注射一种化合物的渐增剂量。每大鼠注射5份注射剂(1份溶剂加上4份渐增的剂量)，用5只大鼠研究一种化合物。测量注射后各注射剂和各化合物10分钟之内的平均BP。同时还记录注射后10分钟内ICP所达到的最大值。在这些试验中，所有被测量的化合物都溶解并稀释在丙二醇-Sorensen溶剂中。ICP值和BP值用平均值±平均值的标准偏差或者基本值的百分比变异(±标准偏差)表示。使用ICP对注射化合物后10分钟内观察到的平均血压的峰值计算比值(ICP/BP)×100，该比值对应于通过ICP BP所达到的百分比，以平均值±平均值的标准偏差表示。
表3-5总结了化合物A、哌唑嗪和酚妥拉明的效果。化合物_A剂量依赖性地(dose-dependently)增加了ICP(从注射赋形剂后的33.9mmHg到50.6mmHg)和略降低了BP(大约30％)。ICP增加持续了几分钟，但未能持续到所观察的10分钟时期结束(未给数据)。哌唑嗪没有引起任何ICP增加，但在溶剂注射期间和注射了1000μg/kg之后血压降低了41％。酚妥拉明一直到300μg/kg都没有改变ICP。注射1000μg/kg后，它引起了持续的ICP增加，该增加维持了几分钟(没超过10分钟)；在此剂量，酚妥拉明降低了30％的血压。


图1表示对大鼠进行海绵窦内注射后，用于测试ICP/BP比值(对应于通过ICP达到的BP百分比)的赋形剂的效果和化合物的不同剂量。数据表示比值的平均值。基本值第一栏；赋形剂第二栏；不同的试验剂量其他栏(化合物A10、30、100和300μg；哌唑嗪和酚妥拉明10、30、100、300和1000μg)。同时还显示了平均BP对于表3-5所列的基本值的百分比减小。化合物A以剂量依赖的方式增加了ICP/BP比值。在血压降低不超过20％的情况下获得高于40％的增加。相反，由哌唑嗪和酚妥拉明引起的ICP/BP增加的剂量依赖性差，在相同的剂量，两种化合物引起显著的低血压，其血压降低等于或高于40％。
化合物A增加了该比值，从注射溶剂后的31.8增加到注射了300μg/kg化合物后的66.4。由于ICP根本就没有增加，所以由最高剂量的哌唑嗪获得的增加仅反映血压的降低。酚妥拉明仅在最高的剂量引起轻微的增加。
表3

表4

表5

实施例11狗的ICP和BP记录根据Carati(Carati等人，J.Physiol.，384525-538，1987)所述的方法并对其作一些修改进行狗的勃起特性的评估。用戊巴比妥钠麻醉雄性猎兔犬(静脉注射戊巴比妥钠，35mg/kg作为引起，4mg/kg/h作为维持)，插入气管套管以利于空气自由流通。在左侧股静脉的附属静脉中插入PE导管，以输灌麻醉剂。将Mikro-tip 6F(Millar Instruments)压力传感器通过右侧常见的颈动脉导入主动脉弓，以此来监测全身的BP。将20号针插入左或右侧的海绵体，测量ICP，该针同时用来进行药物的海绵窦内注射。该针连接着充满肝素化盐水(25IU/ml)的导管。通过BM 614/2放大器，在多通道的多种波动描记器上触发(trigger)压力信号。海绵窦内注射0.5ml的试验化合物，各注射结束后，用0.5ml盐水冲洗该针。在使用各药物的第一剂之前先测试用于药物溶解的赋形剂。以渐增的方法给予化合物，每剂的时间间隔是30分钟。给予化合物后在峰值效应处测量ICP(mmHg)。测定ICP超过其基本值到回到基本值的肿胀持续时间(DT，分钟)。为了评估化合物对BP的影响(与化合物对ICP的影响分开)，给予药物后在峰值效应测定心脏的收缩压和舒张压(mmHg)。而且，在海绵窦内注射后ICP达到最大值时测定心脏收缩压，以评估ICP/BP比值。
在这些试验中，化合物A、化合物B和酚妥拉明(1或3mg/ml)溶解在10％(v/v)N，N-二甲基甲酰胺中，并进一步稀释在去离子水中。哌唑嗪溶解在去离子水中。数据以平均值±该平均值的标准偏差或基本值的百分比变化(±标准偏差)表示。
表6-9给出了在麻醉的狗身上由海绵窦内给予各种药物的结果。在使用各化合物的各剂量之前先检测用于药物稀释的赋形剂，其结果表明并没有对ICP或全身性BP产生影响(未给数据)。
所有的试验药物均引起了ICP的增加。化合物A剂量依赖性地增加了ICP(与基础ICP值相比)，使其从12mmHg(3μg/kg)增加到96.5mmHg(最高剂量300μg/kg)。海绵窦内压力增加的持续时间(DT)也是剂量依赖性的，在最高剂量它至少持续了27分钟。该化合物引起了-10到-19mmHg的轻微的剂量依赖性低血压(根据心脏舒张压计算)。化合物B以剂量依赖的方式增加了ICP，其值从13.7mmHg(3μg/kg)增加到73.3mmHg(1000μg/kg)，并仅在最高剂量引起低血压(-31mmHg，心脏舒张压)。在最高剂量，DT持续了大约40分钟。哌唑嗪和酚妥拉明在引起持续的低血压的剂量下增加了ICP。而且，注射这些参照化合物后观察到的ICP增加不是剂量依赖性的。注射1000μg时，哌唑嗪仅引起36mmHg的ICP增加，并使心脏舒张压降低了71mmHg。类似的，酚妥拉明(同样的剂量)增加了43mmHg的ICP，但使心脏舒张压降低了37mmHg。
图2表示对狗进行海绵窦内注射后，用于测试ICP/BP比值(对应于通过ICP达到的BP百分比)的赋形剂的效果和化合物的不同剂量。数据表示比值的平均值。基本值第一栏；不同的试验剂量其他栏(化合物A3、10、30、100和300μg；化合物B3、30、100、300和1000μg；哌唑嗪30、100、300和1000μg；酚妥拉明10、30、100、300和1000μg)。同时还显示了DBP对于表6-9所列的基本值的百分比减小。
化合物A以剂量依赖性的方式增加了ICP/BP比值。在血压降低不超过20％的情况下获得高于80％的增加。给予化合物B后也得到类似的结果。相反，哌唑嗪引起的ICP/BP增加低于那些注射化合物A和B后获得的增加，此参照化合物还引起了显著的低血压。酚妥拉明仅在最高剂量时增加ICP/BP比值，在该剂量也引起了相关的低血压。
表6

表7

表8

表9

实施例10和11的结果表明了选择性α1b-拮抗剂在治疗勃起功能障碍中的有用性。
化合物A(在狗和大鼠中)和化合物B(在狗中)引起了剂量依赖性的ICP增加和非常低的低血压效果。相对于酚妥拉明和哌唑嗪，这些化合物在较低剂量获得前勃起(proerectile)活性，并且所引起的心脏舒张压的降低比对照药物引起的为轻。
在狗和大鼠中，酚妥拉明在非常高的剂量增加ICP，且其前勃起活性伴随着持续的低血压。同样，哌唑嗪在狗中引起的ICP增加也伴随着强烈的低血压。在大鼠中，当通过海绵窦内给予哌唑嗪时，它并未增加ICP，因而，在这种动物身上没有出现前勃起特性。
而且，给予狗注射化合物A(和所试验的最高剂量的化合物B)后观察到的作用的持续时间多于注射参照试验化合物所观察到的。
实施例12对雌性兔子阴道和阴蒂压力的效果的评估根据Park K等人(Int.J.Impot.Res.，9，27-37，1997)所述的方法，并进行适当的修改，进行本发明产物对雌性阴道和阴蒂压力的效果的评估。
用戊巴比妥将新西兰种雌性兔子麻醉，然后将导管插入颈动脉，记录血压。采用中部剖腹术暴露和分离腹部动脉和髂骨动脉(电磁流量传感器置于其上以测量外周流量)以及骨盆神经分支(使阴道和阴蒂受神经支配)。将连接着压力传感器的针(21号)分别插入阴道海绵体和阴蒂海绵体，测量阴道壁和阴蒂的压力。以局部给药的方式将试验化合物给予阴道海绵状组织的上皮下层，或者以静脉给药的方式给药试验化合物。
测量局部给药后的阴道和阴蒂压力效果和通过电刺激骨盆神经(刺激参数10V，16Hz，8毫秒)引起的压力效果。
在上述实验模型中，由本发明化合物获得的结果表明本发明化合物可有效使用于性功能障碍的治疗中，产生非常小的源于低血压的副作用。


化合物(I)(A=2－呋喃基、取代的2－呋喃基、2－四氢呋喃基、取代的烷氧基或取代的苯氧基烷基;B=B