一种可计数的培养皿的制作方法[0002]在生物医学实验中，细胞培养是最为常用的实验技术之一。无论是在原代培养接种、细胞传代培养以及对其增殖能力的观察，还是为进一步实验提供细胞通常都需要对所获得的细胞进行准确计数。目前对培养细胞计数的常用方法均是将细胞用胰酶进行消化后制备细胞悬液，再取少量悬液用计数板或计数枪进行计数，最后再将计数后的细胞进行重新接种或用于其它的检测。此两种计数方法均存在以下明显的缺陷:1、经过酶消化后会对细胞的活性产生影响，甚至由于消化时间不当可导致细胞死亡。2、经消化后的细胞再接种进行继续培养可能会引起污染。3、在细胞悬液中存在一定浓度胰酶，用于进一步实验时可能会影响后续的研究结果。[0003]因此，在实际的实验操作过程中，需要研制一种可直接对培养细胞进行计数并准确控制悬液用量的培养装置。如CN 203212574 U公开的菌落选点技术培养皿，虽然该培养皿能对培养细胞进行计数，但是该培养皿的选点位置受培养皿体底中方格位置的限制，另外该培养皿不能对培养基的量进行控制。因此，在培养皿对培养细胞计数和培养基量的控制方面需要进一步的改进。
[0004]本实用新型所要解决的技术问题是针对现有细胞计数方法及装置容易造成培养细胞二次污染、细胞额外损伤等缺陷，目的在于提供一种可以使细胞不离开培养皿而实现对其计数的细胞计数装置。[0005]本实用新型所述的一种可计数的培养皿，包括圆形的皿体和与皿体配合的皿盖，该皿盖上设有手柄。所述皿盖采用透明材质，其内表面设有等间距且相互垂直的纵横交错线条，形成若干计数方格，所述皿体的侧壁上设有刻度线。[0006]为了清晰地计数，所述计数方格的分布是以皿盖的中心呈“ + ”字形，形成上、下、左、右和中心共五个区域，每个区域为一个计数池，每个计数池方格数量为3*3共9个。[0007]在离体细胞培养实验中，我们通过将该细胞培养装置放置于倒置显微镜下，根据上盖各方位的计数池,计数出不同部位方格内细胞分部的个数,结合培养皿的直径大小就可算出培养皿中细胞的具体数量，且通过转动上盖侧面的手柄可计数不同部位细胞的数量，使细胞计数更为客观、准确。
[0008]本实用新型具有以下优点:
[0009]1、本实用新型针对现有培养细胞计数需进行酶消化、重新接种培养容易造成培养细胞二次污染以及影响细胞活性的缺点，其设计的皿体和皿盖使得细胞培养和计数可以一体化实现，可以实现对细胞实时计数而不离开培养环境，有效避免二次污染和额外损伤。
[0010]2、本实用新型可将培养细胞种植在皿体内，并根据皿体外壁上的刻度，可判断培养基的加入量，使用方便，并且还可对培养细胞突起生长及突起长短进行初步的测量。
[0011]3、通过皿盖上手柄的转动，可计数培养皿内不同部位细胞的数量，通过对多次计数细胞进行平均后就可算出培养皿内细胞的总数，使细胞计数更为客观、准确。
[0012]4、装置结构简单，成本低廉。



[0013]图1为本实用新型的结构示意图；
[0014]图2为图1中皿盖的结构示意图；
[0015]图3为本实用新型方格的使用状态图。

[0016]下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步的详细阐述:
[0017]参见图1至图3所示的一种可计数的培养皿，其包括圆形的皿体I和与皿体配合的皿盖2，皿体I的直径为35mm，该皿盖2的侧壁上设有手柄21，所述皿盖2采用透明材质，其内表面设有等间距且相互垂直的纵横交错线条，形成若干计数方格22，所述计数方格22的分布是以皿盖2的中心呈“ + ”字形，形成上、下、左、右和中心共五个区域，每个区域为一个计数池。较有的设计是每个计数池方格数量为3*3共9个，所述每个计数池的长、宽各
0.3mm,其内的9个计数方格每个长0.1毫米、宽0.1毫米，面积为0.01平方毫米，所述每个计数池都是一个凹槽。所述皿体I的侧壁上设有刻度线11，所述侧壁上设有刻度线11从下至上分别为0.5ml, 1.0ml, 1.5ml和2ml，可大体显示培养皿内加入培养基的量。
[0018]本实用新型的工作原理:
[0019]将从孵箱中取出的培养细胞，根据皿体侧壁上的刻度，可判断培养基的加入量，然后在低倍镜下找到计数池后，再转换高倍镜观察并计数。每个计数池区均要观察(各计数池的计数区见图2标示)，为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对分部在方格线上的细胞的统计应有统一的规定。如细胞位于方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。对于分裂的细胞，当新生细胞达到正常细胞大小一半时，即可作为两个细胞计算(见图3所示)。计数完毕后，用75%的酒精消毒培养皿后，可将观察的细胞放回孵箱继续培养或进行下一步实验。根据我们所设计的计数装置的大小，所计数的细胞数量如下:
[0020]N为:1个方格内的平均细胞数
[0021]公式简化后:细胞数/皿=N/计数池面积(0.0lmm2) X培养皿的底面积(直径35mm)
[0022]计算后每皿细胞数大约=NX 105
[0023]进行离体培养细胞计数时，本实用新型提供了一种简便的具有计数功能的培养皿，该培养皿皿盖上的方格，可在不离开培养条件下对培养或需要接种的细胞进行计数，实现计数过程不需要酶的消化以及离开培养环境，减少实验的中间环节并能较好的维持细胞活性。