专利名称：燕窝寡肽组合物及其制备方法和使用的制作方法燕窝为雨燕科Apodidae金丝燕属Collocalia的几种鸟类，吞食海中小鱼或其他 蚕螺海藻等小生物消化后，分泌出的胃液与其绒羽混合凝结于悬崖峭壁上，而筑成的巢窝。 燕窝是与人参、鹿茸齐名的名贵补药之一。燕窝中有粘蛋白，其包括人体必需的十六种氨基酸，以及唾液酸、微量元素等活性 成分。其中燕窝的主要成分为粘蛋白，为大分子的物质，是燕窝的最主要的活性物质之一。 将大分子量的燕窝蛋白水解为小分子的寡肽组合物，可以大大提高其生物利用度。蛋白质是由氨基酸组成的。通常由10 100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物 叫多肽，它们的分子量低于10，0000乂0&1切11，道尔顿)，能透过半透膜。一般把由2 10 个氨基酸组成的肽称为寡肽(小分子肽)；10 100个氨基酸组成的肽称为多肽；由100个 以上的氨基酸组成的肽称为蛋白质。在营养和化妆行业，燕窝营养制剂进行提取处理方法比较单一，主要是以蒸煮的 粗加工的方式。这些方法主要是去除燕窝里杂质类，得到纯度较好的蛋白或糖蛋白，通常还 保留几乎完整的大分子形式。大分子形式的蛋白或糖蛋白生物利用度一般比较低，在营养 和化妆行业中是不利的。而多肽，特别是小分子肽有以下特点(1)不需消化，直接吸收。(2)吸收时不需消耗人体能量。(3)不增加人体胃肠功能负担。(4)具优先吸收特点。(5)吸收快速，比人体吸收大分子蛋白质快129600秒钟，较人体氨基酸快64800秒钟。(6)以自身能量推动吸收。(7) 100% 被吸收。(8)在人体吸收功能降低时，人体能够被动吸收。(9)具有载体作用，可将人体其它营养载在基体上，输送到人体细胞组织。(10)具有极强的活性和生理功能多样性。因此，人们尝试通过各种水解方法把燕窝蛋白水解变成小的肽，以提高其生物利用度。专利CN92112013. 3，利用单一酶酶解或复合酶酶解方法对燕窝进行处理，到了一 种燕窝营养物。但该方法使用了高浓度的酶，成本很高，而且没有获得具有营养品和化妆品领域希望得到的低分子量的燕窝寡肽产品。[oo19] 专利(；N200510068015．2中利用无花果蛋白酶提取到的燕窝多肽。但该方法只使用了一种酶，效率很低，而且没有公开工艺对燕窝多肽分子量分布的影响。 (；N2200710069423．9利用超声波粉碎和利用碱性蛋白酶水解得到一种化妆品配料。但该方法使用了超声波处理的手段，增加了工序和对设备的投入，而且得到的燕窝多肽分子量主要分布在2000以上，不能满足营养品和化妆品领域的需要。 CN 2008 1006 1920．9利用酶解与膜过滤耦合技术连续制备窄分子量分布燕窝提取物的方法。但该方法使用了膜过滤耦合技术的手段，增加了工序和对设备的投入，而且得到的燕窝多肽分子量主要分布在1000以上，不能满足营养品和化妆品领域的需要。 由于燕窝是雨燕分泌出的胃液与其绒羽的混合物，其具有特殊的理化性质，对水解，特别是利用酶的水解产生难以掌握的影响，一般仍保留分子量超过10000的蛋白质形式。现有技术都没有能够解决通过相对简单和方便的方法和步骤获得燕窝的肽链长度主要为二肽到五肽，分子量主要分布在180—1000[)之间的小分子纳米寡肽。 另外，燕窝中的多糖1燕窝唾液酸1微量元素等也是其重要活性物质，所以，营养和化妆行业中希望获得的燕窝产品仍具有其特有的多糖1燕窝唾液酸1微量元素等。发明内容 本发明提供了一种从燕窝中水解提取得到小分子寡肽的方法，其采用酶解与酸水解结合来水解燕窝，获得含有小分子纳米寡肽的组合物，其特征在于，所述纳米寡肽的分子量主要分布在180—1000])之间，优选的，所述组合物中分子量为180—1000])的纳米寡肽的高斯分布峰面积百分比超过约40％。在本发明的一个方面，所述组合物中分子量为180—10001)的纳米寡肽的高斯分布峰面积百分比是分子量为1000—2000])的多肽的高斯分布峰面积百分比的约5倍，以及是分子量为1000一10000[)的多肽的高斯分布峰面积百分比的约2倍。在本发明的又一个方面，所述组合物中纳米寡肽的分子量具有如下的高斯分布分子量范围比努“X 2200．nm， 数均分子量 重均分子量>工000024．941886720122工0000—50007．07708773805000—30004．09385839473000—20003．4l243324692000一工0008．07工33 1工384，1000—50017．74641668500一工8023．55301325<工80工1．14。 在本发明的一个方面，酶解所采用的酶选自胰蛋白酶1胃蛋白酶1木瓜蛋白酶1碱性蛋白酶1基质金属蛋白酶1中性蛋白酶和菠萝蛋白酶，优选为木瓜蛋白酶。
在本发明的一个方面，酸水解所采用的酸是是盐酸1乙酸和硫酸，优选盐酸。
在本发明的一个方面，水解的顺序是先酶解，然后酸水解。这种水解顺序能够减少很多工艺步骤，大大节省操作的时间，以及节约原料和中间材料。更重要的，采用以上顺序，能够更有效地得到需要的纳米寡肽提取物，即纳米寡肽的分子量主要分布在180—1000[)之间，优选的，所述组合物中分子量为180-1000D的纳米寡肽的高斯分布峰面积百分比超过 约 40%。本发明提供的一种从燕窝中提取得到纳米寡肽的方法包括以下步骤a)将新鲜燕窝清洗干净，与去离子水按1 20 1 50混合，浸泡至燕窝吸水完全。b)将浸泡液升温至90 95°C，保持10 15分钟，使蛋白质变性；c)把浸泡液降温至50 60°C，按燕窝干重的重量 3%重量加入木瓜蛋白酶 (200万u/g)，调节pH至4 6，在50 60°C保温4 6小时；d)用10%盐酸溶液调节pH至1. 5 2，80 90°C保温2 4小时；e)过滤得澄清微黄色液体；f)浓缩，进行喷雾干燥或冷冻干燥得到淡黄色粉末。在本发明的上述方法中，步骤a)中优选水量为至少1 30，最好为1 35 1 40，步骤b)中优选温度为约95°C;时间为至少约12分钟，最好为约15分钟，步骤c)中 优选添加酶的量为燕窝干重的2 2. 5重量％，最优选为子实体干重的2. 5重量优选温 度为约55°C ；优选pH5. 2 5. 5 ；维持时间为5小时。步骤d)中优选pHl. 6. 1. 8 ；优选 温度为约88°C ；维持时间为3小时。本发明出乎意料地发现，由于燕窝溶于水后具有特殊 的理化性质，对水解，特别是利用酶的水解产生难以掌握的影响，因此在酶解反应前的处理 非常重要。本发明的方法中的优选技术方案中采用的使用酶的量和水解时间，以及酸的用 量和水解时间能够更有效地得到需要的小分子寡肽提取物，即纳米寡肽的分子量主要分布 在180-1000D之间，优选的，所述组合物中分子量为180-1000D的纳米寡肽的高斯分布峰面 积百分比超过约40%。本发明提供了一种从燕窝水解提取得到的组合物，所述水解为采用酶解与酸水 解结合来水解燕窝，获得含有小分子纳米寡肽的组合物，其特征在于，所述组合物中含有 燕窝水解得到的小分子的纳米寡肽，所述纳米寡肽的分子量主要分布在180-1000D之间。 在本发明的一个方面，所述组合物中分子量为180-1000D的纳米寡肽的高斯分布峰面积 百分比超过约40%，更优选的，其中分子量为180-1000D的纳米寡肽的高斯分布峰面积百 分比是分子量为1000-2000D的多肽的高斯分布峰面积百分比的约5倍，以及是分子量为 1000-10000D的多肽的高斯分布峰面积百分比的约2倍。在本发明的又一个方面，其中所述
重均分子量
20122 7380 3947 2469 1384 668 325
ο 在本发明的一个方面，其中制备所述组合物采取的方法中，酶解使用的酶选自胰
组合物中肽的分子量具有如下的高斯分布
分子量范围峰面积百分 比(％，λ 220nm)数均分子量>1000024.941886710000 50007.0770875000 30004.0938583000 20003.4124332000 10008.0713311000 50017.74641500 18023.55301<18011.14蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、基质金属蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶， 优选为木瓜蛋白酶。酸水解使用的酸选自盐酸、乙酸和硫酸，优选盐酸。在本发明的又一个 方面，其中制备所述组合物采取的方法中，水解所采用是先用酶水解，再用酸水解的顺序。本发明提供的从燕窝水解提取得到的组合物中还含有多糖类、燕窝唾液酸、微量 元素等。本发明从燕窝中水解得到小分子寡肽组合物，聚集了燕窝各种有效活性成分，以 其小分子的纳米活性，在食品、保健品、化妆品领域应用前景广阔。本发明提供了如前面所述的从燕窝水解提取得到的组合物在制备医药、食品、保 健品、化妆品中的应用。在本发明的一个方面，提供了一种化妆品组合物，其含有如前面所述的从燕窝水 解提取得到的组合物。在本发明的一个方面，提供了一种保健品组合物，其含有如前面所述的从燕窝水 解提取得到的组合物。在本发明的一个方面，提供了一种食品组合物，其含有如前面所述的从燕窝水解 提取得到的组合物。在本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，其含有如前面所述的从燕窝水解 提取得到的组合物。本发明提供的医药、食品、保健品、化妆品组合物的剂型包括为液体或粉末，即口 服液、胶囊、片剂、丸等。本发明可用于食品、保健品、药品、化妆品的添加剂并可以进行工业化生产。本发明利用酶解与酸水解结合的方法成功地将燕窝水解成含有分子量主要分布 在180-1000D之间的纳米寡肽的组合物。本发明提供的燕窝提取物中的多肽具有纳米级活 性，从而深入开发燕窝制品，在营养与化妆品等领域有更好的应用前景。本发明得到的燕窝提取物中同时保留了其它活性成分，如多糖、燕窝唾液酸，铁、 锌、铜等微量元素。本发明提供的燕窝提取物不仅能提供人体生长发育所需要的营养物质， 而且具有独特的生物学功能，能够抗氧化、抗疲劳、抗衰老、抗癌、抗病毒，提高机体免疫力。



本发明提供了一种从燕窝中水解提取得到小分子寡肽的方法，其采用酶解与酸水解结合来水解燕窝，获得含有小分子纳米寡肽的组合物，其特征在于，所述纳米寡肽的分子量主要分布在180-1000D之间，优选的，所述组合物中分子量为180-1000D的纳米寡肽的高斯分布峰面积百分比超过40％。本发明提供的北虫草寡肽提取物中同时保留了其它活性成分，包括多糖、燕窝唾液酸、微量元素等。本发明还涉及从燕窝中提取得到的含有纳米寡肽的组合物在制备医药、保健品、化妆品中的应用。