含有石榴籽油和紫苏籽油的组合物、其制备方法和用途[0002]苏子系唇形科一年生草本植物紫苏[Perilla Frutesccent (L.) Britt.Var.crispa Decene]或白苏[Perilla Frutescent (L.)Britt.]的种子(紫苏子或白苏子，统称苏子)，其含油丰富，榨出的油称苏子油，日本称茬油，茬胡麻油。苏子油色泽淡黄，质澄清，气味清香，a-亚麻酸的含量最高，约为50%~70%，油中n-3系与n_6系脂肪酸的比例合适(约为5:1)。苏子油具有“三高”特性，高碘值，高干性，高不饱和甘油酯。众多学者比较一致的看法:α -亚麻酸是必须脂肪酸，脂肪酸的摄取须均衡，ω-3与ω-6系列脂肪酸应有适当的比率，现在的饮食状况，人们缺少的是α-亚麻酸。越来越多的研究表明，ω-3系列脂肪酸，尤其是长链多不饱和脂肪酸(碳数目大于20)与心血管疾病呈负相关。[0003]紫苏子油，是一种在韩国很普遍的食用油。据报道紫苏子油苏子油中90%多是中性脂类，几乎90%是甘油三酯。紫苏子油苏子油里高含量的α-亚麻酸(53.6%~64%)，因此是相对不稳定，易被氧化的。Witting等认为为防止自动氧化，可以在紫苏子油苏子油加Λα-生育酚。[0004]大量研究表明，无论是空腹或者是餐后状态，η-3系长链脂肪酸都有降低血脂水平的作用。无论是对实 验动物上还是人体实验，众多研究已经表明鱼油可以抑制餐后和空腹状态下的甘油三酯(TG)水平。但是，鱼油因为自身难闻的味道，因此不是广泛使用的一种食用油。值得关注的是，Burdge and Calder称α -亚麻酸是不饱和脂肪酸EPA和DHA化合物的前体，因此紫苏子油在调节肝脂肪酸的氧化上表现出和鱼油相似的生理活性。[0005]众多文献关于η-3系不饱和脂肪酸的研究表明其有降低心率、血压、血小板聚集和甘油三酯水平的作用，因此可以预防冠心病的发生。同时，Parks and Rudel等指出饮食η-3系不饱和脂肪酸可降低胆固醇水平，也使初生态的HDL和载脂蛋白A-1的合成降低。[0006]Hye-Kyeong Kim等研究旨在探讨分别饮食η_3和η_6不饱和脂肪酸对膳食血脂水平和肝膜上的脂肪酸成分的影响，肝膜上的脂肪酸成分可以反映膳食脂肪酸以及其代谢转换。结果表明，与喂食玉米油和牛油的鼠相比，喂食紫苏子油和鱼油的鼠体内甘油三酯(TG)和总胆固醇水平下降，肝TG也有减少。喂食牛油的鼠肝膜上的主要脂肪酸是棕榈酸、硬脂酸和油酸，同样的，玉米油组主要是亚油酸(LA)和花生四烯酸，苏子油组是α-亚麻酸(ALA)和十二碳五烯酸(ΕΡΑ)，鱼油组是棕榈酸和二十二碳六烯酸(DHA)。而且，DHA含量与血脂水平呈负相关，EPA和DHA含量也和肝脂质水平呈负相关，因此本研究表明，与η-6系的亚油酸(LA)相比，η-3系的α -亚麻酸(ALA)更有利于降血脂，η_3系不饱和脂肪酸的降血脂作用部分原因是与肝膜上的EPA和DHA含量有关。紫苏子油将是一种很有效的降低血脂的η-3系不饱和脂肪酸。Williams等研究指出补充适当剂量的n_3系脂肪酸将有利于降低餐后甘油三酯(TG)水平。[0007]然后,Hye-Kyeong Kim等对紫苏子油(n_3系α -亚麻酸的主要来源)可以降低甘油三酯(TG)水平的机制是由于影响肝脂肪生成进行了深入研究。结果表明紫苏子油组和鱼油组肝脏中和血浆中的TG水平降低，紫苏子油组合与鱼油组中肝脂肪生成酶如脂肪酸合成酶(FAS)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和苹果酸酶的活性受到抑制。同时，糖酵解酶、葡糖激酶和丙酮酸激酶和脂肪生成酶一样活性受到抑制。脂肪酸合成酶(FAS)是脂肪生成酶的关键调节酶，与肝脏和血浆中TG水平时呈正相关，而在紫苏子油组中该酶的活性显著性降低。而且，脂肪酸合成酶(FAS)的活性与肝微粒体中EPA和DHA含量呈负相关。因此，紫苏子油(富含α -亚麻酸)的降血脂作用与脂肪酸合成酶(FAS)的活性、以及肝微粒体中EPA和DHA的含量密切相关。[0008]Hu1-Hsiang Chang 等利用 ovalbumin (OVA)-challenged 模型的老鼠，旨在探讨紫苏子油对血脂水平和免疫球蛋白的影响。试验以5%的玉米油(富含亚油酸，18:2n-6系不饱和脂肪酸)为对照组，5%的紫苏子油(富含α -亚麻酸，18: 3η-3系不饱和脂肪酸)和紫苏子油+玉米油为试验组，结果显示:无论是单独的紫苏子油组还是混合组都显著性(Ρ〈0.05)降低了肝组织的相对重量(RTW)，以及血脂水平，包括甘油三酯(-59.6%)、总胆固醇(-34.3%)、HDL 胆固醇(-48.2%)和 LDL 胆固醇(-28.4%)。而且，HDL/总胆固醇(-26.9%)、HDL/LDL率(-29.7%)也显著性的降低。同时，紫苏子油组也明显降低了血清中特异性蛋白IgA水平以及总IgA抗体(Th2抗体)。不好的是，紫苏子油也降低了非特异性血清IgE水平(Th2抗体)，这些结果表明紫苏子油在适当剂量下，通过有效降低血脂水平、特异性蛋白IgGl以及总IgA水平，将对哮喘过敏有一个很好的影响。然而，它不能很好的调节Thl/Th2抗体水平通过B细胞同位交换使得Th2抗体到Thl抗体。
[0009]Kurowska等研究认为富含α -亚麻酸的苏子油对预防动脉粥样硬化和化学诱导癌症有良好的效果。Kim and Choi在研究中认为给雄性Sprague-Dawley大鼠喂食紫苏子油后可减少餐后血脂水平。
[0010]Al-Shawwa等 研究证实高脂血症是诱发哮喘的潜在的一个危险因素。Javadi等利用雄性BALB/cAnNrl大鼠模型，喂食含有12% α -亚麻酸的饲料，发现血浆总胆固醇、HDL-胆固醇和磷脂质都显著降低。Kim and Choi也研究发现紫苏子油可以发挥和鱼油相似的作用，可显著降低雄性Sprague-Dawley大鼠的餐后甘油三酯和总胆固醇水平。
[0011]Leyton等通过对雌性Sprague-Dawley大鼠标记脂肪酸,证实α-亚麻酸比亚油酸有更快的氧化速率。有报道指出富含α-亚麻酸的紫苏子油可以激活肝脏活动以及乙酰辅酶a氧化酶(乙酰-CoA氧化酶)基因的表达，这是紫苏子油可以降低大鼠血浆甘油三酯水平的一个原因。
[0012]Kim HJ等的研究中指出饮食α-亚麻酸可以抑制肝脏中胆固醇浓度。J.E.Lee等通过对载脂蛋白E基因剔除小鼠喂食高胆固醇后，研究了紫苏子油对其肝脏中脂质积聚的作用。结果显示紫苏子油显著降低了甘油三酯和总胆固醇的浓度，因此，紫苏子油通过抑制对肝脏中胆固醇和脂代谢起调节作用的转录因子蛋白质，来发挥一个有效的抑制肝脏中脂质积聚的作用。
[0013]闻脂血症可能会导致神经素乱，例如痴呆。从最近的研究上看来，η-3系不饱和脂肪酸已经被认为可以很好缓解大脑紊乱，通过预防神经细胞氧化损伤。
[0014]J.Ε.Seong等研究了紫苏子油对高胆固醇饮食诱导的神经损伤的影响，结果表明，紫苏子油通过抑制大脑中脂质积聚来控制脑损伤危险因子蛋白的表达，从而对由高脂血症引起的神经细胞损伤达到很好的效果。
[0015]一些研究人员认为高甘油三脂血症是由于肝VLDL-TG的分泌与合成降低。因为肝脏是脂肪酸和TG合成的主要场所，因此抑制肝脂肪生成酶的活性是一个关键因素。
[0016]Young-Hee Pyo等通过HPLC和LC-MS联用技术对韩国日常消费的六类植物油(玉米胚芽油、葡萄籽油、紫苏子油、大豆油、芝麻油、橄榄油)，进行了辅酶QlO和辅酶Q9的含测。结果表明玉米胚芽油中辅酶Q9含量最高(233.7±8.2 μ g/g)，而紫苏子油中辅酶QlO含量最高(84.9±7.6 μ g/g)，而且在芝麻油和紫苏子油中均未检测到辅酶Q9。
[0017]辅酶QlO补充物似乎能保护线粒体膜免受自由基的伤害，这可能有利于对冠心病的治疗。最近的研究已经表明辅酶QlO与生育酚一起作用将有保护生物膜的功能，可以再生α-生育酚，可以防止α-生育酚的促氧化作用。
[0018]由于辅酶QlO本身的高分子量(863.7Da)和难水溶性，因此它的口服吸收是很有限的，如果可以借助脂溶性介质将可以达到一个最大吸收。最近，研究发现辅酶QlO更易溶于椰子油和红花油中，而难溶于猪油和黄油中。
[0019]石榴籽油中含有80%的共轭亚麻酸，石榴酸是共轭亚麻酸的异构体之一，关于石榴籽油的降血脂作用的动物实验结果存在一些争议。Arao等认为石榴籽油可以降低肥胖高脂血症OLETF大鼠中的TAG (三酰基甘油)积累，而Yang等则证实石榴籽油并未改变血清胆固醇浓度。与Arao的研究结果相似的实验也证实口服石榴籽油后可以降低肝脏中TAG的积累，而这种机制认为是石槽酸抑制了 HepG2细胞中TAG的合成。同时Parvin Mirmiran等研究发现在给高脂血症大鼠口服石榴籽油四周后，TAG(三酰基甘油酯)浓度和TAG =HDL-C率显著降低。
[0020]Keisuke Arao等研究了富含石榴酸的石榴籽油对肥胖、高脂血症OLETF大鼠的脂代谢的影响，结果显示石榴酸显著降低了肝脏中甘油三酯水平，而肝脂肪酸合成酶和脂肪酸氧化没有受到影响。同时，在肥胖、高脂血症OLETF大鼠中，血清甘油三酯中的多不饱和脂肪酸水平很高，而石榴酸也显著降低了 OLETF大鼠中的多不饱和脂肪酸水平。因此，石榴酸可以体内抑制Λ -9去饱和酶的活性，对缓解肝脏中甘油三酯积累起到重要作用。
[0021]紫苏子油(富含α-亚麻酸)的降血脂作用一方面与脂肪酸合成酶(FAS)的活性、以及肝微粒体中EPA和DHA的含量密切相关；另一方面可以激活肝脏活动以及乙酰辅酶a氧化酶(乙酰-CoA氧化酶)基因的表达。
[0022]石榴酸可以体内抑制Λ -9去饱和酶的活性，从而降低了高脂血症OLETF大鼠中血清甘油三酯中的多不饱和脂肪酸水平，而未影响到脂肪酸合成酶的活性。也有研究说石榴酸抑制了 IfepG2细胞中TAG (三酰基甘油)的合成。
[0023]目前，将石榴籽油和紫苏籽油联合使用的情况还未见报道。


[0024]本发明的目的在于提供一种含石榴籽油和紫苏籽油的组合物；本发明的另一个目的在于提供一种所述组合物的制备方法；本发明的再一个目的在于提供一种所述组合物在制备糖尿病的药物中的用途。
[0025]为实现上述目的， 本发明采取的技术方案为:一种组合物，所述组合物包含紫苏籽油和石榴籽油。
[0026]本申请发明人认为紫苏籽油和石榴籽油在降血脂的机制上，可以有互补的地方，理由如下:
[0027](I)降血脂机制不同，可以互补；
[0028](2)紫苏籽油还可以预防高胆固醇诱发的大脑紊乱，例如痴呆、哮喘；
[0029](3)紫苏籽油中含有高含量的辅酶Qltl，难吸收，如若溶于石榴籽油中可能会达到最大吸收；
[0030](4)紫苏籽油中的α-亚麻酸易自动氧化，与α-生育酚合用可以防止氧化；研究证实石榴籽油中含有生育酚。
[0031]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述组合物中，石榴籽油和紫苏籽油的质量比为1:1。
[0032]本发明的另一个目的在于提供一种所述组合物的制备方法，为实现此目的，本发明采取的技术方案为:所述组合物的制备方法包括以下步骤:
[0033](Ia)从石榴籽中提取得到石榴籽油，从紫苏籽中提取得到紫苏籽油；
[0034](2a)将步骤(Ia)中得到的石榴籽油和紫苏籽油混合均匀，即得组合物；
[0035]或者:
[0036](Ib)将石榴籽 和紫苏籽混合均匀后，粉碎，得提取原料；
[0037](2b)从步骤(Ib)得到提取原料中提取石榴籽油和紫苏籽油的混合物，即得组合物。本申请发明人发明将石榴籽与紫苏籽混合萃取，可以提高产油率，缩短萃取时间。
[0038]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述步骤(Ib)中，石榴籽和紫苏籽的重量比为石槽籽:紫苏籽=1:0.5~1:2。
[0039]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述步骤(2b)中采用超临界流体萃取从提取原料中提取石榴籽油和紫苏籽油的混合物。作为本发明所述组合物的更优选实施方式，所述步骤(2b)中超临界流体萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为35~50°C，萃取时间为0.5~2.5h ;分离釜I的分离压力为10~12Mpa，分离釜I的分离温度为50°C ;分罔签II的分尚压力为5Mpa,分尚爸II的分尚温度为35°C。
[0040]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述步骤(Ib)中石榴籽和紫苏籽的重量比为石榴籽:紫苏籽=1:1，所述步骤(2b)中超临界流体萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为40°C，萃取时间为2h ;分离釜I的分离压力为lOMpa，分离釜I的分离温度为500C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为35°C。本申请发明人经过大量研究发现，当步骤(Ib)中石榴籽和紫苏籽的重量比为石榴籽:紫苏籽=1:1时，上述萃取条件为优选，其产油率高，萃取时间短，然后又考察了萃取温度对于萃取产油率的影响，当萃取温度为40°C时，其总产油率最高。
[0041]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述步骤(Ib)中石榴籽和紫苏籽的重量比为石榴籽:紫苏籽=1:2，所述步骤(2b)中超临界流体萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为40°C,萃取时间为2.5h ?，分离签I的分离压力为12Mpa,分离爸I的分离温度为500C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为35°C。本申请发明人经过大量研究发现，当步骤(Ib)中石 榴 籽和紫苏籽的重量比为石榴籽:紫苏籽=1:2时，上述萃取条件为优选，其产油率高，萃取时间短，然后又考察了萃取温度对于萃取产油率的影响，当萃取温度为40°C时，其总产油率最高。
[0042]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述步骤(Ib)中石榴籽和紫苏籽的重量比为石榴籽:紫苏籽=1:0.5，所述步骤(2b)中超临界流体萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为40°C，萃取时间为2.5h ;分离釜I的分离压力为12Mpa，分离釜I的分尚温度为50°C ;分尚爸II的分尚压力为5Mpa,分尚爸II的分尚温度为35°C。本申请发明人经过大量研究发现，当步骤(Ib)中石榴籽和紫苏籽的重量比为石榴籽:紫苏籽=1:0.5时，上述萃取条件为优选，其产油率高，萃取时间短，然后又考察了萃取温度对于萃取产油率的影响，当萃取温度为40°C时，其总产油率最高。
[0043]作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述步骤(Ib)中，，将石榴籽和紫苏籽混合均匀后，粉碎成40目，得提取原料。
[0044]另外，本申请发明人还研究了石榴籽油、紫苏籽油及其混合油的含量测定方法。通过查阅文献发现，脂肪酸类的测定通常都是使用GC法、GC-MS法测定，少有HPLC法。同时石榴籽油从未发现有HPLC法进行测定其指标性成分石榴酸含量。脂肪酸为长链烃类，在200-400nm没有吸收，无法直接用紫外检测器进行检测，所以采用柱前衍生化方法，使脂肪酸带上一个强发色团，使其在200-400nm有最大吸收。本申请发明人采用以ω-溴代苯乙酮为衍生化试剂，三乙醇胺为相转移催化剂，对石榴籽油、紫苏籽油、石榴籽油:紫苏籽油=1:1共提混合油进行含量测定。对色谱条件的考察中，分别选择了检测波长、流动相。经过大量研究，最终确定α -亚麻酸的检测波长优选为245nm，石榴酸的检测波长优选为272nm。考察流动相乙腈-/K、甲醇-水和甲醇-乙腈-水对脂肪酸衍生物的分离效果，最后发现在甲醇-乙腈-水=68.5:20:11.5条件下均对α -亚麻酸、石榴酸有良好的分离。石榴油样品中主要含有石榴酸成分，而不含有α-亚麻酸，而紫苏油中主要含有α-亚麻酸成分，不含石榴酸成分，因而可以用石榴酸和α -亚麻酸来作为各自指标性成分，具有专属性，从而用来控制质量。通过计算可得石榴籽油样品中石榴酸含量为55.16%，紫苏籽油样品中α-亚麻酸含量为60.3%。
[0045]本发明的再一目的在于提供一种上述所述组合物在制备治疗糖尿病、高血脂的药物中的用途。本发明所述组合物在用于制备治疗糖尿病、高血脂的药物时，所述组合物可结合药学上可接受的辅料，制备成不同的剂型。作为本发明所述组合物在制备治疗糖尿病、高血脂的药物中的用途的优选实施方式，所述药物为软胶囊、液体胶囊或滴丸。即本发明所述组合物制备成药物时，其制备的剂型优选但不限于软胶囊、液体胶囊和滴丸。
[0046]本发明的有益效果在于:本发明提供了一种新的组合物，该组合物包含石榴籽油与紫苏籽油，这也是首次将两者联合使用，两者在作用机制上互补，并且联合使用可以稳定其活性成分。本发明提供的所述组合物的制备方法，工艺简单，产油率高，在制备过程中还能保持活性成分的稳定性。本发明提供的所述组合物在制备糖尿病药物中的用途，具有显著的降糖效果，并且还有降血脂、总胆红素和尿酸作用，其副作用小，为糖尿病、高血脂的临床治疗提供更多高效、安 全的备选组合药物，以满足临床多方面的需求。



[0047]图1为给药6周后禁食12h各组小鼠血糖Glu变化；
[0048]图2为给药6周后禁食12h各组小鼠胆固醇TC变化；[0049]图3为给药6周后禁食12h各组小鼠甘油三酯TG变化；
[0050]图4为给药9周后禁食12h各组小鼠血糖Glu变化；
[0051]图5为给药9周后禁食12h各组小鼠胆固醇TC变化；
[0052]图6为给药9周后禁食12h各组小鼠甘油三酯TG变化；
[0053]图7为给药9周后禁食12h各组小鼠LDL-C变化；
[0054]图8为给药9周后禁食12h各组小鼠总胆红素T-Bil变化；
[0055]图9为给药9周后禁食12h各组小鼠尿酸UA变化；
[0056]图10为给药9周后各组小鼠肝脏Ap0-BlOO含量变化；
[0057]图11为给药9周后各组小鼠肝脏FAS含量变化；
[0058]图12为注射STZ前后小鼠体重变化；
[0059]图13为注射STZ后小鼠平均进食量；
[0060]图14为注射STZ前后小鼠血糖变化；
[0061]图15为给药11周正常组与模型组小鼠体重变化；
[0062]图16为正常组与模型组小鼠各阶段体重变化；
[0063]图17为给药后小鼠进食量变化；
[0064]图18为给药后小鼠进热量值变化；
[0065]图19为给药后正常组与模型组小鼠的白色脂肪对比；
[0066]图20为给药后正常组与模型组小鼠的棕色脂肪对比；
[0067]图21为给药8周后禁食12h各组小鼠血糖Glu变化；
[0068]图22为给药8周后禁食12h各组小鼠胆固醇TC变化；
[0069]图23为给药8周后禁食12h各组小鼠甘油三酯TG变化；
[0070]图24为口服葡萄糖耐量试验血糖水平的比较；
[0071]图25为给药11周后非禁食下各组小鼠血糖Glu变化；
[0072]图26为给药11周后非禁食下各组小鼠胆固醇TC变化；
[0073]图27为给药11周后非禁食下各组小鼠甘油三酯TG变化；
[0074]图28为给药8周后各组小鼠肝脏Ap0-BlOO含量变化；
[0075]图29为给药8周后各组小鼠肝脏FAS含量变化；
[0076]图30为给药16周后禁食12h各组小鼠血糖Glu变化；
[0077]图31为给药16周后禁食12h各组小鼠胆固醇TC变化；
[0078]图32为给药16周后禁食12h各组小鼠甘油三酯TG变化；
[0079]图33为给药17周后非禁食下各组小鼠血糖Glu变化；
[0080]图34为给药17周后非禁食下各组小鼠胆固醇TC变化；
[0081]图35为给药17周后非禁食下各组小鼠甘油三酯TG变化；
[0082]图36为给药17周后非禁食下各组小鼠低密度脂蛋白LDL-C变化；
[0083]图37为给药17周后非禁食下各组小鼠尿酸UA变化；
[0084]图38为给药17周后非禁食下各组小鼠总胆红素T-Bil变化；
[0085]图39为给药16周后禁食12h各组小鼠胰岛素Ins变化；
[0086]图40为给药16周后各组小鼠肝脏Ap0-BlOO含量变化；
[0087] 图41为给药16周后各组小鼠肝脏FAS含量变化。
[0088]为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0089]实施例1
[0090]本发明所述组合物的一种实施例，本实施例所述组合物采用以下方法制备:分别称取石榴籽和紫苏籽，采用超临界萃取从石榴籽中提取石榴籽油，超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为45°C，萃取时间为Ih ;分离釜I的分离压力为12Mpa，分离釜I的分离温度为50°C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为35°C ;采用超临界萃取从紫苏籽中提取紫苏籽油，其超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为40°C，萃取时间为3h ;分离釜I的分离压力为12Mpa，分离釜I的分离温度为50°C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为35°C ;将得到的石榴籽油和紫苏籽油按照质量比为1:1混合均匀，即得组合物。
[0091]实施例2
[0092]本发明所述组合物的一种实施例，本实施例所述组合物采用以下方法制备:将石榴籽粗粉后，与紫苏籽按重量比石榴籽:紫苏籽=1:1混合均匀粉碎成40目细粉，混匀之后经低温冷冻，备用；然后通过超临界萃取收集分离釜I和分离釜II中的油料，其超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa,萃取温度为40°C,萃取时间为2h ;分离爸I的分离压力为lOMpa，分离釜I的分离温度为50°C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为35。。。 [0093]实施例3
[0094]本发明所述组合物的一种实施例，本实施例所述组合物采用以下方法制备:将石榴籽粗粉后，与紫苏籽按重量比石榴籽:紫苏籽=1:2混合均匀粉碎成40目细粉，混匀之后经低温冷冻，备用；然后通过超临界萃取收集分离釜I和分离釜II中的油料，其超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa，萃取温度为40°C，萃取时间为2.5h ;分离釜I的分离压力为12Mpa，分离釜I的分离温度为50°C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为
35。。。
[0095]实施例4
[0096]本发明所述组合物的一种实施例，本实施例所述组合物采用以下方法制备:将石榴籽粗粉后，与紫苏籽按重量比石榴籽:紫苏籽=1:0.5混合均匀粉碎成40目细粉，混匀之后经低温冷冻，备用；然后通过超临界萃取收集分离釜I和分离釜II中的油料，所述超临界萃取条件为:萃取压力为29-30Mpa,萃取温度为40°C,萃取时间为2.5h ?，分离签I的分离压力为12Mpa，分离釜I的分离温度为50°C ;分离釜II的分离压力为5Mpa，分离釜II的分离温度为35°C。
[0097]实施例5
[0098]本发明所述组合物对2型糖尿病小鼠的影响
[0099]本实施例中B提取物是指石榴籽油，C提取物是指紫苏籽油，B+C提取物(自调)是指先分别从石榴籽中提取出石榴籽油和从紫苏籽中提取出紫苏籽油，然后再将提取的石榴籽油和紫苏籽油混合得到的。[0100]I实验材料及方法
[0101]1.1 药物
[0102]B提取物、C提取物，B+C提取物(自调)，2L超临界二氧化碳萃取(华安超临界萃取设备有限公司)制备。
[0103]1.2 分组
[0104]小鼠适应性饲养3周，禁食12h，乙醚麻醉，眼底静脉丛取血，肝素抗凝，4°C离心(3000r/min, 15min)分离血浆，测定空腹血糖(FPG)，TC，TG作为该批小鼠的基础生化值。然后根据体重、TG、FPG、TC随机分组，每组10只，分别为正常组、模型组、二甲双胍组、B提取物组、C提取物组、B+C提取物(自调)高剂量组、B+C提取物(自调)低剂量组，给药剂量分别为:二甲双胍为，B提取物为720mg/kg，C提取物为1050mg/kg，B+C高剂量为1780mg/kg，B+C低剂量为890mg/kg ;其中，B+C提取物(自调)高剂量组、B+C提取物(自调)低剂量组中，石榴籽油和紫苏籽油的质量比为1:1。正常组给予基础饲料，其他各组动物每天给予高脂饲料，直至实验结束。同时各组动物按10mL/Kg体重灌胃给药，正常对照组与模型对照组给予等容积混悬液(0.5%CMC-Na)，其他给药组给予相应药液，I次/天。给药8周末，禁食12h，正常组腹腔注射柠檬酸缓冲液，其他组腹腔注射STZ，剂量均为120mg/Kg。每周记录两次小鼠体重，测定每周前三天的进食量。
[0105]1.3生化指标的测定
[0106]给药6周末，禁食12h，乙醚麻醉，眼底静脉丛取血，肝素抗凝，4°C离心(3000r/min, 15min)分取血浆，测定Glu，TC，TG ;给药9周末，禁食12h，乙醚麻醉，眼底静脉丛取血，肝素抗凝，4°C离心(3000r/min，15min)分取血浆，测定Glu，TC，TG, LDL-C、总胆红素、尿酸；实验结束后，小鼠麻醉眼球取血，备用。然后脱颈处死，取心、肝、肺、附睾脂肪组织、肌肉等脏器组织，称重，放置冻存管-70°C下保存。另取约0.2g肝脏，按1:5 (W/V)比例加入PBS(pH7.4)至冰上,用匀衆器充分匀衆,4°C离心(3000rpm/min, 15min),分离上清液,采用双抗体夹心法测定小鼠肝脏中脂肪酸合成酶(FAS)、载脂蛋白BlOO (Apo-BlOO)的含量，具体操作步骤按照Elisa试剂盒说明书。
[0107]2实验结果及分析
[0108]2.1糖尿病C57BL/6N小鼠模型构建
[0109]高脂喂养6周末，模型组小鼠禁食12h后的空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)水平均高于正常组小鼠，且差异有显著性(P〈0.01，P〈0.05) ；9周末，即腹腔注射链脲佐菌素(STZ)—周后，模型组小鼠禁食12h后的空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)同样均高于正常组小鼠，且差异有显著性(P〈0.01，P〈0.05)。表明糖尿病小鼠模型造模成功。 见表1
[0110]表1糖尿病C57BL/6N小鼠模型复制结果mmol.L—1，n=10)
[0111]TablelThe results in FPG TC TG levels of U57BL/6N diabetic mice
[0112]