专利名称：常温稳定的疫苗组合物及其制备方法附图1是鸡新城疫(ND，Lasota株)疫苗组合物的常温保存效价检测结果；附图2是鸡新城疫ND抗体消长曲线图。与现有技术相比，本发明的疫苗组合物具有如下显著优点和明显效果 1.本发明的常温稳定疫苗组合物采用气流喷雾制粒法，完全取代冻干工艺，可将混合、制粒、干燥等工艺在极短时间内同时完成，大大节约工序和时间，生产效率高，制造成本低，在30-40℃条件下完成，疫苗的活性几乎无损失；2.本发明的常温稳定疫苗组合物采用气流喷雾干燥制粒法处理后，已经微胶囊化，可以在摄氏25℃条件下保存一年以上还有正常抗原效价，运输和储存过程不需要冷藏，使用方便，降低成本，同时没有不良反应。下面用实施例对本发明作进一步的说明。应该理解的是，本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数都是重量百分数。实施例1鸡传染性支气管炎(IB，H120)活疫苗组合物其物料配方为甘露醇46％(核心辅料)明胶29％丙二醇2％海藻糖5％葡聚糖5％卵白蛋白2％甘氨酸4％磷酸氢二钠1.5％磷酸二氢钠0.5％。氧化钠0.5％四乙酸二乙胺二钠0.5％每克组合物含鸡H120疫苗100羽份，占组合物重量的2％，水分的重量比为2％。制备方法(1)按比例称取并混合除核心材料甘露醇之外的上述各辅料，加入适量水充分混合均匀，制成包衣液；(2)据疫苗原液的比活性和成品的单位活性要求，加入占组合物重量的2％的上述疫苗原液到包衣液中，充分混合均匀；
(3)在80℃通过使用气流喷雾干燥设备将作为核心材料的甘露醇处于流化状态；(4)以100m3/小时的喷射率将包衣液和疫苗的混合液均匀喷射到流化状态的甘露醇表面；(5)在33℃干燥处理60分钟，制成疫苗微颗粒。
实施例2鸡传染性法氏囊炎(IBD NF8株)活疫苗组合物其物料配方为甘露醇53％(核心辅料)明胶20％牛血清白蛋白2％胰蛋白胨1％维生素C2％丙二醇3％海藻糖3％葡聚糖6％卵白蛋白2％磷酸二氢钠1％磷酸氢二钠1％磷酸二氢钾1％每克组合物含鸡法氏囊疫苗500羽份，占组合物重量的4％，水分比重为1％制备方法(1)按比例称取并混合除核心材料甘露醇之外的上述各辅料，加入适量水充分混合均匀，制成包衣液；(2)据疫苗原液的比活性和成品的单位活性要求，加入占组合物重量的4％的上述疫苗原液到包衣液中，充分混合均匀；(3)在50℃通过使用气流喷雾干燥设备将作为核心材料的甘露醇处于流化状态；(4)以200m3/小时的喷射率将包衣液和疫苗的混合液均匀喷射到流化状态的甘露醇表面；(5)在40℃干燥处理25分钟，制成疫苗微颗粒。
实施例3鸡新城疫(ND，Lasota株)活疫苗组合物其物料配方为甘露醇50％(核心辅料)明胶19％丙二醇5％海藻糖7％葡聚糖8％甘氨酸2％磷酸氢二钠3％磷酸二氢钠0.5％。
卵白蛋白1.5％氯化钠0.5％四乙酸二乙胺二钠0.5％每克组合物含鸡新城疫(ND，Lasota株)疫苗100羽份，占组合物重量百分比的0.5％，水分的重量比为2.5％。
制备方法(1)按比例称取并混合除核心材料甘露醇之外的上述各辅料，加入适量水充分混合均匀，制成包衣液；(2)据疫苗原液的比活性和成品的单位活性要求，加入占组合物重量的0.5％的上述疫苗原液到包衣液中，充分混合均匀；(3)在80℃通过使用气流喷雾干燥设备将作为核心材料的甘露醇处于流化状态；(4)以160m3/小时的喷射率将包衣液和疫苗的混合液均匀喷射到流化状态的甘露醇表面；(5)在35℃干燥处理10分钟，制成疫苗微颗粒。
实施例4本发明实施例3配制的鸡新城疫(ND，Lasota株)活疫苗组合物的活病毒含量(毒价EID50/2g)测定及稳定性研究结果将本发明实施例3配制的鸡新城疫(ND，Lasota株)疫苗组合物实验样品定量分装于无菌玻璃瓶内，分别置于4℃、25℃、35℃下存放，并测定不同保存时间各批样品活病毒含量(EID50/2g)。样品检测严格按照《兽用生物制品规程》(2000年版)进行。结果如下(见表1和附图1)
表1实施例3的鸡新城疫(ND，Lasota株)活疫苗组合物的活病毒含量测定结果

结果表明本发明的微囊工艺对疫苗抗原基本无损伤，样品初始效价接近疫苗抗原原液效价。试验样品稳定，试验组样品在35℃下存放一周及25℃存放一个月EID50下降滴度均小于冻干对照品。
实施例5 动物接种本发明实施例3的鸡新城疫(ND，Lasota株)活疫苗组合物后的抗体检测实验将4日龄SPF雏鸡30只分成三组，每组10只，第一组接种本发明实施例3的鸡新城疫(ND Lasota株)疫苗组合物，；第二组接种冻干疫苗(中牧股份南京药械厂成品809-2批)，第三组作空白对照。试验组和对照组接种的抗原量不同，冻干疫苗0.1ml疫苗中抗原含量为每羽份106.0EID50，而试验组疫苗溶解后0.1ml疫苗中抗原含量为0.1羽份(105.0EID50)，仅为冻干苗的1/10。
三组试验用鸡在同等条件下隔离饲养、观察，并分别于接种后7天、14天、21天、28天和35天采血，分离血清，以固定病毒稀释血清法测HI抗体。(见表2和附图2)表2 实验样品接种鸡只后的HI抗体测定

结果表明，在试验组接种剂量仅为对照组的1/10的情况下，在接种后7天即能测到抗体，且和冻干对照组相比无明显差别，其抗体消长趋势与冻干对照组基本一致。接种鸡只正常，无任何不良反应。


本发明涉及一组常温稳定的疫苗组合物及其制备方法，本发明疫苗组合物的特征在于疫苗和除核心辅料之外的其他辅料的混合物通过气流喷雾干燥被微胶囊化固定在核心辅料上。本发明的疫苗组合物在摄氏25℃条件下保存一年以上还能保持正常抗原效价，是一组常温稳定的疫苗组合物。本发明的常温稳定疫苗组合物使用方便，没有不良反应，同时节约了生产、运输与储存成本，具有显著的经济意义。