专利名称：一种检测蜂群抗白垩病能力的方法随着社会的进步，蜜蜂对人类的价值越来越被重视，其授粉作用的不可替代性及相应蜂产品的营养价值也使得人们越来越关注养蜂业的发展，病虫害一直是威胁养蜂业发展的最大问题。利用抗生素等化学药品在一定程度上控制住疾病，但长期使用却削弱了蜜蜂的抵抗力，增强病原的耐药性，迫使人们不得不加大使用剂量，如此形成恶性循环，危害了环境，也造成蜂产品药物残留。随着人们对食品质量要求的不断提高及环保意识的不断增强，不使用杀虫剂和抗生素的自然态抵御蜜蜂病虫害的方法越来越受到人们重视。蜜蜂白垩病是由蜜蜂球囊菌iAscosphaera apis)寄生而引起蜜蜂幼虫死亡的真菌性传染病，蜂群内的传播主要是蜜蜂球囊菌孢子，孢子的抗性极强，至少能在自然条件下存活35年。菌丝体也能直接侵染幼虫。白垩病发病季节在江浙一带一般在2-5月份。该病最早由Priss博士在德国发现，1963年以前主要发生在欧洲各国。1981年在第观届国际养蜂大会上，将这种蜜蜂真菌病正式定名为蜜蜂球囊菌病——白垩病。1985年在日本召开的世界养蜂大会特将蜜蜂白垩病列为学术会议的主要议题。后来，随着蜜蜂原种的引进， 才使此病传至我国。自从发现了这种蜜蜂疾病以后，世界各国的科研工作者做了大量的研究工作，研究的方面包括病原的生物学特性，最适培养条件，该病的发病情况，流行规律， 病理组织学，病情的诊断方式以及药物防治等各个方面。特别是近几年，随着分子生物学的发展，一些现代化的研究手段也应用于了这种疾病的研究。目前，防治蜜蜂白垩病主要措施包括(1)用干净的蜂箱、巢脾换出病群的箱、重病脾，用福尔马林加高锰酸钾密闭熏蒸消毒；严重的病脾应考虑烧毁；(2)病群于晴天用 0. 5%的高锰酸钾喷雾做成年蜂体表消毒，喷至成蜂体表雾湿状为止，每天一次，连续3天； (3)用山梨酸和丙酸钠掺入花粉中饲喂病群，连续7天；用二性霉素-B掺入花粉中饲喂病群(2g / 60框蜂)，连续7天；用左旋咪唑6片加制霉菌素2片碾粉掺入花粉饲喂病群，(治疗20框蜂)，连续7天；用甲苯咪唑2片碾粉掺入花粉饲喂病群(治20框蜂)，连续7天；均可获得较好的疗效，且不伤蜂；(4)蜂群注意通风降湿，以含水量22%以下的蜂蜜作饲料， 并注意及早控制其他病害，春季做好保温，使蜂箱内维持对蜜蜂发育有利的温度。蜜蜂白垩病于上世纪九十年代在江浙一带发生后迅速蔓延到全国各地，严重危害了我国养蜂业，广大蜂农除了采用费工费钱并有一定副作用的物理和化学的方法控制白垩病的发生外，也迫切希望能够选育出既高产又能抗白垩病的蜂种，有研究表明，不同品种、 品系的蜜蜂，甚至同一品种、品系内的不同蜂群，其抗白垩病能力、工蜂发现病虫时间的早、 晚及清除病虫的能力等特征都存在着遗传特性上的差异，而这些特征又都和蜂群的抗白垩病能力密切相关。目前，选育抗白垩病蜂种主要通过检测蜂群的白垩病直接发生率来判断， 蜂群的白垩病直接发生率通过检测蜂群巢门口和蜂群内子脾上的白垩病死尸的个数来计算，非常麻烦和费力，而且在白垩病的非发病季节无法判断蜂群的抗白垩病能力。
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种检测蜂群抗白垩病能力的方法， 该方法利用蜜蜂清理死亡幼虫或蛹的生物学特性，通过人为处理封盖子脾致死，放回蜂群后检测蜜蜂对死亡封盖子的清除率，以判断该蜂群的抗白垩病能力。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种检测蜂群抗白垩病能力的方法，包括如下步骤(1)从被检测蜂群内切割一块;T5X6 8cm封盖子脾，做好封盖子脾与对应蜂群的编号，把切下的封盖子脾在室温下用水浸泡20-30h或在-10至-86°C冰箱内冷冻5-30h，记录经水泡或冷冻处理的封盖子脾的封盖子总数，放回原蜂群原位；(2)过M-4 !，记录被清除的封盖子个数；(3)计算被检测蜂群对水泡或冷冻处理封盖子的清除率，清除率等于被清除的封盖子个数与封盖子总数的比值，清除率高的蜂群的抗白垩病能力强。进一步地，蜂群内的工蜂幼虫成长到6日末，由工蜂将其巢房口封上蜡盖，封盖巢房内的幼虫吐丝作茧，然后化蛹，封盖的幼虫和蛹统称为封盖子，有大部分封盖子的巢脾叫做封盖子脾。本发明与现有技术相比，具有的有益的效果是1.本发明是通过检测蜂群对死亡封盖子的清理率来判断蜂群的抗白垩病能力，精确性和科学性强。2.本发明可以在白垩病非发生季节检测蜂群的抗白垩病能力，克服以往根据蜂群白垩病发生率高低来选择抗白垩病蜂种，提高选育效率，加快育种进程。3.本发明可以检测蜂群的清除率，从而预测种用蜂王和雄蜂的抗白垩病能力，提高优良蜂王选留和雄蜂配种的准确性，大大提高蜜蜂抗白垩病育种效率。4.本发明检测蜂群的抗白垩病能力，过程简单，成本较低，适于蜜蜂育种过程中大面积采用。

图1是Mh内不同方法对死亡封盖子的清除率示意图； 图2是48h内蜜蜂对死亡封盖子的清除率示意图。

1、从被检测蜂群内切割一块;Γ5 X 6 8cm封盖子脾，做好封盖子脾与对应蜂群的编号， 把切下的封盖子脾在室温下用水浸泡20-30h或在-10至-86°C冰箱内冷冻5-30h，记录经水泡或冷冻处理的封盖子脾的封盖子总数，放回原蜂群原位。2、过M-4 !，记录被清除的封盖子个数。3、计算被检测蜂群对水泡或冷冻处理封盖子的清除率，清除率等于被清除的封盖子个数与封盖子总数的比值，清除率高的蜂群的抗白垩病能力强。上述的封盖子和封盖子脾是指蜂群内的工蜂幼虫成长到6日末，由工蜂将其巢房口封上蜡盖，封盖巢房内的幼虫吐丝作茧，然后化蛹，封盖的幼虫和蛹统称为封盖子，有大部分封盖子的巢脾叫做封盖子脾。本发明可以判断被检测蜂群的抗白垩病能力强弱，并用于培育具有抗白垩病性状的新蜂种。实施例1 白垩病患群与健康蜂群对死亡封盖子的清除率检测
在浙江大学华家池校区实验蜂场，选择群势基本一致的三群患白垩病蜂群(实验组)和三群健康蜂群(对照组)，每群用特制的巢脾切块机切出四块6. 5*3. 5cm的小封盖子脾，分别在经水泡Mh、-20°C冰冻Mh、液氮、针扎处理后，放回原群，每隔24h观察记录一次封盖子的剩余数目。连续观察三次。采用生统t检验来统计分析不同处理方法的差异显著性。实验组与对照组在Mh、48h、72h内蜜蜂对死亡封盖子的清理百分比。其中，分析实验处理后共三次观察统计得到的封盖子剩余量发现实验处理后24h和48h，实验组与对照组蜂群对经水泡处理的封盖子清理能力存在显著差异，对冰冻处理后的封盖子清理能力呈差异显著，而对液氮和针扎处理的封盖子并无显著差异(见图1、2);实验处理后72h，蜂群对四种处理后的封盖子清除效果无显著差异。由以上结果可知，采用水泡或冰冻24h处理封盖子脾在24h或48小时内统计蜜蜂对死亡封盖子的清除率的方法可以判断蜂群的抗白垩病能力，并用于培育具有抗白垩病性状的新蜂种。


本发明公开了一种检测蜂群抗白垩病能力的方法，该方法是从被检测蜂群内切割一块封盖子脾，水泡或冰冻处理后放回原蜂群原位，过24h-48小时计算被检测蜂群对水泡或冰冻处理后封盖子的清除率，清除率高的蜂群的抗白垩病能力强，据此可以筛选出具有抗白垩病能力的蜂群，并用于培育具有抗白垩病性状的新蜂种。该方法具有重要的应用价值，通过检测蜂群对水泡或冰冻处理的封盖子的清除率，预测种用蜂王或雄蜂的抗白垩病性能，提高优良抗白垩病蜂王选留和雄蜂配种的准确性，大大提高蜜蜂抗白垩病育种的效率。