细菌感染早期诊断的活体检测探针的制作方法【技术领域】，具体涉及细菌感染的早期诊断的活体检测探针的合成和应用领域，涉及可以特异性靶向到多种细菌的可示踪半乳糖化近红外荧光探针的合成和应用。[0002]据世界卫生组织统计，世界上25%的死亡是由细菌感染性疾病引起的(Journalof Clinical Investigation, 2003，111 (9): 1265-1273)。尽管抗生素治疗对杀伤病原菌有良好效果，但同时会使机体免疫力下降，诱发二重感染、毒副反应等(中国生化药物杂志，2012，33 (3): 326-328)。更严重的是，目前无论是否是细菌性炎症，都用抗生素，不仅耽误疾病的治疗，还诱导产生大量耐药细菌。到本世纪初全世界每年死于细菌感染的人数上升到2000万，大部分人死于耐药菌带来的用药困难。美国疾病预防控制中心(CDC)报道，美国超过一半抗生素处方药都是不必要的，而中国抗生素使用量是欧美的三四倍，50%中国人生病或与耐药细菌有关。世卫组织多次提醒中国，如再不遏制抗生素滥用，将不仅是中国的灾难，可能引发全人类的灾难。当人类面临传染病的时候，可能出现无药可用的危险状况(扬子晚报，A17，2013，9，20)。因此，鉴别细菌引起的感染是抑制抗生素滥用的最直接有效的方法。目前细菌感染的诊断仍处在晚期，只有当出现表征的时候才能确诊。诊断不及时导致治疗难上加难，抗菌治疗应根据病原体选择高针对性和敏感性的诊断和治疗方法，即靶向诊断和治疗。[0003]FDG/PET 法(The Journal of Nuclear Medicine.2001，42 (9): 1412-1417 ;Annals of Nuclear Medicine.1996，10 (2): 185-191)是早期诊断细菌感染性疾病的方法之一，但它最大的缺点是特异性差，无法靶向诊断。而In-WBC法标记白细胞(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.2012, 22 (8): 2833-2836),不足之处在于无法进行体内诊断，必须从体内提取白细胞。可见，传统诊断细菌感染的方法既不高效也不方便。针对这一大难题，各国科学家研发了各种细菌感染显像剂。[0004]目前，细菌感染性疾病主要利用核医学及光学方法进行显像定位(同位素，2010，23(3):186-192 ;Current Pharmaceutical Design, 2012(18):1098-1106)。如cFLFLFK-PEG-DOTA经64Cu标记后结合特异性白细胞，通过PET成像可以准确检测出肺炎(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.2007, 17 (24): 6876-6878)。但核医学显像制备过程复杂、耗时，还存在生物安全性问题。光学显像通过荧光染料标记靶向细菌的物质，构建光学探针。可在细菌感染部位高度聚集，通过检测荧光信号，确定细菌感染部位(药物生物技术，2006, 13(4): 306-309)。如使用近红外荧光基团Cy7标记cFLFLF，用于诊断耳炎(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.2010，20 (12):3515-3517)。[0005]目前虽然开发了众多 的显像剂检测细菌，但无法检测到活体内少量的细菌，不能区分细菌感染和其他炎症，限制了其临床应用。[0006]近红外成像方法(NIR optical imaging)使用650_900nm附近的近红外突光，能进行深层组织成像且自发荧光背景较低，对癌症早期诊断表现出巨大潜力(Analytical Chemistry, 2013，85(4):2529-2535.)。荧光探针与成像系统配合使用可获得肿瘤的大小及定位等信息，为癌症的诊断及治疗提供有效信息(东南大学学报，2011，30(2):380-383.)。总的来说，近红外成像有在体、无创、实时、无放射性、精细显像等优点。[0007]目前国内外尚无利用半乳糖化近红外荧光探针与麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding proteins, MBPs)特异性结合应用于多种细菌感染的祀向诊断的报道。


[0008]本发明公开了半乳糖化的有多种细菌靶向特性的可示踪近红外荧光探针。与其他荧光探针相比，本发明具有多细菌靶向性，可实现活体细菌感染成像，安全有效，作为一种新型靶向诊断细菌感染的荧光探针有很好的应用前景。本发明中的半乳糖化近红外荧光探针，其中半乳糖起靶向作用，使探针特异性进入细菌细胞内；近红外染料吲哚花菁绿起实时在位、精细显像的作用。
[0009]本发明的荧光探针，由近红外荧光染料和半乳糖通过共价键连接而成。其中近红外染料优选吲哚花菁绿。本发明荧光探针优选如下结构式:
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