在动物中促进生长的活体细菌的应用制作方法_E·纳多,J·M·费尔布拉泽专利（活体,细菌,生长）-早鸽网

在动物中促进生长的活体细菌的应用制作方法

专利名称

在动物中促进生长的活体细菌的应用制作方法
发明者

E·纳多, J·M·费尔布拉泽
公开日

2013年4月17日
申请日期

2005年2月3日
优先权日

2004年2月3日
申请人

增值研究合伙有限公司
文档编号

A23K1/18GK103039712SQ201210237479
关键字

活体细菌生长动物应用促进
权利要求

1.有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株在动物中促进生长的应用2.根据权利要求1的应用，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株与饲料可接受载体结合3.根据权利要求2的应用，其中所述饲料可接受载体是普通的固体饲料4.根据权利要求2的应用，其中所述饲料可接受载体是水5.根据权利要求2的应用，其中所述饲料可接受载体是牛奶6.根据权利要求1至5中的任一项应用，其中所述有效量是每只动物至少5X107CFU的F4+非致病大肠杆菌菌株7.根据权利要求6的应用，其中有效量范围是在每只动物中从5X107至5X109CFU的F4+非致病大肠杆菌菌株8.根据权利要求1至7中的任一项应用，其中F4+非致病大肠杆菌菌株由2005年I月21日保藏在加拿大国际保藏单位(IDAC)的大肠杆菌菌株，保藏号IDAC 210105-01组成9.根据权利要求1至8中的任一项应用，其中所述动物或多个动物选自断奶后动物和孵化后动物10.根据权利要求9的应用，其中所述断奶后动物是10日至28日龄11.根据权利要求9的应用，其中所述孵化后动物是I日至7日龄12.根据权利要求9或10的应用，其中所述断奶后动物是猪13.根据权利要求9或10的应用，其中所述断奶后动物是小鼠14.根据权利要求9或10的应用，其中所述孵化后动物是家禽15.根据权利要求14的应用，其中所述家禽是小鸡16.在动物中促进生长的方法，所述方法包括用有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株喂养所述动物的步骤17.根据权利要求16的方法，其中所述动物被口服喂养18.根据权利要求16或17的方法，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株结合饲料可接受载体19.根据权利要求18的方法，其中所述饲料可接收载体是普通的固体饲料20.根据权利要求18的方法，其中所述饲料可接收载体是水21.根据权利要求18的方法，其中所述饲料可接收载体是牛奶22.根据权利要求16至21中的任一项的方法，其中所述有效量是每只动物至少5X107CFU的F4+非致病大肠杆菌菌株23.根据权利要求21的方法，其中有效量的范围是每只动物从5X107至5X109CFU的F4+非致病大肠杆菌菌株24.根据权利要求16至23中的任一项的方法，其中F4+非致病大肠杆菌菌株由2005年I月21日保藏在加拿大国际保藏单位(IDAC)的大肠杆菌菌株，保藏号IDAC 210105-01组成25.根据权利要求16至24中的任一项的方法，其中所述动物选自断奶后动物和孵化后动物26.根据权利要求25的方法，其中所述断奶后动物是10日至28日龄27.根据权利要求25的方法，其中所述孵化后动物是I日至7日龄28.根据权利要求25或26的方法，其中所述断奶后动物是猪29.根据权利要求25或26的方法，其中所述断奶后动物是小鼠30.根据权利要求25或27的方法，其中所述孵化后动物是家禽31.根据权利要求30的方法，其中所述家禽是小鸡32.在动物中促进生长的F4+非致病大肠杆菌菌株，其于2005年I月21日保藏在加拿大国际保藏单位(IDAC)，保藏号为IDAC 210105-0133.根据权利要求32的F4+非致病大肠杆菌菌株，其与饲料可接受载体结合34.根据权利要求16-24中的任一项的方法，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株促进日增重35.根据权利要求16-24中的任一项的方法，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株促进体重增加同时降低饲料摄入36.根据权利要求16-24中的任一项的方法，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株在动物生长阶段期间喂养给动物并且降低动物获得所需体重所需要的延迟37.根据权利要求1-8中的任一项的应用，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株促进日增重38.根据权利要求1-8中的任一项的应用，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株促进体重增加同时降低饲料摄入39.根据权利要求1-8中的任一项的应用，其中所述F4+非致病大肠杆菌菌株在动物生长阶段期间喂养给动物并且降低动物获得所需体重所需要的延迟
技术领域

本发明涉及动物生长促进领域尤其是，本发明涉及了表达F4(或K88)附着因子的非致病大肠杆菌菌株的应用，用以促进动物生长或在一群动物实现均一化生长
背景技术
具体实施例方式

本发明源自F4+非致病大肠杆菌菌株的新的应用更特别地并且根据第一方面，本发明涉及有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株以促进动物生长的应用根据第二方面，本发明涉及有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株在一群动物中实现均一化生长的应用根据相关方面，本发明涉及促进动物生长的方法和在一群动物中实现均一化生长的方法两种方法包括使用有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株来喂养动物的步骤本发明所用菌株的特征在于它表达附着因子F4，它是非致病的根据本发明优选的方面，F4+非致病大肠杆菌菌株选自coliPROtec (保藏号IDAC210105-01)，JG1329，M226，P03-7586(175)或pMK005更优选，本发明构思了使用coliPROtec菌株和/或它的突变体或变异体(详细情况参见实施例1)这里所用的术语coliPROtec菌株的“突变体”和“变异体”被用作菌株，其具有coliPROtec菌株的所有识别特征，如实施例1所提供的突变体或者变异菌株可因具有其基因组或者它的一部分被鉴别，其在高严谨条件下可以与coliPROtec菌株的基因组杂交根据本发明上面所提及的方案，上面所说明的菌株以“有效量”来使用这种“有效量”的描述，它应该被理解为F4+非致病大肠杆菌菌株的如下量，例如，其能够引起研究者或兽医所涉及的组织、系统或动物的生物学反应换言之，这种F4+非致病大肠杆菌菌株的有效量，其足以促进动物生长以及在一群动物中实现均一化生长应该理解，本发明构思的菌株的优选有效量是每个动物中至少大约5e7菌落形成单位(CFU)，并且更优选范围是从大约5e7至大约5e9CFU的目标菌株“大约”的意思是所述菌株CFU值可以在一个特定的范围内变化，其依赖于评价这种菌株CFU数值所用的方法的误差范围所用的有效量可以根据许多因素的而变化，例如，动物的类型，动物初始体重，动物的生长阶段，环境如动物设施，类型和生产管理，设施的卫生条件，断奶或孵化后的应激，所用的饲料和添加剂，动物的健康和伴生疾病或处理，是应当考虑的因素如上面所提到的，生长促进和生长均一化的目标被在动物中实现了如这里所用的，术语“动物”是指任意适用于本发明的年轻的或成年的动物更优选，术语“动物”是指断奶后或孵化后的动物既然在断奶后动物或孵化后动物中，母体喂养和关照不再存在，所以生长促进剂是极其重要的例如，在为了肉而对动物进行喂养的情况下，这种关注是特别重要的在本发明的上下文中，所用的优选的动物可以是下面的任何一种农场动物如猪以及优选是断奶后的猪；家禽如鸡，鸭，鹅，母鸡或火鸡，优选是小鸡，以及更优选是肉鸡；牛如母牛，阉牛，公牛或小牛；比赛动物如鸵鸟或野牛；驯化动物，如猫或狗；以及实验室动物，如小鼠或大鼠当然这些动物的特征都在于生长促进和生长均一化是期望的特征，尤其当以肉生产为目标的时候按照上面的观点，可以理解动物实际上可在整个生长过程中接受本发明的菌株，或者只在生长阶段的一部分时间中，例如早期阶段和/或准备屠宰的阶段中接受根据本发明优选的方面，断奶后动物优选是猪，优选在实验开始的时候是从大约10天至大约28日龄目标猪更优选是17日龄根据本发明的另一个优选的方案，断奶后动物优选是小鼠，优选在实验开始的时候是从大约18天至大约28日龄目标小鼠更优选是21日龄根据本发明的另一个优选的方面，孵化后动物优选是小鸡，优选在实验开始的时候是从大约I天至大约7日龄目标小鸡更优选是I日龄可以理解表述“大约I日龄”意思是出生或孵化后24小时或更少根据本发明优选的方面，可以提供给猪的有效量范围优选是从5e7至5e9CFU/猪，以及更优选大约1E9CFU/猪根据本发明另一个优选的方面，可以提供给小鸡的有效量范围从大约5々至5e9CFU/小鸡，以及更优选大约5e8CFU/小鸡根据本发明又一个优选的方面，可以提供给小鼠的有效量范围从大约5々至5e9CFU/小鼠，以及更优选大约5e8CFU/小鼠在本发明方法的具体上下文中，菌株的有效量可以以单剂量形式喂养动物，或者根据摄生法提供，只要其是有效的术语“喂养”，应该被理解为将本发明的F4+非致病大肠杆菌提供给处理中的动物，从而菌株可以最终到达肠胃道，以及更优选是肠道例如，按照本发明优选的方面，喂养可以通过向目标动物口服喂养菌株来实现根据本发明的优选方面，菌株优选以冻干形式喂养动物根据另一个优选方案，本发明的菌株用稀释剂或载体稀释或悬浮根据本发明，F4+非致病大肠杆菌菌株用作在动物中“促进生长”或者“在一群动物中实现均一化生长”这些表述是指使用大肠杆菌菌株以增加动物生长速率换言之，目标菌株一经处理，与未处理的对照相比，动物体重增加地更快并且更均一化更特别地是，表述“均一化生长”，在本发明的上下文中是指对一群动物生长速率的相对控制这种控制在动物饲养和产肉领域中负有特定的目的，其中给定组中的所有动物通过传统量的饲料以及无毒性生长促进剂必须理想地，在整群动物中以及相对相等的时间内更快达到它们的生长峰值当这些条件都达到时,饲养成本、屠宰成本和运输成本全部可以被优化为了评价生长促进和生长的均一化，可测定本领域内已知的大量参数更特别的是，这些参数，单独评价或者联合评价，其可以包括i_平均体重(MBW)—组动物中体重的平均值；i1-平均日增重(DWG)在特定的时期内，每组动物每天体重增加的平均值；iii_饲料摄入(FI)在特定的时期内每个动物或每组动物的饲料消耗量；和iv_饲料转化率(FCR)特定时期内每种动物或每组动物的饲料摄入/相同时期内相同动物或相同组动物的体重增加有利地，本发明的菌株可以单独使用或与饲料可接受载体结合使用如这里所使用的，表述“饲料可接受载体”是指任意的载体、稀释剂或赋形剂，其与本发明菌株是相容的并且提供给动物时没有负作用在本领域中已知的合适饲料可接受载体包括，但是不限于，水、盐、葡萄糖、右旋糖或缓冲溶液这种载体有利地对菌株是无毒的并且对动物是无害的它也可以是生物可降解的本领域的技术人员知道如何选择合适的载体，例如对于环境是无害的载体也优选，这种载体是适当的固体或液体的饲料可接受载体合适的固体饲料可接受载体是无毒的可吸收载体例如，这种固体饲料可接受载体可以是一种普通的固体饲料，例如典型动物饮食中的组分，包括谷物产品，例如大麦粉、玉米粉或小麦饲料，坚果和种子产品，例如剥皮破碎坚果饼或棉籽饼，或提取的棉籽饼，与少量的例如羽粉、海藻粉、骨粉，骨质面粉(bone flour)，化石粉，盐、尿素和维生素一起；或者它也可以是惰性的没有营养价值的固体稀释剂或载体，例如高岭土、云母、碳酸钙、漂白土、活性白土、碾碎的牡蛎贝壳或碾碎的石灰石；或者它也可以是淀粉或乳糖适合的饲料可接受载体是，例如，水以及优选为饮用水；牛奶例如全乳或脱脂乳；或者胰酶大豆肉汤(TSB)下面的实施例说明了本发明的广阔的潜在应用，并且不试图限制其范围这里在不背离本发明的精神和范围的情况下可以进行修饰和改变虽然那些与这里所描述的相似或相等的任意方法和原料也可以应用到测试本发明的实际中，但是这里描述了优选的方法和原料装置实施例

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法律状态

专利名称：在动物中促进生长的活体细菌的应用的制作方法对于农业和饲养业专家来说生长促进是至关重要的课题，在屠宰前或为了研究目的他们主要是寻找健康动物的优化生产。在产肉动物的情况下，这种关注引导他们使用对动物以及对人体都是有益的生长促进产品。在农业和饲养环境中的主要应该注意的是体重丢失、伴生疾病反复发作的低生长速率、药物成本和死亡率，其引起了动物产量的降低和最终导致可观的经济损失。这种情形中，断奶后或孵化后动物特别容易受到阻止生长试剂的攻击。例如，由非卫生条件或者动物间过度亲近而导致的传染是导致上述结果的最普遍因素。用于解决这种问题的常规方法是在饲料中使用抗生素生长促进剂。但是，抗生素生长促进剂的使用也有很大的争议，因为众所周知，即使使用亚治疗剂量，抗生素的持续使用也可以导致在接受处理的动物中对抗生素抗性菌菌株的筛选(Arnold S等人;WegenerHC等人和Schwarz S等人)。事实上，最近十年，已经出现了致病性更强的和抗生素-抗性更强的大肠杆菌菌株，和/或管理的改变(较早断奶)，和/或一些新的欧洲规章，其禁止将抗菌剂作为生长促进剂或者进行预防处理(疾病的预防)以及禁止使用高水平的重金属，如饲料中的氧化锌的使用。在动物生产中断奶时期与高抗生素的使用特别相关。因此，由于抗生素抗性的复发和对抗生素残余的过敏反应，以及对耕地土壤的污染，目前越来越限制抗生素生长促进剂和重金属的使用。另一个农业和饲养专家必须面对的问题是一群动物中生长的不均一性。尤其是，在以优化肉产品为目的时，例如，农民希望生产出一致的动物群，其在屠宰前显示最大的均一化生长速率可能性，以避免增加成本。但是，动物一般表现出不同的生长速率并且尤其对感染剂表现出不同的易受攻击性。因此，就不断需要创新药剂，其促进动物生长并且进一步有利于对动物生长的均一化和优化作出贡献。
本发明的一个目的是有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株促进动物生长的应用。本发明的另一个目的是有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株在一群动物实现均一化生长的应用。本发明进一步的目的是提供一种促进动物生长的方法，所述方法包括向所述动物喂养有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株的步骤。本发明的另外一个目的是提供在一群动物中实现均一化生长的方法，所述方法包括向所述动物喂养有效量的F4+非致病大肠杆菌菌株的步骤。由于F4+非致病大肠杆菌菌株的使用，本发明发现一个对特别需要动物的快速生长促进和生长均一化的有利之处。例如，F4+非致病大肠杆菌菌株在产肉动物饲养中的使用，与没有进行处理的对照相比，其可使这些动物在较短的时间内达到市场体重或屠宰体重。本发明进一步发现一种促进实验室动物(例如，大鼠和小鼠)生长和均一化生长的有利之处。如可以理解的，使这些实验动物更快地和更均一地达到了给定体重，优选提供了更为均一化和更容易获得的动物样品本发明的另一个有利之处是没有借助抗生素用于促进动物生长。所以，对于特别影响断奶后动物的诸如抗生素抗性细菌菌株或者抗生素过敏所引发的问题就被缓解了。另外，既然重金属如氧化锌没有被添加到动物的饲料中，土壤的污染也避免了。换言之，本发明还提供了环保的应用和方法。通过本发明方法获得的改进的饲料转化效率，使处理的动物可以在消耗更少食物的情况下达到任意所需的体重(与没有处理的动物达到相同的体重相比)。另外，当实行本发明中方法的时候，在经处理的动物中既没有发现毒副作用也没有发现细菌引起的一般健康状况的降低。本发明和它的有利之处可以参照附图，通过阅读下述优选实施方案的非限定性说明来更好的理解。图1显示的是根据本发明所用的优选F4+非致病大肠杆菌菌株的基因组DNA的Xbal-消化的脉冲-电场凝胶电泳图的照片。优选的菌株是coliPROtec菌株。图2显示的是在用F4+大肠杆菌菌株处理后每个阶段猪的体重增加的百分比的图。图3显示的是在用F4+大肠杆菌菌株处理后每个阶段小鼠的体重增加的百分比的图。
实施例实施例1 :大肠杆菌菌株(coliPROtec)及其克隆的说明根据本发明的优选特征，使用F4+非致病大肠杆菌菌株(下文中称coliPROtec或JFF4菌株)。ColiPROtec菌株于2005年I月21日保藏在加拿大国际保藏单位(International Depositary Authorityof Canada)(IDAC),给予的保藏号是 IDAC210105-01。1.来源该菌株是从健康猪的粪便中，由加拿大魁北克省Saint-Hyacinthe,蒙特利尔大学，兽医系的大肠杆·菌实验室分离出来的。动物是从位于加拿大魁北克省Monteregie的当地农场购买的。2.菌株的稳定性coliPROtec菌株的F4菌毛(免疫原蛋白)的表达利用体外途径进行稳定。进行三(3)个连续IOL的发酵。每次发酵完成以后，培养液被接种在琼脂上，并且使用玻片凝集测试针对F4菌毛表达进行10个菌落的检测。合并来自F4+菌落的细菌并且用于连续发酵。囷株然后被冻结在加入了 20%甘油的膜酶大肉汤(TSB)中。融化后，囷株的F4表达不总是稳定，并且需要几个连续发酵(大约10次)以得到稳定的菌株。在从猪中提取后经历大约15次传代之后稳定菌株被冻干。冻干的培养物被用于产生coliPROtec的主要种子。3.生化分析菌株的鉴定使用API系统进行。获得的鉴定编码5544572被认为是大肠杆菌菌株。4.致病分型coliPROtec菌株的致病分型通过菌落杂交和/或聚合酶链式反应(PCR)进行。致病分型结果显示coliPROtec菌株对F4是阳性的，而对下列毒素是阴性的LT, STa, STb, STaH, Stxl，Stx2, VT2Vpl, VT2Vh, Aero, Tsh, CDT3, CDT4, CNF1，CNF2，HlyA, HlyC, Ehx, Eastl0另外，coliPROtec菌株对下列粘着素或推定粘着素是阴性的F5, F6, F18, F41，F17，P 菌毛，AIDA, AFA, SFA, CS31a, daaE, Paa, aggR, ARF/1, Eae,CFAI，CFAII (CSlcoo)，CFAII (CS3cst)。5. DNA指纹图谱coliPROtec菌株通过脉冲_电场凝胶电泳来表征(图1)。通过反复体外传代，选择F4菌毛表达在发酵后稳定之特殊的菌株克隆。6.表格和数据表的概述下面试验所用到的菌株在下面的表I和数据表详细说明。表IF4+非致病性野生型大肠杆菌菌株

本发明涉及F4+非致病大肠杆菌菌株在动物中促进生长的应用。本发明还涉及了这些菌株在一群动物中实现均一化生长的应用。尤其是，本发明的目的动物是那些以生长促进或生长均一化为所需目标的动物，如为了产肉而进行的动物饲养。本发明进一步涉及了促进动物生长的方法以及在一群动物中实现均一化生长的方法。

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