专利名称：含有朱砂和/或雄黄的药物组合物的制作方法 朱砂(cinnabaris)又名辰砂、丹砂。其化学成分主要为硫化汞(HgS)，此外，朱砂尚含铅、钡、镁、铁、锌、锰等25种微量元素。朱砂味甘，微寒，清心镇惊，安神解毒。用于心悸易惊，失眠多梦，癫痫发狂，小儿惊风，视物昏花，口疮，喉痹，疮疡肿毒。由于朱砂具有较好的疗效，历代医药学家创造了许多名方，使用朱砂的方剂不断增加，而且应用广泛。临床上经常使用的含朱砂方剂、成药有几十种，其中有安宫牛黄丸、牛黄清心丸、紫雪丹、至宝丹及朱砂安神丸等名贵中成药，特别是朱砂在小儿用中成药中应用尤为普遍。《太平惠民和剂局方》共收载方剂788，有朱砂的方剂82方，“幼科”共收载方剂2271方，有朱砂的方剂206方，第四版《中华人民共和国药典》收载的中成药及制剂398种，其中有朱砂、雄黄方药占54种，单含朱砂为47种，朱砂类方药制剂在我国治疗用药方面占有重要地位。雄黄(Realgar)始载于马王堆帛书《五十二病方》，别名黄金石、石黄、熏黄、明雄黄、雄精、腰黄、鸡冠石。其主要成分为As2S2(或As4S4)，此外还含有多种微量元素。雄黄味辛、性温、有毒。归肝、大肠经，具有燥湿祛痰、解毒杀虫、截疟的功效。适用于痈肿疔疮，蛇虫咬伤，虫积腹痛，疟疾等症。著名的中成药六神丸、安宫牛黄丸、至宝丸、紫金锭等的处方中都有雄黄。朱砂与雄黄广泛入药，但由于二者均含有超量的重金属类有害成分及砷，这使它们在使用上受到限制，特别是自上世纪80年代以来，国际社会对我国出口的中成药中重金属反应强烈，甚至它们直接视为毒物，把朱砂(HgS)视为汞，把雄黄(As2S2)视为砷(As)或砒霜(As2O3)，同时制定了严格的标准，限制中成药中的汞、砷等重金属含量。中药药典规定以水飞法对朱砂和雄黄进行炮制，不但费时、费力、耗能，而且产生废气废水等污染，更重要的是由于朱砂和雄黄均极难溶于水，采用这类方法并不能有效去除药品中的重金属和砷，造成朱砂和雄黄的超量使用，且无法定量控制药物中有效成份的含量，从而限制了朱砂及雄黄的使用，以及含有朱砂或雄黄的中成药走向国际化和二次开发。采用化学分离技术是可以完全去除有关矿物药物中的重金属成份，但实践证明这些方法却难于保留矿物药物中所必须的有效成分，从而失去中药的治疗作用；另一方面，采用纯化学方法进行药物处理还可能将药物本身所不具有的成份，甚至有毒和剧毒成分引入药物中，为避免这一现象发生，不但需要相关的工艺措施，致使药物处理成本提高，很难将这些外加成分去除干净。我们在发明专利2006102000675中公开了朱砂及雄黄等矿物中药的细菌处理方法，本发明中提供了一类采用了细菌处理法炮制的朱砂和/或雄黄的药物组合物，由于以细菌处理法炮制的朱砂和/或雄黄在药效上等同或优于以水飞法炮制的朱砂和/或雄黄的药效，且朱砂和/或雄黄均可去除有害重金属或砷，选用了以细菌处理法炮制的朱砂和/或雄黄的药物组合物在疗效上有所改善或增强，且朱砂和/或雄黄的使用量减少；有害重金属或砷的含量降低，毒副作用减小。
对于业已上市的含有朱砂和/或雄黄的中药成方，由于现有技术的缺憾，使用量大，有害金属或砷的含量高，因而被国外列入黑名单，而无法进入国外市场。本发明的实施是将现有上市成品中药原方中的朱砂和/或雄黄替换成以发明专利2006102000675中公开的技术处理的朱砂和/或雄黄，从而使这类含有以细菌法处理炮制的药物组合物即有良好的药效，又达到了低毒或无毒的用药要求。
由于采用发明专利2006102000675中公开的技术处理朱砂和雄黄，实现了能够有效控制朱砂和雄黄的起效成分及有害重金属或砷的含量至人体安全用药的标准，从而可以方便进行朱砂和/或雄黄与现有中药复配。由于经过处理后的朱砂和/或雄黄由不溶状态成为可溶状态，进而可方便地将含有细菌法处理炮制的朱砂和/或雄黄的药物组合，按《中国药典》2000版的标准制成各种制剂栓剂、丸剂、颗粒剂、膜剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、酒剂、糖浆剂、口服液、注射液或注射粉针剂，这些药物除了保持原有的适应症、药效更显著外，还可用于治疗高热昏迷、中风、抗肿瘤等疾病。

以下提供本发明的六个具体的实施例，但这并不意味着本发明局限于这些具体实施实例，因为同领域技术人员可以根据本专业的一般知识使用本发明所用的以细菌法炮制的朱砂和/或雄黄进行组方。
实施例一采用我们的发明专利2006102000675中公开的技术处理的雄黄A与水飞法处理的雄黄B，对小鼠急性毒性实验结果，见表1。
表1.小鼠急性毒性试验结果

实施例二加入不同量的采用发明专利2006102000675中公开的技术处理的朱砂和雄黄与现有技术处理的朱砂和雄黄的牛黄安宫丸，对大脑中动脉栓塞大鼠脑梗积的影响SD大鼠40只，分为4组，每组10只，按体重ig给药1.0ml/100g，对照组及模型组给予等体积水，连续给药3天。在第二天给药后1小时，以三氯化铁法造成大鼠脑局灶性缺血，测定大鼠的脑梗塞面积，结果见表2。
表2

实施例三加入不同量的采用发明专利2006102000675中公开的技术处理的朱砂和雄黄(每100ml含以细菌法处理的含汞总量为0.005％的朱砂和含砷总量为0.005％的雄黄)的清开灵口服液，对照组及模型组给予等体积水，连续灌胃给药3天。在第二天给药后1小时，以三氯化铁法造成大鼠脑局灶性缺血，测定大鼠的脑梗塞面积，结果见表3。
表3.

*稀释至1.5ml实施例四加入不同量的采用发明专利2006102000675中公开的技术处理的雄黄(每100g含以细菌法处理的含砷总量为0.005％(e)及0.01％(f)的雄黄)与现有技术处理的雄黄的牛黄解毒丸片，对蛋清致大鼠足肿胀和二硝基酚致大鼠发热的解热的影响。
1、对蛋清致大鼠足肿胀的影响大鼠40只，体重200g-250g，雌雄各半，随机分为4组，ig给药每日一次，连续4天，致炎前每鼠先ig水5ml，按毛细管放大测量法测大鼠左踝关节以下部位足容积，然后重复给药一次，给药后30min每鼠左踝关节腱膜下注射新鲜蛋清0.1ml致炎，然后每隔1小时重复测定各鼠左足容积，连续4h，以各鼠致炎后不同时间左足容积与给药前容积之差作为肿胀度，结果见表4。
表4.

2、二硝基酚致大鼠发热的解热的影响大鼠50只，随机均分为4组，测给药前正常肛温后，每鼠背侧皮下注射2％的二硝基酚醇溶液40mg/kg致热，30min后ig给药，给药后每30min测肛温一次，连续测定2h，记录所检测肛温值，结果见表5。
表5

实施例五加入不同量的采用发明专利2006102000675中公开的技术处理的朱砂(每100g含以细菌法处理的含汞总量为0.00596的朱砂)与现有技术处理的朱砂的朱砂安神丸，对家猫觉醒周期的影响。
大鼠10只，分成二组，采用八道脑电仪，每日10:00至16:00连续6小时记录下列指标肌电图、眼球运动电图、大脑皮层电图和外侧膝状体放电，连续记录4天取平均值。根据记录结果把猫睡眠觉醒周期分为清醒期(w)、延长慢波睡眠I期(SWSI)、慢波睡眠II期(SWS II)及异相睡眠(PS)，给药前后结果见表6。
表6

实施例六1、含朱砂和/或雄黄的注射液或粉针剂制备工艺其制备工艺包括如下步骤(1)分别取处方量的朱砂或雄黄，并按照中国发明专利申请2006102000675公开了朱砂，雄黄的溶解方法将其溶解，并且对中金属(含砷)含量进行控制。制备好朱砂、雄黄的微生物溶解液进行固液分离。(2)5000转/分离心20分钟后，上清液用微孔滤膜滤除上清液中的菌体及其热原物质，得到含朱砂和/或雄黄主要组分的配制液；(3)分别将不同浓度的配制液与按上述工艺制得的组方中不含朱砂，雄黄成分备用液按表一所示的比例混合；(4)再经微孔滤膜过滤后，得到含朱砂和/或雄黄备用物；(5)将制得的含朱砂和/或雄黄备用物加入已经准备好的牛黄安宫注射用备用液中(不含朱砂和/或雄黄)制备成注射液；(6)或者冷冻干燥或喷雾干燥即得注射用粉针剂；(7)牛黄安宫注射用药物组合物按下列配方制备甲一种含朱砂和/或雄黄的牛黄安宫注射用药物组合物，是按以下重量比组成牛黄安宫注射用备用液0～99％+雄黄组分1～100％。
乙一种含朱砂和/或雄黄的牛黄安宫注射用药物组合物，是按以下重量比组成牛黄安宫注射用备用液0～99％+朱砂组分1～100％丙一种含朱砂和/或雄黄的牛黄安宫注射用药物组合物，是按以下重量比组成牛黄安宫注射用备用液1～99％+朱砂组分1～99％+雄黄组分1～99％。
2、含朱砂和/或雄黄的牛黄安宫注射用药物组合物的抗肿瘤作用1、材料与方法(1)按实施例一所示方法由兰州大学临床前新药研究重点实验室按表一制备各种样品，均以1mmol/L NaOH溶液助溶，以培养液调至所需浓度。
(2)将HL-60细胞系(人急性早幼粒白血病细胞，由兰州大学基础医学院提供)孵育于37℃、5％CO2的二氧化碳培养箱中。用含10％小牛血清的RPMI 1640培养液(SIGMA公司)每2～3天传代培养。
(3)分别将不同样品的药液加入长满单层的对数生长期细胞中，作用于不同的时间后以0.25％胰酶消化，收集各药液作用后的贴壁细胞，以PBS缓冲液洗涤2次，离心后去上清液，边振荡边滴入70％冷乙醇固定细胞，4℃保存。上机前PBS洗涤3次，加入适量PBS液与含RNA酶的碘化丙啶PI染液混匀，经45目尼龙网滤过后，调细胞浓度至1×106个/ml，以流式细胞仪测定亚二倍体细胞DNA含量的变化，测定细胞数为10000个。
(4)试验结果见表7表7




本发明涉及含有朱砂和/或雄黄的药物组合，其中采用的朱砂和/或雄黄为以细菌处理法炮制，朱砂和/或雄黄在细菌的作用下由不溶于水的成分转变为水溶性成分，且去除了有害的离子，达到安全用药的要求。本发明的实施即是以经细菌法处理的朱砂和/或雄黄代替了以按《药典》中规定的水飞法炮制的朱砂和/或雄黄，按《药典》中规定的制剂方法制备成含有朱砂和/或雄黄的药物组合物，该药物组合物即有良好的疗效，又具有无毒或低毒的特点。