专利名称：一种马桑内酯类物质的提纯方法马桑Cbriaria sinica Maxim.为马桑科马桑属植物，是多年生落叶有毒的小乔木或灌木。其自然资源丰富，在我国分布广泛。马桑根部药用，用于治风湿麻木、风火牙痛、痰饮、跌打损伤、烫火伤、急性结膜炎等。马桑全株有毒，在民间有用于土农药的记载，马桑提取物对多种咀嚼式害虫具有明显的拒食和胃毒作用，可用作植物农药。马桑内酯类化合物是马桑的主要活性成分，对中枢神经系统具有显著的药理作用。周莉君等研究表明马桑提取物对真菌抑制效果显著高于细菌，且醇提物抑菌效果优于水提物。张雁冰等通过对羟基马桑毒素和马桑亭的杀虫活性实验，表明羟基马桑毒素对小菜蛾具有明显的拒食作用。此外，马桑内酯类化合物还可用于点燃癫痫模型，具有安全性好、对脑无直接机械损伤等优点。现有马桑内酯类化合物的提取方法有醇提，石油醚萃取除杂，大孔树脂吸附，柱色谱及重结晶等方法得到。该方法能耗大，步骤繁多，制备量少。
本发明要解决的技术问题是提供一种马桑内酯类物质的提纯方法，该方法操作简单，制备量大。本发明是通过以下技术方案实现的一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于包含以下步骤1)超临界萃取将马桑药材粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入甲醇作为夹带剂参与萃取，收集萃取物；2)石油醚脱脂向上述萃取物中加入3飞倍量石油醚回流提取2、次，离心分离固液， 得脱脂物；3)柱层析将上述脱脂物进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，高效液相监测，收集相应流分，浓缩干燥得到马桑内酯类物质。所述的马桑内酯类物质包括马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等物质。所述步骤1)中的萃取参数为萃取温度为^_40°C，萃取压力为20_30MPa，CO2流量为15-25L/h，萃取时间为2-4h，分离釜I温度为20_30°C，压力为6_12MPa，分离釜II温度为 8-15°C，压力为 4-8MPa。所述步骤3)中的硅胶粒度为10(Γ300目，洗脱剂氯仿-甲醇洗脱比例2 15 :5。本发明的积极效果是(1)超临界萃取，萃取过程耗能低，萃取剂(X)2来源丰富、清洁无污染；
(2)本发明采用溶剂萃取法精制马桑内酯类物质，该法能快速的去处杂质，得到纯度高
3的马桑内酯类物质，工艺简单，成本低，效率高。下面将结合
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

高效液相色谱条件
色谱柱0DS 柱 Q50mmX4· 6mmX5Mm)；
流动相15%乙腈；
流速:lml/min ；
检测波长215nm ；
柱温室温。实施例1
取马桑干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 200ml甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度40°C，萃取压力20MPa，萃取时间2h，CO2通入的量为15L/h，设定分离釜I温度为20°C，压力为6MPa，分离釜II温度为8°C， 压力为4MPa，在分离釜II中收集萃取物，加入500ml石油醚回流提取4次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物；
取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(100目)柱层析，用氯仿-甲醇 (2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质6. 7g。实施例2:
取马桑干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 300ml甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度40°C，萃取压力30MPa，萃取时间4h，CO2通入的量为25L/h，设定分离釜I温度为30°C，压力为12MPa，分离釜II温度为 15°C，压力为8MPa，在分离釜II中收集萃取物，加入800ml石油醚回流提取3次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物。取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(200目)柱层析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂， 得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质7. Sg。实施例3:
取马桑干燥药材^g，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 1.2L甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度30°C，萃取压力^MPa,萃取时间2. 5h，CO2通入的量为18L/h，设定分离釜I温度为22°C，压力为8MPa，分离釜II温度为 13°C，压力为6MPa，在分离釜II中收集萃取物，用2. 5L石油醚回流提取2次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物。取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(300目)柱层析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质33. 5g。实施例4:
取马桑干燥药材10kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界(X)2萃取，通入2L 甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度35°C，萃取压力20MPa，萃取时间池， CO2通入的量为22L/h，设定分离釜I温度为25°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为14°C，压力为5MPa，在分离釜II中收集萃取物，用5L石油醚回流提取4次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物。取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(200目)柱层析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂， 得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质45. 7g。


本发明涉及了一种马桑内酯类物质的提纯方法，尤其是涉及一种应用超临界萃取法提纯马桑内酯类物质的方法，方法步骤包括取马桑药材粉碎，置于超临界萃取釜中，采用超临界CO2萃取，在分离釜中收集萃取物，用石油醚回流脱除脂溶性杂质，再采用硅胶柱层析，氯仿-甲醇洗脱，分离精制得马桑内酯类物质。本发明工艺流程简单、消耗低、效率高、简单易操作，可实现大量制备。