专利名称：茶树油抗菌、抑菌护理湿巾及制造方法此处所言茶树实际上是桃金娘科(Myrtaceae)白千层属植物(melaleuca alternifolia)，或新西兰茶树manuka(Leptospermumscoparium)或kanuka(Kunzea ericoides)，原产于澳洲新南威尔士，几百年前当地的土著就采用茶树叶和嫩枝捣碎后治疗刀伤、蚊虫叮咬、烧烫伤等疾病。1770年英国皇家海军库克船长到达澳洲海岸时，受到当地土著影响，用其叶熬制香茶，因而，得名茶树(teatree)。一般所指的茶树油是采用水蒸汽蒸馏法从茶树叶和嫩枝中提取的精油。上世纪二十年代，人们就开始用水蒸汽蒸馏法从茶树叶和嫩枝中提取、使用茶树精油(essential oil of teatree)，简称茶树油(teatree oil ormelaleuca oil)。到了九十年代末，在澳洲已经形成一个完整的从茶树种植、精油生产到个人护理产品、医药用品等等的茶树油产业链，茶树油产量达到千吨，产品大部分出口到北美洲和欧洲，部分产品已经获得FDA的认证。几十年的研究数据表明，茶树油具有广泛的抗细菌、抗真菌、抗病毒、免疫调节活性，毒理学研究证明茶树油具有很高的安全性，对人体皮肤没有刺激性。茶树油产品广泛应用于个人卫生，如痤疮、粉刺、带状疱疹、烧烫伤、蚊虫叮咬、油性皮肤、湿疹、体癣、脚癣、肌肉关节疼痛、外伤消毒等的护理领域，泌尿生殖系统，如细菌性、霉菌性阴道炎、外阴瘙痒等的保健和呼吸系统疾病，如感冒、流感、哮揣、气管炎、鼻窦炎、结核病、白日咳、水痘等的预防以及宠物护理等。现在茶树油的化学组成已经比较清楚，共含有100多种化合物，其中近80种化合物的结构已经确认，认为主要有效成分是松油烯醇-4(Terpinen-4-ol，CAS No.2438-10-0，Molecular FormulaC10H18O)[Terpinen-4-ol，the maincomponent of the essential oil of Melaleuca alternifolia(tea tree oil)，suppresses inflammatory mediator production by activated humanmonocytes，P.H.Hartl，C.Brandl，C.F.Carson，T.V.Riley，R.H.Pragerand J.J.Finlay-Jones，Inflamm.Res.49(2000)6 19-626]，要求含量不得低于30％，桉叶素(1，8-Cineole，CAS No.470-82-6，Molecular FormulaC10H18O)，要求含量不得高于15％。在美国专利中，有许多以茶树油为活性成分的专利文献报道，主要应用于肌肉松弛、止痛、止汗、牙龈炎、皮肤瘙痒、红肿、湿疹、消毒、烧烫伤、除草剂、除臭剂、预防感冒、流感、呼吸道感染等；在中国专利中，有茶树油应用于口腔疾病、防腐剂、痤疮等方面的文献报道。
本发明提出一种茶树油抗菌、抑菌护理湿巾及制造方法，产品明显区别于以化学合成消毒杀菌剂为主要活性成分的同类产品，具备全天然植物来源，广谱的抑菌、杀菌活性，安全无毒，可以自然降解，体现绿色环保，符合回归自然的流行时尚，对人体外表皮肤和腔道粘膜无刺激性和致敏型。本发明以茶树油植物提取的精油为抗菌、抑菌活性成份，借助乳化剂的作用，均匀分散在水中制成粘度不高于1.5厘泊的低粘度水包油型乳液，按重量百分比计其组成为茶树油0.1～10％(w/w)，乳化剂0.1～5％(w/w)，甘油1～10％(w/w)，余量为水。
所述乳化剂采用已有的吐温系列中的任何一种。
所述茶树油采用桃金娘科(Myrtaceae)白千层属植物(melaleucaalternifolia)茶树或新西兰茶树manuka(Leptospermum scoparium)或kanuka(Kunzea ericoides)茶树的树叶和嫩枝提取的精油。
所述的茶树油中的指标成分松油烯醇-4(terpinen-4-ol)的含量不低于30％，而桉叶素(1，8-cineole)的含量不高于15％。
所述的茶树油可以是水蒸汽蒸馏法提取，亦可以是溶剂浸泡法提取，如乙醇浸泡提取法，或者是二氧化碳超临界萃取法。
所述的护理湿巾具有抗菌、抑菌的功能，可以显著抑制金色葡萄糖球菌(Staphylococcus aureus)、白色链珠菌(Candida albicans)、大肠杆菌(Escherichia coli)等致病微生物的繁殖。
所述的护理湿巾安全无毒、无刺激性，既可用于人体外表皮肤，如手部、脸部、腋下等部位，卫生护理，亦可用于人体口腔、外生殖器、肛门等部位粘膜的清洁护理。
一种茶树油抗菌、抑菌护理湿巾的制造方法，其特征是1)按配方比例加入物料，搅拌乳化，再补加水至需要量；2)将无纺布原料按所需规格进行剪裁并折叠后，装入包装袋，灌装消毒抗菌抑菌乳液，乳液占总重量的60～80％，用封口机把包装袋封口。
所述的护理湿巾可以根据需要添加芳香剂，制备成有香型产品。
以下就本申请提供具有所述疗效的具体试验效果和数据。
依据国家《消毒技术规范(2002年版)》(中华人民共和国卫生部，二00二年十一月)要求进行评价。
原材料①菌种大肠杆菌1011、金黄葡萄球菌1031、白色念珠菌2005从云南省微生物研究所购入；②培养基细菌液体培养基、细菌固体培养基、沙堡液体培养基和沙堡固体培养基。细菌培养基用于大肠杆菌、金黄葡萄球菌的培养，沙堡培养基用于白色念珠菌的培养。
(一)最小抑菌浓度测定--MIC(营养肉汤稀释法)将不同浓度消毒杀菌液混合溶解于培养基中，然后接种细菌，通过细菌生长与否，确定试样抑制受试菌生长的最小浓度(MIC)。
试验步骤1)制备细菌悬液；2)将试样用蒸馏水做对倍系列稀释成不同浓度的受试液，各取2.5ml受试液加入2.5ml双倍浓度的培养基试管中；3)以不含试样的溶剂2.5ml加入2.5ml双倍浓度的培养基试管中(溶剂对照)；4)取0.1ml含108cfu/ml的细菌悬液接种于以上试管中，作为试验组样本；5)取0.1ml含108cfu/ml的细菌悬液接种于不含消毒杀菌液的试管，作为阳性对照；6)取0.1ml含108cfu/ml的细菌悬液接种于溶剂对照试管，作为溶剂对照；
7)取2支培养基作为阴性对照；8)将样品组、对照组放置于37℃培养，48小时后观察结果。
④评判规则阳性对照细菌生长，阴性对照细菌不生长，试验组无细菌生长的最高稀释度所对应的消毒杀菌液浓度，为该样品对受试菌的MIC。
(二)浸渍试验将试样和对照织物分别放入三角培养瓶，用含培养基的试验菌液接种于样品和对照织物上，经过培养，分别将培养前后试样上的细菌洗下，测定细菌数量，可计算出试样上细菌减少的百分率。该方法使用于可溶出性的织物。
试样的制备剪直径5cm的圆形试样及对照织物若干，取若干份试样和对照织物分别装于三角瓶，盖好瓶口，121℃ 15min灭菌备用。织物选用无纺布。
用双倍培养基和等体积试样溶液混合，取1ml滴加到无菌的织物上，干燥后可用。
试验步骤1)分别取1ml菌悬液加在3个三角瓶的织物上，均匀分布，且不留残液，封口防蒸发；2)分别在1个试样和对照织物的三角瓶中加50ml 0.03M PBS，剧烈摇晃1分钟洗涤细菌，取1ml做10倍系列稀释，并接种培养皿，作为“0”接触时间样品和对照织物上的细菌数；3)阴性对照试样不接种菌悬液，“0”接触时间加入50ml PBS，剧烈摇晃1分钟，接种培养皿；4)阳性对照取装有织物的三角瓶，接种1ml菌悬液，37℃培养20±2小时，加50ml PBS，剧烈摇晃1分钟， 取1ml做10倍系列稀释，接种培养皿；5)实验组取装有试样和织物的三角瓶，接种1ml菌悬液，37℃培养20±2小时，加50ml PBS，剧烈摇晃1分钟，取1ml做10倍系列稀释，接种培养皿；6)将各组培养皿放入37℃培养箱，培养48小时后计数；7)试验重复3次。
结果计算抑菌率(％)＝[(B or C or(B+C/2))-A]/(B or C or(B+C/2))×100A试验组细菌数 B“0”接触时间试样细菌数C“0”接触时间对照织物细菌数注B、C差别较大，取大；B、C相差不大，取平均。
评判规则1)“0”接触时间对照组的菌落应在1000～5000cfu/ml；2)阴性对照应无细菌生长，阳性对照应比“0”接触时间菌落数明显多；3)各次试验的抑菌率均≥50％，可确认该样片有抑菌作用。
(三)抑菌环试验消毒杀菌液经琼脂扩散形成浓度梯度，以显示其抑菌作用。该方法适用于可溶性产品。
试验步骤1)抑菌片的制备取无菌、干燥直径5mm×5mm的滤纸片。每片滴加实际使用浓度消毒杀菌液20ul，然后平放于无菌培养皿内，37℃或室温干燥备用。2)阴性对照片制备操作同上，滴加无菌蒸馏水20ul，然后平放于无菌培养皿内，37℃或室温干燥备用。
3)溶剂对照片制备操作同上，滴加无菌溶剂20ul，然后平放于无菌培养皿内，37℃或室温干燥备用。
4)接种用无菌棉拭子蘸5×105cfu/ml～5×106cfu/ml菌液，在琼脂培养基表面涂抹3次，每次转60度，最后绕平板边缘涂抹一周，然后室温干燥5分钟；5)样片贴放每个平板放4个试验片，1个阴性对照片。各片中心相距25mm，与边缘相距15mm，轻压样片，使之贴紧，37℃，培养16～18小时，用游标卡尺测量环的直径。
评价规定1)阴性对照无抑菌环，否则无效；2)抑菌环直径大于7mm，为有效；3)3次重复试验均有抑菌作用结果，为合格


图1为本发明的制备工艺流程图。

实施例2含1％茶树油玫瑰香型消毒抗菌、抑菌湿巾在无菌操作实验室，称取100克茶树油，500克甘油，50克吐温，10克玫瑰花香精，加适量纯净水，搅拌乳化，补加纯净水至10公斤，得到10公斤1％茶树油消毒抑菌乳液，按照图1的生产工艺，生产1％茶树油玫瑰香型消毒抗菌、抑菌湿巾样品，数量约150包，10片/包；随即抽取湿巾，将湿巾中的乳液积压出来，作为供试样品，依据国家消毒技术规范要求进行评价，实验结果供试样品对大肠杆菌1011、金黄葡萄球菌1031、白色念珠菌2005均有显著的抑菌效果。
实施例3含2％茶树油水果香型消毒抗菌、抑菌湿巾在无菌操作实验室，称取200克茶树油，300克甘油，50克吐温，10克水果香精，加适量纯净水，搅拌乳化，补加纯净水至10公斤，得到10公斤2％茶树油消毒抑菌乳液，按照图1的生产工艺，生产2％茶树油水果香型消毒抗菌、抑菌湿巾样品，数量约150包，10片/包；随即抽取湿巾，将湿巾中的乳液积压出来，作为供试样品，依据国家消毒技术规范要求进行评价，实验结果供试样品对大肠杆菌1011、金黄葡萄球菌1031、白色念珠菌2005均有显著的抑菌效果。
实施例4含5％茶树油冰凉型消毒抗菌、抑菌湿巾在无菌操作实验室，称取500克茶树油，500克甘油，100克吐温，50克薄荷油香精，加适量纯净水，搅拌乳化，补加纯净水至10公斤，得到10公斤5％茶树油消毒杀菌乳液，按照图1的生产工艺，生产5％茶树油牡丹香型消毒抗菌、抑菌湿巾样品，数量约150包，10片/包；随即抽取湿巾，将湿巾中的乳液积压出来，作为供试样品，依据国家消毒技术规范要求进行评价，实验结果供试样品对大肠杆菌1011、金黄葡萄球菌1031、白色念珠菌2005均有显著的抑菌效果。
实施例5含1％茶树油茶树油香型消毒抗菌、抑菌湿巾在无菌操作实验室，称取100克茶树油，500克甘油，50克吐温，加适量纯净水，搅拌乳化，补加纯净水至10公斤，得到10公斤1％茶树油消毒抑菌乳液，按照图1的生产工艺，生产1％茶树油茶树油香型消毒抗菌、抑菌湿巾样品，数量约150包，10片/包；随即抽取湿巾，将湿巾中的乳液积压出来，作为供试样品，依据国家消毒技术规范要求进行评价，实验结果供试样品对大肠杆菌1011、金黄葡萄球菌1031、白色念珠菌2005均有显著的抑菌效果。因为茶树油具有特别的芳香味，本身就是优良的芳香剂和除臭剂，可以不加入任何香精香料，制成茶树油香型的产品，此类产品更适宜用于婴幼儿外表皮肤清洁，成人日常外生殖器官和性行为前后的清洁护理，可以减少外加香精对外表皮肤和生殖器粘膜的刺激几率。
通过上述五个实施例详细描述，已经清楚地说明了本发明特征，列举的实施例，只是为了进一步具体阐述本发明的内容，并没有限制本发明之意。


本发明公开了一种茶树油抗菌、抑菌护理湿巾及制造方法，以天然茶树油作为抗菌、抑菌剂，安全无毒、无刺激性，抗菌、抑菌溶液是粘度不高于1.5厘泊的低粘度水包油型乳液，既可用于个人手部、脸部、腋下等外部皮肤护理，又可用于男女日常外生殖器官和性行为前后的清洁护理，具有预防或治疗部分皮肤病、性传播疾病的功能，对人体外表皮肤和腔道粘膜无刺激性和致敏型。