专利名称：高凝固性纤维蛋白原胶的制作方法以下结合实施例进一步说明本发明实施例1①纤维蛋白原的纯化取500ml猪血浆，加入95ml55％(v/v)的乙醇，使乙醇的终浓度为8％，在-3℃条件下搅拌1个时，低温(-4℃-4℃)离心收集沉淀，离心速度3000转/分，离心20-30分钟，收集的沉淀物加入溶解液(柠檬酸三钠0.6％，葡萄糖2.5％，氯化钠0.42％)适量溶解，然后用双缩脲法测定蛋白的浓度，最终将纤维蛋白原的浓度调至20mg/ml，分装入青霉素瓶中，每瓶5ml，在-40℃～-20℃冷冻至完全冻结，用冷冻干燥机冷冻干燥12-24小时，冷冻干燥品在4℃保存，为组份A。②组份B为磷酸缓冲盐溶液，渗透压为270～320mOsm，钠含量为148～163mM/L，氯含量123～135mM/L，PH6.8～7.8，多聚赖氨酸2mg/ml，过滤分装到无菌青霉素瓶中，每瓶2.5ml。③凝血酶的纯化把猪血浆溶于蒸馏水中，用1％浓度的醋酸调节PH至5.3。在离心机上离心15分钟，弃去上清液，收集沉淀物为凝血酶复合物；在30℃条件下，将凝血酶原复合物溶于1～2倍的0.9％NaCI溶液中，搅拌均匀，加入1.5％的氯化钙，搅拌15分钟，在4℃下放置2小时，保证凝血酶原转成凝血酶，离心弃去沉淀，上清液移入搪瓷桶中。加入等量的预冷至4℃的丙酮，搅拌均匀，在4℃冰箱中过夜。然后离心，收集沉淀，上清液回收丙酮。沉淀丙酮洗涤并研细，在冷箱中放置3天，然后过滤，沉淀分别用乙醇和乙醚洗涤一次，放置在于干燥器中干燥，得凝血酶粗品，把粗品溶于适量的0.9％NaCI溶液中，在0℃放置6小时以上，然后用滤纸过滤，滤出的沉淀再用0.9％NaCI溶液溶解，在0℃放置6小时以上，过滤，合并两次滤液，用1％醋酸溶液调节pH值5.5然后离心，弃沉淀，收集上层清液，在清液中加入2倍量预冷至4℃的丙酮，静置3小时，离心30分钟。收集沉淀，沉淀再浸泡于冷丙酮中。静置过夜，然后过滤，沉淀分别用无水乙醇、乙醚各洗涤一次，干燥即得凝血酶，凝血酶的活性为500-1000U/mg，将凝血酶用1％的白蛋白溶液溶解，分装青霉素小瓶中，每瓶凝血酶含量为75-125U，冷冻干燥，4℃保存。为组份C。④组份D为含有40mM/L CaCl2的磷酸缓冲盐溶液，pH为6.8-7.8。无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml。实施例2。①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，组蛋白3mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存，组份2。实施例3①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，聚二甲基二烯丙基氯化铵(分量200,000)1mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
实施例4①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，血小板第4因子2mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
实施例5①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，富组氨酸糖蛋白2mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
实施例6①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，鱼精蛋白2.5mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
实施例7①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，β-血栓球蛋白质1.5mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
实施例8①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，亚甲蓝2mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
实施例9①按实施例1中的方法制备纤维蛋白原，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，纤维蛋白原含量40mg/ml，链霉素2.5mg/ml，-20℃冰箱保存。组份1。
②按实施例1中的方法制备凝血酶，无菌过滤分装到青霉素瓶中，每瓶2.5ml，凝血酶为50U/ml，CaCl240mM，-20℃冰箱保存。组份2。
本发明的实施效果检验①实施例1的效果测试a.将组份A用组份B溶解，组份C用组份D溶解，溶解时间5分钟。
b.凝固时间测定，取组份A溶解液0.1ml加入小试管中，再加入组份C溶液0.1ml，用秒表计时，凝固时间9-12秒。
c.强度测定在直径3.57cm，高0.2cm(表面积为10cm2)。无菌器皿内，加入组份A和组份C的溶液各2ml，37℃条件下，放置10分钟，将膜从皿中完整取出，形状为膜状，有弹性。绕屈180°5次以上无发生断裂现象。
②实施例2至9的效果测试a.将组份1和组份2在37℃条件下溶解。
b.凝固时间测定，取组份1溶解溶液0.1ml加入小试管中，再加入组份2溶液0.1ml，用秒表计时，凝固时间9-12秒。
c.强度测定在直径3.57cm，高0.2cm(表面积为10cm2)。无菌器皿内，加入组份1和组份2的溶液各2ml，37℃条件下，放置10分钟，将膜从皿中完整取出，形状为膜状，有弹性。绕屈180°5次以上无发生断裂现象。


本发明涉及一种高凝固性纤维蛋白原胶,它由组份A冻干纤维蛋白原、组份B含有纤维蛋白原活性增强因子的生理缓冲盐溶液、组份C冻干凝血酶和组份D含有CaCl