专利名称：以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白的制作方法一、所属领域本发明涉及一种医学领域的蛋白注射剂，特别涉及一种用于临床骨折、骨不连、骨缺损等疾病治疗中可以注射使用的骨形态发生蛋白。为了实现上述目的，本发明采用的技术构思是，使用患者血液或血库健康成年人血液，通过低温离心法快速制备纤维蛋白原作为骨形态发生蛋白的载体，使用时通过凝血酶和抑肽酶的作用使纤维蛋白原/骨形态发生蛋白复合物在注射到体内后转化为纤维蛋白凝块。利用纤维蛋白凝块被机体缓慢吸收的特性使骨形态发生蛋白缓慢释放出来，从而使骨形态发生蛋白在创伤修复的全过程均发挥其生物学作用，达到诱导新骨形成和促进创伤修复的作用。所采用的技术方案是以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为(2～5)mg1mg(纤维蛋白原骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为4mg/ml～8mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为250IU/ml～400IU/ml凝血酶溶液为成分B；4)在成分B中加入浓度为0.5mg/ml～50mg/ml的抑肽酶。本发明的另一特点是，所述的牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性。本发明利用纤维蛋白原的溶解特性可制成注射剂，因而不仅可用于需要手术治疗的骨不连、骨缺损患者，还可以使用普通注射器经皮直接注射，因而可用于所有伴有骨损伤的患者。使用时以等体积的成分A和成分B分别加入双筒注射器的两个筒内，在注射的过程中混匀即可。本发明具有使用范围广泛、操作简便、治疗效果确切等优点。从人血中提取纤维蛋白再用于人体，不存在免疫原性和排斥反应，植入体内后无不良反应。尤其是在治疗前抽取患者自体血液还可以避免血液疾病的传播。由于仅使用血液中的血浆成分，其它成分处理后可以回输给患者，因而对患者的血液系统不会有不良影响。纤维蛋白使用前为液态，可在体内迅速固化，可以任意塑型。同时，纤维蛋白的止血、粘接作用有利于防治局部血肿的形成，为骨的再生和愈合提供良好的局部环境。 以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述。实施例1按本发明的技术方案，以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为2mg∶1mg(纤维蛋白原∶骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性；3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为8mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为250IU/ml凝血酶溶液为成分B；4)在成分B中加入浓度为50mg/ml的抑肽酶。实施例2按本发明的技术方案，以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为4mg∶1mg(纤维蛋白原∶骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性；3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为4mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为300IU/ml凝血酶溶液为成分B；4)在成分B中加入浓度为30mg/ml的抑肽酶。
实施例3按本发明的技术方案，以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为5mg∶1mg(纤维蛋白原∶骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性；3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为6mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为400IU/ml凝血酶溶液为成分B；4)在成分B中加入浓度为0.5mg/ml的抑肽酶。
实施例4按本发明的技术方案，以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白，按以下步骤制备1)从医院血库/血站获取健康成人抗凝血或治疗前无菌采取患者自体静脉血液；2)3000RPM离心20分钟分离血浆，冷冻离心法提取纤维蛋白原，加入牛骨形态发生蛋白提取物，比例为3mg∶1mg(纤维蛋白原∶骨形态发生蛋白)；将上述混合物-40℃冻干制成絮状物备用；牛骨形态发生蛋白提取物，是从小牛新鲜皮质骨中按常规方法人工提取的多种骨形态发生蛋白混合物，主要步骤为脱脂、脱蛋白，盐酸胍、尿素抽提，常温下干燥，经小鼠肌袋实验证实具有骨诱导活性；3)将纤维蛋白原/骨形态发生蛋白混合物用生理盐水配成浓度为6mg/ml的混悬液作为成分A；以氯化钙溶液配制浓度为350IU/ml凝血酶溶液为成分B；4)在成分B中加入浓度为15mg/ml的抑肽酶。
上述的氯化钙溶液配制浓度可在250IU/ml～400IU/ml之间调整，B中加入的抑肽酶浓度在0.5mg/ml～50mg/ml之间调整，都能够达到本发明的目的。
具体实例1骨折、骨折术后骨不连患者用本修复材料治疗过程如下手法复位，在电视X光机透视下观察骨折端对位满意后，取本材料10ml，透视下经皮注射到骨折断端。石膏或外固定架固定，4周后可见骨折愈合良好。表明本材料能有效地加快骨折愈合速度，对于骨不连的治疗可以避免第二次手术。
具体实例2椎体压缩骨折患者于手术前抽取静脉血液，制成纤维蛋白，并复合骨形态发生蛋白备用。通过手术将骨折复位或撑开压缩的椎体，使用内固定，将术前制备的纤维蛋白/骨形态发生蛋白与成分B混合后注射到椎体，常规方法关闭伤口。自体血液的细胞成分可以在手术过程中回输给患者以补偿手术中的失血。在此类创伤治疗中，本材料不仅能够促进骨折愈合，还能在椎体内部诱导新骨形成，恢复椎体原有的形态和力学强度。
注射器为专用设计，一次性使用。特征是1.双筒平行，容积均为5ml，两个推进器后端相连，使用一个推进手柄。2.两出口处通道为螺旋形，于末端汇合，便于两种成分混合均匀。3.外接针头3个，细针头为12号钢制普通针头，供经皮注射使用；粗针头为特制短针头，内径1.8mm，供手术中使用；喷头为特制，可使液体混匀后喷成雾状。
成分B中加入适量的抑肽酶，达到减缓纤维蛋白吸收速度的目的。
本发明的使用范围有矫形外科、神经外科、口腔外科等。
使用前将等体积成分A和成分B分别加入双筒注射器的两个筒内，外接专用针头，在电视X光机引导下经皮直接注射到损伤局部。
本发明的优点是促进骨折愈合，加速骨形成和骨愈合效果确切；使用简便，适应症广泛；组织相容性好，安全可靠。


本发明公开了一种以纤维蛋白为载体的注射型骨形态发生蛋白,适用于临床骨折、骨不连、骨缺损的治疗。它是以从患者血液或健康献血员血液中分离出来的纤维蛋白为载体,复合牛骨形态发生蛋白直接经皮注射于损伤局部,发挥载体的缓释作用和骨形态发生蛋白促进新骨生长和骨折愈合、加速创伤修复的作用。本发明不存在免疫原性和排斥反应,植入体内后无不良反应。纤维蛋白使用前为液态,可在体内迅速固化,可以任意塑型。同时,纤维蛋白的止血、粘接作用有利于防治局部血肿的形成,为骨的再生和愈合提供良好的局部环境。本发明经动物实验和临床试验证实治疗效果确切,适用范围广泛,操作简便,安全可靠。