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一种快速的基因表达载体构建连接方法

  • 专利名称
    一种快速的基因表达载体构建连接方法
  • 发明者
    吴霞, 李燕娥, 王霞, 马燕斌
  • 公开日
    2012年11月14日
  • 申请日期
    2012年7月24日
  • 优先权日
    2012年7月24日
  • 申请人
    山西省农业科学院棉花研究所
  • 文档编号
    C12N15/66GK102776219SQ201210257058
  • 关键字
  • 权利要求
    1.一种快速的基因表达载体构建连接方法,其步骤为(I)酶切基因酶切体系I 含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化,酶切体系II 转基因载体经限制性内切酶消化;(2)回收获得目的基因片段及酶切载体;(3)酶切产物的连接;(4)连接产物的转化;(5)转化产物的鉴定;其特征在于,所述的步骤(2)回收获得目的基因片段及酶切载体的步骤为步骤(I)的酶切体系I、II中分别加入体积为酶切体系I、II 3 5倍的无水乙醇,均在-20 _80°C环境下放置0. 5 lh,随后12000 13000rpm离心沉淀5 lOmin,弃上清,真空干燥,加入20W-30W的pH8. 0的TE缓冲液重新溶解,分别电泳检测目的基因片段及酶切载体浓度2.根据权利要求I所述的快速的基因表达载体构建连接方法,其特征在于,所述的步骤(I)中有含目的基因的T克隆载体具有氨苄霉素抗性,所述的转基因载体具有卡纳霉素抗性
  • 技术领域
    本发明涉及生物基因克隆表达技术,具体是一种快速的基因表达载体构建连接方法
  • 背景技术
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:一种快速的基因表达载体构建连接方法目前,较常 用的基因表达载体构建方法的步骤为(1)酶切基因酶切体系I:含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化,酶切体系II :转基因载体经限制性内切酶消化;以含有双酶切EcoR I与xho I位点的T克隆载体及植物转基因载体为例, 酶切体系I如下本发明涉及生物基因克隆表达技术,具体是一种快速的基因表达载体构建连接方法,弥补了现有的基因表达载体构建方法存在的缺陷,其步骤为(1)酶切基因酶切体系Ⅰ含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化,酶切体系Ⅱ转基因载体经限制性内切酶消化;(2)回收获得目的基因片段及酶切载体;(3)酶切产物的连接;(4)连接产物的转化;(5)转化产物的鉴定。本发明所述的快速的基因表达载体构建连接方法简单方便、实用性强,替换了凝胶电泳、EB染色等步骤,提高了科研人员的安全性,提高了工作效率,减少了试验环节所需费用,并能够有效地减少试验用EB对水资源等环境的污染。
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