专利名称：一种草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法氮和磷是草坪草生长必需的大量元素，在草坪草扶壮过程中需要追施氮、磷等化学肥料，否则会因氮、磷缺乏会引起草坪草发育不良，最终导致达不到刈割高度。化学肥料的使用对草坪草具有重要的扶壮作用。然而，施加化学肥料一方面增加草坪草养护难度和费用，尤其是磷肥市场缺口较大，磷矿的过度开发导致了磷矿资源的枯竭；另一方面草坪草对化学肥料的利用率低，未被吸收的营养会通过地表径流、渗漏等方式造成环境面源污染。草坪草扶壮剂是针对草坪草城市景观绿化功能而研制的生物菌剂，可在有效促进草坪草建植的同时，减少农用化学品流失的环境风险，具有绿色、环保、高效、安全的特点。生物肥料由于其核心为活性生物菌种，培养条件复杂、成本高、产量低、难以广泛应用和推广，急需一 种简单、快速、低成本和易于操作的生产方法。
本发明是要解决目前草坪草扶壮生物肥料制备方法复杂、耗时长、成本高、产量低、难以广泛应用和推广的问题，提供一种草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法。本发明草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法，按以下步骤进行一、土壤、河沙和蛭石分别过10目土壤筛，然后将土壤、河沙和蛭石按体积比2 5 3混合，作为基质，将基质于121°C下高压蒸汽灭菌2h，将花盆洗净晾干后紫外线灭菌30min ;二、将白三叶草种子用体积浓度为75%的酒精浸泡lOmin，然后用蒸馏水冲洗3遍，于30°C催芽；三、在每个花盆中先装入2kg灭菌的基质，喷洒无菌水至水从花盆底座渗出，将摩西球囊霉和根内球囊霉分别接种到基质中，接种量为每个花盆20个孢子，然后均匀撒上已发芽的白三叶草种子；四、在白三叶草长出三片叶子后，每隔10天在每个花盆中喷洒50%强度Hoagland营养液，每周浇无菌水一次，每次每个花盆浇水IOOOmL,培养20 30天后，不再加无菌水，直至白三叶草枯萎，去掉白三叶草地上部分，回收土壤及白三叶草根部，自然风干，将根部剪碎至I 2cm，将土壤打碎过10目土壤筛，与剪碎的根部混匀，作为复合菌剂；五、大田挖20 30cm深的土方，在土方的底部铺设隔离设施，去除土壤中杂物后将土壤回填至土方中，然后每平方米的大田土壤施用150mL福尔马林，拌匀，盖塑料膜，连续每天采集土样，采用平板计数法检测土壤中真菌和细菌的残留，至真菌和细菌无存活时，揭塑料膜，晾晒释放剩余的福尔马林，7天后将步骤四获得的复合菌剂与白三叶草种子混匀，复合菌剂与白三叶草种子的质量比是40 50 1，采用条播的方式进行播种，每天浇水一次；六、白三叶草生长20 30天后，不再浇水，直至白三叶草枯萎，去掉白三叶草地上部分，回收土壤及白三叶草根部，自然风干，放入通风干燥处保存，即得到草坪草扶壮生物肥料；其中步骤五中所述隔离设施为安全网、土工布或水稻育秧盘。草坪草的生态功能是景观绿化，在其扶壮过程中需要肥料，为实现其环保功能，不能施加一般的肥料，生物肥料是最佳的选择。本发明选择菌剂的优良扩繁宿主-白三叶草，培养20 30天后，孢子成熟后收获菌剂。本发明获得的草坪草扶壮生物肥料完全替代了草坪草扶壮过程中磷肥，部分替代氮月巴，明显减少化学肥料的用量，减轻了化学肥料对地表水和地下水造成的负面影响，同时该生物菌剂肥料属于环境友好型生物制剂，易于生产，适应性强，促生效果好，降低了草坪草扶壮用的成本，减轻了 N、P流失对周围水体的富营养化污染。本发明草坪草扶壮生物肥料对草坪草株高、地上及地下生物量的生长具有显著的促进作用，在草坪草扶壮过程中施用草坪草扶壮生物肥料后，可明显增强草坪草的营养生长，提高株高、地上及地下生物量的扶壮率，改善白三叶草对根际土壤中水解性氮、有效磷的利用效果。同时草坪草扶壮生物肥料能增强草坪草的抗逆性。本发明的方法快速、简单，可大范围生产菌肥，且其肥效持久，无须再度施加，即在草坪草扶壮阶段施加此肥料可促进本阶段草坪草的生长发育，具体体现在能够提高草坪草 光合作用效率，改善营养利用效果，缩短到达刈割高度时间。本发明草坪草扶壮生物菌剂肥料对常见豆科草坪草和禾本科草坪草均有明显的促生作用，为其在全国范围内推广使用提供实际依据。图I为六中生物肥料对白三叶草株高的影响；图2为六中生物肥料对白三叶草地上、地下生物量的影响；图3为
六中生物肥料对白三叶草根际土壤中水解性氮的吸收；图4为
六中生物肥料对白三叶草根际土壤中有效磷的吸收；图5为
六中生物肥料对早熟禾株高的影响；图6为
六中生物肥料对早熟禾地上、地下生物量的影响；图7为
六中生物肥料对早熟禾根际土壤中水解性氮的吸收；图8为
六中生物肥料对早熟禾根际土壤中有效磷的吸收。

，还包括各
间的任意组合。

一本实施方式草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法，按以下步骤进行一、土壤、河沙和蛭石分别过10目土壤筛，然后将土壤、河沙和蛭石按体积比2:5: 3混合，作为基质，将基质于121°C下高压蒸汽灭菌2h，将花盆洗净晾干后紫外线灭菌30min ;二、将白三叶草种子用体积浓度为75%的酒精浸泡lOmin，然后用蒸馏水冲洗3遍，于30°C催芽；三、在每个花盆中先装入2kg灭菌的基质，喷洒无菌水至水从花盆底座渗出，将摩西球囊霉和根内球囊霉分别接种到基质中，接种量为每个花盆20个孢子，然后均匀撒上已发芽的白三叶草种子；四、在白三叶草长出三片叶子后，每隔10天在每个花盆中喷洒50%强度Hoagland营养液，每周浇无菌水一次，每次每个花盆浇水IOOOmL,培养20 30天后，不再加无菌水，直至白三叶草枯萎，去掉白三叶草地上部分，回收土壤及白三叶草根部，自然风干，将根部剪碎至I 2cm，将土壤打碎过10目土壤筛，与剪碎的根部混匀，作为复合菌剂；五、大田挖20 30cm深的土方，在土方的底部铺设隔离设施，去除土壤中杂物后将土壤回填至土方中，然后每平方米的大田土壤施用150mL福尔马林，拌匀，盖塑料膜，连续每天采集土样，采用平板计数法检测土壤中真菌和细菌的残留，至真菌和细菌无存活时，揭塑料膜，晾晒释放剩余的福尔马林，7天后将步骤四获得的复合菌剂与白三叶草种子混匀，复合菌剂与白三叶草种子的质量比是40 50 1，采用条播的方式进行播种，每天浇水一次；六、白三叶草生长20 30天后，不再浇水，直至白三叶草枯萎，去掉白三叶草地上部分，回收土壤及白三叶草根部，自然风干，放入通风干燥处保存，即得到草坪草扶壮生物肥料；其中步骤五中所述隔离设施为安全网、土工布或水稻育秧盘。步骤一中高压蒸汽灭菌的压力是0. 25MPa。本实施方式步骤五中所述隔离设施能够透水并可 起到隔离作用。本实施方式得到草坪草扶壮生物肥料放入通风干燥处保存后，每隔一年要重新接种更新扶壮。本实施方式步骤三中的摩西球囊霉和根内球囊霉由《丛枝菌根(AM)对土壤中阿特拉津降解的研究》(宋福强，蔡柏岩，董爱荣，王庆贵，微生物实用技术生态环境应用学术研讨会。)的作者处得到。

二 本实施方式与
一不同的是步骤一所述土壤的pH值为7. 5，全氮含量为7. 34g/kg，全磷含量为16. 83g/kg。其它与
一相同。

三本实施方式与
一或二不同的是步骤三中基质和种子的质量比为40 I。其它与
一或二相同。

四本实施方式与
一至三之一不同的是步骤五中采用平板计数法检测土壤中真菌的残留的具体方法为取IOg土样放如90mL无菌水中，震荡，梯度稀释至10_2 10_4，接种到孟加拉红培养基中，接种量为IOOii L，25°C恒温培养箱中培养5d，然后进行平板计数。其它与
一至三之一相同。

五本实施方式与
一至四之一不同的是步骤五中采用平板计数法检测土壤中细菌的残留的具体方法为取IOg土样放如90mL无菌水中，震荡，梯度稀释至10_5 10_7，接种到牛肉膏蛋白胨培养基中，接种量为IOOy L，37°C恒温培养箱中培养30h，然后进行平板计数。其它与
一至四之一相同。

六本实施方式草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法，按以下步骤进行一、土壤、河沙和蛭石分别过10目土壤筛，然后将土壤、河沙和蛭石按体积比2:5: 3混合，作为基质，将基质于121°C下高压蒸汽灭菌2h，将花盆洗净晾干后紫外线灭菌30min ;二、将白三叶草种子用体积浓度为75%的酒精浸泡lOmin，然后用蒸馏水冲洗3遍，于30°C催芽；三、在每个花盆中先装入2kg灭菌的基质，喷洒无菌水至水从花盆底座渗出，将摩西球囊霉和根内球囊霉分别接种到基质中，接种量为每个花盆20个孢子，然后均匀撒上已发芽的白三叶草种子；四、在白三叶草长出三片叶子后，每隔10天在每个花盆中喷洒50%强度Hoagland营养液,每周烧无菌水一次，每次每个花盆烧水IOOOmL,培养30天后，不再加无菌水，直至白三叶草枯萎，去掉白三叶草地上部分，回收土壤及白三叶草根部，自然风干，将根部剪碎至1cm，将土壤打碎过10目土壤筛，与剪碎的根部混匀，作为复合菌剂；五、大田挖25cm深的土方,在土方的底部铺设安全网，去除土壤中杂物后将土壤回填至土方中，然后每平方米的大田土壤施用150mL福尔马林，拌匀，盖塑料膜，连续每天采集土样，采用平板计数法检测土壤中真菌和细菌的残留，至真菌和细菌无存活时，揭塑料膜，晾晒释放剩余的福尔马林，7天后将步骤四获得的复合菌剂与白三叶草种子混匀，复合菌剂与白三叶草种子的质量比是40 50 1，采用条播的方式进行播种，每天浇水一次；六、白三叶草生长30天后，不再浇水，直至白三叶草枯萎，去掉白三叶草地上部分，回收土壤及白三叶草根部，自然风干，放入通风干燥处保存，即得到草坪草扶壮生物肥料。步骤一中高压蒸汽灭菌的压力是0. 25MPa。实验I :将本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料均匀撒在白三叶草草坪中，用量为I斤/平方米，进行草坪草扶壮，为GM+GI组。另外，按照本实施方式的方法制备只接种摩西球囊霉的生物肥料，均匀撒在白三叶草草坪中，用量为I斤/平方米，为GM组；按照本实施方式的方法制备只接种根内球囊霉的生物肥料，均匀撒在白三叶草草坪中，用量为I斤/平方米，为GI组；以土壤作为对照，为CK组。生物肥料对白三叶草株高的影响如图I所示，由实验结果可知，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料与单独接种摩西球囊霉的相比，株高相当，无显著差异；但显著高于单独接种摩西球囊霉的生物肥料。对白三叶草地上、地下生物量的影响如图2所示，由实验结果可知，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料对白三叶草地上、地下生物量促进作用最强，显著高于任何一种单菌(p < 0. 05)，可显著提高植物地上、地下生物量，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料更有效的促进白三叶草同化物质的积累，对植物的生长更有益。对白三叶草根际土壤中水解性氮的吸收如图3所示，由实验结果可知，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料优于其他三组。对白三叶草根际土壤中有效磷的吸收如图4所示。实验2 将本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料均匀撒在早熟禾草坪中，用量为I斤/平方米，进行草坪草扶壮，为GM+GI组。另外，按照本实施方式的方法制备只接种摩西球囊霉的生物肥料，均匀撒在早熟禾草坪中，用量为I斤/平方米，为GM组；按照本实施方式的方法制备只接种根内球囊霉的生物肥料，均匀撒在早熟禾草坪中，用量为I斤/平方米，为GI组；以土壤作为对照，为CK组。 生物肥料对早熟禾株高的影响如图5所示，由实验结果可知，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料对早熟禾株高的生长最有益(株高21±1. 0cm)，显著好于单菌(p < 0. 05)(单独接种摩西球囊霉株高为17. 5cm±2. Icm,单独接种根内球囊霉株高为14. 5cm±3. 4cm)。表明本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料对早熟禾的促进作用优于单菌。对早熟禾地上、地下生物量的影响如图6所示，由实验结果可知，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料可显著提高早熟禾地上、地下生物量(P < 0. 05)，尤其是对早熟禾地上生物量的促进作用更为明显。本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料显著高于任何一种单菌(P < 0. 05)，使得植物地上、地下生物量分别提高90. 0%,84. 5%。说明本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料更有效的促进早熟禾同化物质的积累，对植物的生长更有益。对早熟禾根际土壤中水解性氮的吸收如图7所示，由实验结果可知，本实施方式制备的草坪草扶壮生物肥料效果显著好于单菌(P < 0. 05)。说明在促进早熟禾对根际土壤水解性氮吸收方面，本实施方式的生物肥料优于单菌。
对早熟禾根际土壤中有效磷的吸收如图8所示。在促进有效磷吸收上，本实施方式的生物肥料显著好于单菌(P < 0. 05)，说明在促进早熟禾对根际土壤有效磷吸收方面，本实施方式的生物肥料优于单菌。


一种草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法，涉及一种草坪草扶壮生物肥料的田间快速生产方法。是要解决目前草坪草扶壮生物肥料制备方法复杂、耗时长、成本高、产量低、难以广泛应用和推广的问题。方法将基质和花盆灭菌；对白三叶草种子催芽；将摩西球囊霉和根内球囊霉接种到基质中，撒白三叶草种子；长出三片叶子后浇水，培养20～30天后不再加水，至枯萎，回收土壤及根部，为复合菌剂；大田土壤施用福尔马林灭菌，将复合菌剂与白三叶草种子混匀，播种；白三叶草生长20～30天后不再浇水，至枯萎，回收土壤及根部，自然风干，于通风干燥处保存，即得草坪草扶壮生物肥料。本发明方法简单、快速、低成本和易于操作。用于生物肥料领域。