专利名称：一种稳定的复合脂溶性维生素组合物及其制备方法维生素是维持人体生命活动必需的ー类微量有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。维生素与其它营养素不同之处在于他既不供应能量也不构成机体组织，只需少量即可满足需要，一般不能在人体内经自身的同化作用合成，其中有的以辅酶或辅酶前体的形式參与酶系统的作用。正常人体同过食物即可获得人体所需的维生素，烧伤、手术、严重创伤、感染等可能引起超高代谢及医源性的饥饿或饥饿，这些将导致人体营养不良，包括维生素的缺乏，而营养状况对手术、烧伤、创伤的痊愈有着十分密切的关系，因此维生素营养支持在前述情况中的应用越来越广泛，对于严重的情况肠外营养支持必不可少。按溶解性分，维生素可分为脂溶性维生素和水溶性维生素，脂溶性维生素主要为维生素A、维生素E、维生素K、维生素D及其它们的类似物。维生素A具有生物活性的分子形式是视黄醛、视黄醇和视黄酸(即维生素A酸)， 维生素A在许多生命活动中，如视觉产生、生长、发育、分化、代谢，以及形态形成等都起着重要的作用；维生素D是麦角固醇的衍生物，在人体内的生理作用主要是调节钙、磷代谢， 促进钙、磷在肠内的吸收，也能促进肾小管对钙、磷的吸收，维持血钙、血磷在体内的平衡， 促进钙化和骨骼的正常发育，对防治儿童佝偻病、老年骨质疏松有重要作用；维生素E可保护多价不饱和脂肪酸免受氧化破坏，維持生物膜的正常结构，维生素E能阻滞不饱和脂肪酸过氧化反应，减少过氧化脂质的生成，当维生素E浓度过低吋，上皮細胞基底膜、内质网膜等也受到影响，由于维生素E对线粒体、内胞浆、网状组织和浆膜的磷脂有特殊的亲和力，能预防和阻止诱发的脂质过氧化作用，维生素E还能调节线粒体的呼吸速度并影响线粒体内細胞色素的含量，维生素E还可抑制脂多糖导致GMCs分泌的-OH及其继发的MDA积聚，抑制系膜細胞-OH的分泌与MDA积聚，促进细胞凋亡，井能抑制系膜細胞的异常增生；维生素K是肝脏合成因子II、VII、IX、X所必须的物质，维生素K缺乏可引起这些凝血因子合成障碍或异常，临床可见出血倾向和凝血酶原时间延长.。临床上单成分维生素注射剂如维生素E注射液、维生素ら注射液、维生素D3注射液利用其脂溶性而采用油为溶剂制备；目前国内上市的多种脂溶性维生素注射制剂有注射用脂溶性维生素、脂溶性维生素注射液。已有技术显示，维生素类成分大多理化性质不稳定，多对光、热、氧、金属离子、酸度等敏感，其贮存条件多要求较严格，如维生素D要求避光、密封、充氮、冷处保存，且维生素D2不如维生素D3稳定，更易发生降解。—些文献报道了改善药物稳定性的ー些方法，为制备得到稳定可靠的多种维生素注射剂，解决其稳定性及溶解性为主要手段，上市的脂溶性维生素注射液采用大豆油、卵磷脂为赋形剂制备成稳定的乳剂，并在冷处(2-10°C )贮存；注射用脂溶性维生素则采用聚 4山梨酯80为助溶剂；CN200510029352. 0公开了一种以大豆磷脂、胆酸钠为主要辅料的脂溶性维生素冻干制剂，但未提供其稳定性数据；CN200510085714. 8公开了一种脂溶性维生素制剂及制备方法，以聚山梨酯为助溶剂，其稳定性数据可以看出，其冻干制剂仍不稳定； CN200610054218. 0公开发一种采用磷脂与胆酸盐为助溶剂的脂溶性维生素、复方13种维生素冻干制剂，主药的稳定性优于目前常规处方制备的样品；CN200910061812.6公开了一种复方13种维生素的制备方法，助溶剂为聚山梨酯，主药包含维生素D2，从其稳定性数据来看，维生素A的稳定性还不理想；CN200810223046. 4公开了一种以聚山梨酯80、聚山梨酯 20、甘露醇、甘氨酸为赋形剂，以乙醇、盐酸半胱氨酸、亚硫酸氢钠为稳定剂的脂溶性维生素冻干制剂，其稳定性数据显示其主药稳定性良好；CN200910089635. 2公开了聚山梨酯、产品水分对注射用脂溶性维生素主药稳定性的影响，其稳定性数据是5°C保存，稳定性较好， 但在室温或40°C的稳定性是未知的；CN200910130919. 1公开了一种以聚山梨酯80、甘露醇为辅料，以二丁基羟基甲苯、对羟基叔丁基茴香醚、没石子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯中的一种或几种为稳定剂制成脂溶性维生素冻干制剂，从CN200910130919. 1稳定性试验数据可以看出，其冻干制剂仍不稳定。参照CN200810223046. 4实施例制备一批脂溶性维生素冻干制剂，制备了实施例 12样品，作了对比，在60°C放置1个月后，主药稳定性仍不理想，维生素D2含量降为71. 5% (还是优于未加入抗氧剂的实施例1样品)，维生素K1也有所降低。本发明的目的在于克服上述缺陷，提供一种稳定的注射用复合脂溶性维生素组合物，本发明同时提供了该组合物的制备方法。
本发明提供了一种稳定的复合脂溶性维生素组合物及其制备方法，其制造成本低，可常温贮存，稳定性优异，尤其可以使维生素D2、维生素K1中稳定性提高。维生素类药物不稳定，易氧化，常规有效的办法是加入抗氧剂，令人惊异的是，加入酸度缓冲剂，维生素込的稳定性大大改善，与其混合存在的维生素K1也同时具有良好的稳定性。本发明的酸度缓冲剂是一种能对溶液的酸度起稳定作用的物质，如弱酸及其共轭碱或弱碱及其共轭酸、高浓度的强酸或强碱、两性物质等组成。应用于本发明的酸度缓冲剂可以为枸椽酸、氢氧化钠、枸椽酸钠、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠、碳酸钠、醋酸、醋酸钠、酒石酸、酒石酸钠、乳酸之一或多种。优选实施方式是枸椽酸/氢氧化钠。通过测定发现优选含量为0. 0001 0. 02g/mL较好，优选 0. 0001 0. 04g/mL，最优选0. 0001 0. 002g/mL。其中酸度缓冲剂的用量以重量/体积计算，无论组合物是以液体形式还是以固体形式存在，均以该组合物当前的形态下的体积计算。例如，在制备注射用制剂时，在冷冻干燥前需要先配置成溶液，酸度缓冲剂的用量以该溶液的体积进行投料，在冻干后形成的固态物体积与溶液状态时的体积相同，因此对于固态物而言此时酸度缓冲剂的量仍以体积进行计算。本发明首先提供了一种复合脂溶性维生素水溶液组合物，该组合物也可用于制备注射用复合脂溶性维生素组合物，其中含有维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素K1或上述化合物的类似物、维生素A和助溶剂，任选组合物中含有医学上可接受的辅料，其特征在于该组合物含有酸度缓冲剂，可以为枸椽酸、氢氧化钠、枸椽酸钠、磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钠、碳酸钠、醋酸、醋酸钠、酒石酸、酒石酸钠、乳酸之一或混合物，优选为枸椽酸/氢氧化钠。酸度缓冲剂含量为0. 0001 0. 02g/mL，优选0. 0001L 0. 04g/mL，最优选0. 0001 0. 002g/mL。本发明的复合脂溶性维生素可由维生素A棕榈酸酯、维生素D2、维生素Ε、维生素 K1组成，及他们的类似物。本发明组合物中含有的活性成分中维生素A棕榈酸酯及其类似物可以是维生素A的酯，维生素A醇等，优选维生素维生素A棕榈酸酯、维生素A醋酸酯等。维生素D2及其类似物可以是维生素D2、维生素D3及阿法骨化醇等。维生素E及其类似物可以是维生素Ε、生育酚等。维生素K1及其类似物可以是维生素K1、维生素K2等。本发明的复合脂溶性维生素组合物和酸度缓冲剂可满足以下比例关系维生素A棕榈酸酯或其类似物沈40 3960IU维生素&或其类似物160 MOIU维生素E或其类似物7. 28 10.92mg维生素K1或其类似物0. 12 ‘ 0. 18mg酸度缓冲剂0. 3 3mg或维生素A棕榈酸酯或其类似物1840 2760IU
维生素A或其类似物320 乂480IU
维生素E或其类似物5. 12 7. 68mg
维生素K1或其类似物0. 16 ‘ 0. 24mg
酸度缓冲剂0. 3 3mg
或
维生素A棕榈酸酯或其类似物2000 3000IU
维生素D2160 240IU
维生素E或其类似物12 18mg
维生素K1或其类似物1. 6 -2. 4mg
酸度缓冲剂0. 3 3mg
本发明的各脂溶性维生素比例关系可以根据医学会、相关卫生部门推荐的相关 丨
南范围进行调整。 本发明的复合脂溶性维生素组合物的助溶剂，可选自聚山梨酯80、聚山梨酯20、 丙二醇、聚乙二醇400之一种或多种，如2.0% (w/v)的聚山梨酯80，4% (w/v)的聚山梨酯 80，或者上述2种或3种溶液的混合物。本发明的组合物中医学上可接受的辅料，可含稳定剂，稳定剂选自依地酸二钠、依地酸钙钠、龙胆酸乙醇胺之一种或多种，如0.01% (w/v)的依地酸钙钠，0.02% (w/v)的依地酸二钠，2% (w/v)的龙胆酸乙醇胺，或者上述2种或3种溶液的混合物。组合物也可含有赋形剂，赋形剂选自甘露醇、右旋糖酐40、右旋糖酐20、右旋糖酐70、葡萄糖、甘氨酸、麦芽糖、乳糖之一种或多种；如甘露醇，右旋糖酐40，葡萄糖，甘氨酸，麦芽糖单独成分作为赋形剂；赋形剂用量可以为3% 15% (w/v)，如4% (w/v)右旋糖酐40，9% (w/v)甘露醇，11% (w/v)甘氨酸等。本发明的組合物的制备过程中，可加入活性炭(注射剂)吸附热原，活性炭用量一般为0.01% 0.1% (w/v) 0本发明叙述中w/v
表示意义指重量/体积。本发明的組合物可以通过将本发明提供的脂溶性维生素水溶液按本领域常规的制备冻干制剂的方法制备得到。具体可以按以下方法操作，方法包括以下步骤取维生素A棕榈酸酷、维生素E、维生素K1或它们的类似物、维生素ら和聚山梨酯类助溶剂使溶解，加入注射用水适量，得脂溶性维生素溶液，备用；取稳定剂、酸度缓冲剂、赋形剂与注射用水溶解，分別或合并注射用水溶解，调节 PH值，并与上述脂溶性维生素溶液混合，pH值一般可调节为5. 5 9. 0，本发明的具体实施例调节PH值范围为6. 0 7. 0。加入适量活性炭，搅拌，过滤，加注射用水至全量，精滤，灌装，冷冻干燥，即得。由于维生素理化性质的不稳定性，制备过程优选在避光条件下进行，并尽可能在配制过程中充惰性气体以避免氧的影响，如充氮气；各维生素原料在配制过程中，为提高效率，可以根据其不同理化性质单独配制或部分性质类似的合在一起配制，如维生素D2用适量乙醇溶解后加入至维生素A棕榈酸酷、维生素E、维生素K1或它们的类似物和聚山梨酯类助溶剂的溶解液中。冷冻干燥エ艺为一般的エ艺，为本领域技术人员公知技木，可根据不同的生产设备、不同的赋形剂等作相应调整。如冷冻干燥エ艺可以为方法1 制品温度降至-40°C时维持1 3小吋，开启真空泵、罗茨泵及搁板加热， 使真空度不高于30pa，一次干燥30小时；然后将搁板温度升至30°C，二次干燥4小吋，即得。方法2 (1)待品温拉至-40°C，保温2小吋；(2)冷凝器制冷至-50°C以下，开启真空泵，干燥箱抽真空达13pa以下；(3)加热板层，按程序使品温升高将板温2小时升至-15°C将板温2小时升至-10°C将板温6小时升至-5 0C将板温4小时升至0 °C将板温12小时升至5°C将板温3小时升至10°C将板温1小时升至15°C将板温1小时升至25 °C将板温1小时升至；35で将板温在；35°C保温5小吋。(4)箱内真空压塞，进气出箱，以铝塑組合盖轧ロ。本发明的复合脂溶性维生素組合物主要成分含量測定方法可按以下方法进行
照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定。(避光操作)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂6 X 250mm)，柱温40°C，以甲醇-乙醇(15 25)为流动相A，以乙腈-水(60 5)为流动相B，按下列程序进行梯度洗脱时间(min)流动相A(%)
0. Ol3862
20. OO1000
30. OO1000
30. 103862
35. OOSTOP总流速为1. Oml/min,检测波长为^5nm，理论塔板数按维生素K1峰计算，应不低于5000，各峰之间的分离度均应符合要求。维生素D2峰、维生素E峰、维生素A棕榈酸酯峰与维生素K1峰的相对保留时间分别约为0. 7,0. 9，1. 3。对照品溶液的制备取维生素&对照品约12. 5mg,精密称定，置IOOml量瓶中，加无水乙醇适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇勻，精密量取1ml，置IOml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇勻，作为维生素D2对照品储备液；取维生素A棕榈酸酯对照品约22. 5mg (相当于4万单位)，精密称定，置5ml量瓶中，加无水乙醇适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇勻， 作为维生素A棕榈酸酯对照品储备液；取维生素K1对照品约19mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇勻，作为维生素K1对照品储备液；精密量取上述三种对照品储备液各1ml，置25ml量瓶中，另取维生素E对照品约2;3mg，精密称定， 置上述同一量瓶中，加无水乙醇适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇勻，作为对照品溶液。样品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物约1瓶的量于IOml容量瓶中，精密称定，加水适量使溶解并用水稀释至刻度，摇勻，作为样品溶液。测定法精密量取对照品溶液与样品溶液各20 μ 1分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，即得。本发明的专利在实施例13含量测定时，除将维生素D3对照品代替维生素&对照品外，可同法测定。本发明的稳定的注射用复合脂溶性维生素组合物具体实施例及稳定性试验等质量控制方法以上述方法检测，本发明的注射用复合脂溶性维生素组合物制剂质量控制方法并不局限于上述方法，可以根据本发明的注射用复合脂溶性维生素组合物各维生素成分及其类似物具体情况选择目前文献公开的或其他可行的方法。稳定性试验取实施例1 13制备的样品和市售品注射用脂溶性维生素(II)(华北制药集团制剂有限公司，批号09111704，辅料为吐温80和甘露醇)，分别在高温40°C、60°C的条件下放置1个月，按上述质量控制方法考察其外观、溶液澄明度与颜色、酸度、各主药成分含量等质量控制指标，并与O天的检测结果比较，各主药含量以O天的含量为参比，记为100%。结果表明实施例1 13与市售品在外观、溶液澄明度与颜色、酸度等质量控制指标上均符合规定，无明显变化。而在各成分含量控制指标，通过高温(40°C)的条件下放置1个月后，实施例2样品中维生素ら的稳定性显著优于实施例1和市售品，而将处方中维生素维生素ら换成维生素D3时(实施例13)，其维生素D3稳定性有较大提高，同样验证了维生素D3稳定性优于维
生素D2。在高温(60°C )放置1个月的条件下，实施例2 11热稳定性优于实施例1和市售品，如实施例1的维生素D2含量下降近一半，维生素K1含量明显降低；实施例12样品中加入了抗氧剂亚硫酸氢钠，维生素D2的稳定性优于实施例1，但仍与实施例2 11的相差较大，见表1、表2。表140°C 1个月试验含量结果


本发明涉及一种稳定的复合脂溶性维生素组合物，以及该复合脂溶性维生素组合物注射剂及其制备方法。该组合物为包含有维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素K1或它们的类似物和维生素D2及医学上可接受的辅料，其中医学上可接受的辅料含酸度缓冲剂，经无菌过滤、无菌生产工艺或冷冻干燥工艺制备而成的注射剂，与现有技术相比，本发明的组合物具有更好的稳定性，具有显著的进步。