加拿大一枝黄花在制备美白抗衰老类化妆品中的应用的制作方法[0002]加拿大一枝黄花(Solidago Canadensis Lour.),又叫北美一枝黄花,为菊科多年生草本植物，一枝黄花属，植株高150~300cm，密被绒毛茎直立，不分枝或极少分枝。叶互生，密细，两面被短毛；叶片长回状披针形。先端渐尖，基部渐狭；叶缘有浅锯齿，齿端呈小乳头状；叶片向下2 / 3处有二条明显的叶脉；叶柄极短，不抱茎，生长期4~11月。加拿大一枝黄花通过根和种子两种方式繁殖，具有超强的繁殖能力，三年就能迅速成片，其生长区里的其他作物、杂草则一律消亡。[0003]现有技术中并没有关于加拿大一枝黄花延缓皮肤衰老和美白作用的报道。
[0004]本发明所要解决的技术问题之一是提供一种加拿大一枝黄花的应用方法，即制备美白抗衰老类化妆品。[0005]为了解决上述技术问题，本发明提出下列技术方案:[0006]加拿大 一枝黄花在制备美白抗衰老类化妆品中的应用。[0007]加拿大一枝黄花作为唯一的活性物质在制备美白抗衰老类化妆品中的应用。
[0008]加拿大一枝黄花经粉碎后，生药粉末在制备美白抗衰老类化妆品中的应用。
[0009]加拿大一枝黄花经水提取后，提取液在制备美白抗衰老类化妆品中的应用。
[0010]加拿大一枝黄花经乙醇提取后，提取液在制备美白抗衰老类化妆品中的应用。
[0011]加拿大一枝黄花延缓衰老、美白的功效可以通过下列试验证明:
[0012]试验例I加拿大一枝黄花提取物延缓衰老和美白功效的试验
[0013]1.1主要试剂和仪器
[0014]1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH.)，分析纯，济南跃阳化工有限公司；酪氨酸酶，上海江莱生物科技有限公司；熊果苷和维生素C(VC)，分析纯，北京化学试剂公司。UV2401型紫外-可见分光光度计。
[0015]样品:(I)加拿大一枝黄花醇提取物(简称CT)。按下法制备:取加拿大一枝黄花全草，粉碎，按每I克生药加8mL的比例加入体积百分比为70 %的乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，减压回收乙醇，浓缩、干燥即得。
[0016](2)加拿大一枝黄花水提取物(简称ST)。按下法制备:取加拿大一枝黄花全草，粉碎，按每I克生药加IOmL的比例加入水，煎煮2次，每次2小时，合并提取液，滤过，浓缩、干燥即得。
[0017]1.2试验方法
[0018]1.2.1除自由基抗氧化能力检测[0019]1，1- 二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH.) 一种稳定的有机自由基，最大吸收波长为516nm，在乙醇溶液中，每个DPPH.可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型的紫色，当它与提供I个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅，其褪色程度与配对电子数成化学计量关系。因而可用分光光度法进行定量分析来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。其抗氧化能力用清除率来表示，清除率越大，则表明其抗氧化能力越强。实验通过DPPH.测加拿大一枝黄花提取物的抗氧化能力，以标准VC为阳性对照，比较它们抗氧化能力的大小。
[0020]1.2.1.1待测样品溶液的配置
[0021](1)加拿大一枝黄花醇提物组。
[0022]加拿大一枝黄花醇提取物和VC分别用70%乙醇水配制成为l、2、3、4、5mg / ml的
溶液，备用。每组样品溶液平行实验3次。
[0023]测试样1:2900 μ L DPPH ?液液(1 X l(T4mol / L70% 乙醇溶液)与 100 μ L 待测样
品溶液。
[0024]测试样2:2900 μ L DPPH.溶液(1 X 10_4mol / L70% 乙醇溶液)与 100 μ L 去离子水。
[0025]测试样3:2900 μ L70%乙醇与100 μ L待测样品溶液。
[0026](2)加拿大一枝水提物组。
[0027]加拿大一枝黄花水提取物和VC分别用去离子水配制成为l、2、3、4、5mg / ml的溶
液，备用。每组样品溶液平行实验3次。
[0028]测试样I:2900 μ L DPPH ?液液(I X 1θΛιο1 / L70%乙醇溶液)与100 μ L待测样
品溶液。
[0029]测试样2:2900 μ L DPPH.溶液(I X 10_4mol / L70% 乙醇溶液)与 100 μ L 去离子水。
[0030]测试样3:2900 μ L去离子水与100 μ L待测样品溶液。
[0031]1.2.1.2 测试方法
[0032]3个测试样品液同时配制好后，在25°C下恒温反应30min，转移至2mL比色皿中，于516nm处测吸光度A。按式⑴计算对自由基的清除率:
[0033]清除率=[(A2+A3_A1)/ A2] X100%(I)
[0034]式中Al为待测样品组的吸光度值;A2为空白组的吸光度值;A3为待测样品组在反应体系中自身的吸光度值。
[0035]1.2.2美白功效检测
[0036]酪氨酸酶是黑色素细胞合成反应的限速酶，具有酪氨酸羟基酶和多巴羟基酶两方面活性。样品对酪氨酸酶抑制作用越好，美白效果越明显。酪氨酸酶催化酪氨酸生成多巴，多巴转化生成多巴醌，多巴醌呈红褐色，在475nm处有最大吸收值，利用分光光度计测定加入美白剂和未加美白剂反应中生成多巴醌量的变化来检测美白剂对酪氨酸酶的抑制率。实验通过抑制酪氨酸酶活性的方法检测加拿大一枝黄花提取液美白功效，以熊果苷为阳性对照，比较它们美白功效的大小。
[0037]1.2.2.1待测样品溶液的配置
[0038](1)加拿大一枝黄花醇提物组。[0039]加拿大一枝黄花醇提物和熊果苷分别用70%乙醇配制成质量分数为2、4、6、8、10mg/ml的溶液，备用。每组样品溶液平行实验3次。
[0040](2)加拿大一枝黄花水提物组。
[0041]加拿大一枝黄花水提物和熊果苷分别用去离子水配制成质量分数为2、4、6、8、10mg/ml的溶液，备用。每组样品溶液平行实验3次。
[0042]1.2.2.2 测试方法
[0043]测试样1:0.5mL的L-酪氨酸溶液(质量分数0.1 % ) +2.0mL磷酸缓冲液(pH=6.8)+0.5mL酪氨酸酶溶液(用磷酸缓冲液配置，质量浓度为200 μ g / mL)；
[0044]测试样2:2.5mL磷酸缓冲液(pH=6.8) +0.5mL酪氨酸酶溶液(用磷酸缓冲液配置，质量浓度为200 μ g / mL)；
[0045]测试样3:0.5mL的L-酪氨酸溶液(质量分数0.l%)+0.5mL测试样品溶液+1.5mL磷酸缓冲液(pH=6.8)+0.5mL酪氨酸酶溶液(用磷酸缓冲液配置，质量浓度为200 μ g/mL)；
[0046]测试样4:0.5mL的测试样品溶液+2.0mL磷酸缓冲液(pH=6.8) +0.5mL酪氨酸酶溶液(用磷酸缓冲液配置，质量浓度为200 μ g/mL)。
[0047]4个测试样品液同时配制好后，在25°C下恒温反应3.5h，转移至2mL比色皿中，于475nm处测吸光度A，按式(2)计算对酪氨酸酶的抑制率:
[0048]抑制率=[1-(A3 _A4)/ (A1-A2) ] X100%(2)
[0049]式中Al为空白组的吸光度值;A2为反应体系自身的吸光度值;A3为待测样品组的吸光度值;A4为待测样组在反应体系中自身的吸光度值。
[0050]1.3.试验结果
[0051]1.3.1清除自由基抗氧化能力
[0052]加拿大一枝黄花提物和VC溶液清除自由基抗氧化能力的比较见表1。从表1可知，加拿大一枝黄花醇提取物、水提取物具有体外清除自由基抗氧化的能力，清除效果越接近VC。可以作为延缓衰老化妆品的添加剂。
[0053]表1加拿大一枝黄花提取物抗氧化能力
[0054]