专利名称：一种适于榆属品种区分和鉴定的issr指纹图谱构建方法榆树为榆科(Ulmaceae)榆族(Ulmeae)的榆属(Ulmus)植物的总称。全世界约 40余种，分布于北半球。我国榆属资源非常丰富，遍及全国，共有25种。榆属植物耐旱，耐盐碱，适应性强，木材坚韧，具有较高的生态适应性和经济价值，多数榆属品种可塑性强，即可作为孤植树、行道树，也可剪型成为绿篱、盆景，具有很高的观赏价值和应用价值，因此， 具有其他树种不可替代的优势，一直是我国北方尤其是盐碱地园林绿化中的主要树种。因此对榆属新品种的培育一直是育种人员的研究热点。目前，中国分布的有代表性榆属种、品种及类型，以及选出的优良无性系品种大概在88份左右，但对于这些品种的鉴定仍只是基于传统的形态鉴定法依赖于品种表型差异，而形态的表现受环境影响较大，且形态鉴定法工作量大、鉴定周期长、成本高、受季节限制。而同工酶和种子贮藏蛋白多态性不够丰富，且同工酶有组织和器官特异性、稳定性差，这就给榆属品种鉴定、榆属种质资源创新带来了困难。分子标记技术具有多态性好、遗传稳定、不受环境条件影响等优点，已开始广泛应用于作物品种鉴定与纯度检测中。目前，应用较多的是ISSR、SSR、RAPD、RFLP和AFLP等分子标记。简单重复序列多态性(Inter-simple sequence Repeat Polymorphism, ISSR)是由 Zietkiewicz于1994年提出的。ISSR通常为显性标记,呈Mendel式遗传,具有很好的稳定性和多态性，因而是非常理想的分子标记，可用于构建PCR为基础的分子图谱。ISSR分子标记已用于遗传多样性分析、绘制DNA指纹图谱、品种鉴定等许多研究领域，潜力很大。ISSR 技术利用基因组中有关SSR序列的信息，结合RAPD技术优点，克服了 SSR和RAPD标记技术的某些缺点；与RFLP、AFLP相比，ISSR更快捷、成本较低、DNA用量小、安全性较高。对榆属植物的遗传多样性的研究、染色体的研究、ISSR、RAPD及AFLP等分子标记技术在榆树中的应用研究等尚处于起步甚至空白阶段。除了白榆之外的其它榆属树种，则基本上没有开展指纹图谱等遗传研究。
本发明的目的在于提供一种适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法。适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法按以下步骤进行一、DNA 提取以不同榆树品种成年植株为材料，取新生叶片采用适合提取榆树DNA的改良CTAB 法提取DNA，取部分DNA溶液测其浓度，稀释至20ng/uL，于_20°C保存备用；二、ISSR-PCR扩增及电泳检测采用25μ L 反应体系中，10XBuffer(Mg2+free)2. 5μ L，dNTPs O. 25mmol/L，引物800pmol/L, DNA 模板 30ng, Taq 酶 I. 5U, MgCl2 2. 5mmol/L ；PCR扩增程序条件为94°C预变性5min，35个循环，每个循环包括，94°C变性45s， 退火lmin,72°C延伸I. 5min,结束循环后72°C延伸6min,4°C保存；用含O. 5μ 1/mlEB的I. O %琼脂糖凝胶，在IXTBE缓冲液中，以2. 5V/cm2的电场强度电泳，在紫外凝胶成像系统上观察并照相、记录；三、DNA指纹图谱构建根据每条引物呈现的条带信息建立指纹图谱以榆树品种编号和扩增谱带带型为纵列，以每条谱带的位点编号为横行，在每一横纵交结处，有扩增谱带用“ I”表示，没有扩增谱带用“O”表示，分别制得每条引物对不同品种的DNA指纹图谱表，以引物FI-55对35个偷树品种构建的指纹图谱为一种适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法，它涉及一种ISSR指纹图谱构建方法。方法一、DNA提取；二、ISSR-PCR扩增及电泳检测；三、DNA指纹图谱构建；四、利用构建的DNA指纹图谱进行榆属品种鉴定，即完成。本发明有利于对榆属品种进行快速、准确的鉴定，与常规的种植检验和生化检验相比，不受作物生长环境和季节的影响，结果更稳定、可靠，且省时省力；构建DNA指纹图谱和鉴定技术使ISSR分子标记技术在植物品种鉴定、亲缘关系分析、植物种质资源创新和分子标记辅助育种中的广泛推广应用打下良好的基础；操作简单、直观实用等特点。