专利名称：用于局部应用的新的协同药物组合物的制作方法烧伤是皮肤所经历的任何由热、冷、电、化学品、摩擦或辐射引起的极端情况。烧伤伤害一般伴随组织液和电解质失衡、烧伤区域的减速愈合、代谢紊乱、肌肉分解代谢和各种其他的重要器官并发症，并且还可以具有继发性并发症，如细菌和/微生物感染。这些并发症的每一种需要不同的药剂/药物来提供拯救生命时的综合烧伤管理。烧伤相关的伤害和死亡是东南亚的主要问题，特别是在发展中国家，如印度。根据WHO报道，东南亚区域占全球负担的近10%，仅印度每年有35，000例烧伤相关的死亡。即使在发达国际，例如美国，每年估计210万美国人寻求烧伤的医疗处理。烧伤患者死亡率的主因中的一种是严重的全身感染。这些感染的主要进入途径是未处理的烧伤表面暴露于各种细菌和病原体。各种因素，例如皮肤屏障的破坏、大的皮肤细菌负荷、正常菌群转成条件病原体的可能性以及免疫系统的严重抑制，促成烧伤受害者的败血症，其通常是威胁生命的[I]。烧伤表面和伤口缝合的早期上皮再形成的适当伤口管理是烧伤患者的治疗和预后的重要步骤。感染控制是在预防继发性感染以及维持适当的烧伤愈合过程中的非常重要的过程。虽然在烧伤的细菌平衡的建立中使用局部抗微生物剂是必要的，但是它伴随延迟的烧伤愈合，其中皮肤增殖和胶原沉积的过程起主要作用[2]。一些研究显示，烧伤愈合过程被延迟，这对于二级和三级烧伤是显著的，因为利用其受体的生长促进因子如重组人表皮生长因子(rh-EGF)或血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)的产生被延迟或减少。重组人表皮生长因子rh-EGF属于通过结合靶细胞上的受体激酶来调节细胞增殖、迁移和分化的生长因子家族[3]。对于许多细胞类型，包括平滑肌细胞，已经显示rh-EGF用作有效的促细胞分裂原，还用作分化因子[4]。动物中的实验研究已经说明，rh-EGF的局部应用加速了部分厚度伤口和二级烧伤的表皮再生速率[5]。rh-EGF是分子量为6. 2kDa的53个氨基酸的蛋白，并且通过重组基因技术获得。构建了编码合成的rh-EGF多核苷酸序列的新载体，所述多核苷酸序列在大肠杆菌(E.coli)中过表达并被纯化以获得> 98%纯的蛋白[6]。在伤口愈合过程中，通过EGF受体由rh-EGF肽提供了细胞增殖信号。EGF受体具有酪氨酸激酶跨膜结构域以及胞质结构域和胞外结构域，其参与rh-EGF结合。这导致EGF受体二聚化、该受体的自体磷酸化和其他蛋白的酪氨酸磷酸化。这激活了促细胞分裂原激活的蛋白激酶(MAP激酶)途径，最终引起转录因子(例如C-Fs)磷酸化以产生促进增殖的AP-I和ELK-I。JAK激酶响应于rh-EGF的对STAT-I和STAT-3转录因子的激活促成增殖信号传导。而且，由rh-EGF活性蛋白激酶C诱导的磷脂酰肌醇信号传导和钙释放是EGF信号传导的另一组成部分。上述过程吸引细胞进入伤口并刺激其增殖，提高肉芽组织的形成速率并增加胶原生成[7，8]。尽管生长因子(如rh-EGF)帮助愈合烧伤，但重要的是预防烧伤管理期间引起的感染。重组人表皮生长因子 rh-EGF(REGEN-D,BharatBiotech International Limited)被克隆并在大肠杆菌中过表达，通过显著减少愈合持续时间而显示了增强的烧伤愈合。但是烧伤相关风险是微生物感染入侵。这是抗微生物剂在烧伤管理中发挥重要作用的地方。现有技术中，各种局部抗细菌/抗微生物剂可用于伤口护理，如杆菌肽、硫酸多粘 菌素B、新霉素、聚维酮碘、醋酸磺胺米隆乳膏、硝基糠腙、艮他霉素等。杆菌肽是有效对抗革兰氏阳性球菌和杆菌的多肽抗生素。杆菌肽还可增强伤口的上皮再形成，尽管它对角质形成细胞增殖没有影响。抗性菌株的发生率不可能增加，因为杆菌肽对细菌质膜的性质起作用，而不对分子合成起作用[9]。硫酸多粘菌素B是有效对抗革兰氏阴性生物的简单的碱性肽抗生素。硫酸多粘菌素B引起角质形成细胞增殖的更大减少[10]。新霉素是广谱抗生素，并且对于革兰氏阴性生物特别有效。然而，使用新霉素更频繁地出现副作用，如过敏反应、特别是皮疹[11]。聚维酮碘是有效对抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的杀菌剂。已经显示临床浓度的聚维酮碘体外对于人成纤维细胞和角质形成细胞是毒性的。还报道了聚维酮碘被伤口渗出液失活。该局部药剂可能硬化而非软化伤口焦痂，因此增加了伤口清创的难度和不适。醋酸磺胺米隆是甲基化的局部磺胺化合物。该药物具有宽范围的抗细菌活性，对抗大部分革兰氏阴性和革兰氏阳性病原体。然而，磺胺米隆的使用可能抑制上皮再形成。磺胺米隆抑制多形核白细胞(PMN)和淋巴细胞活性[16]。硝基糠腙化合物是有效对抗金黄色葡萄球菌(S. aureus)、肠杆菌(Bnterobactor)和大肠杆菌的广谱抗细菌剂，但是对铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)效力较差，并且没有显著的杀真菌活性。已经显示硝基糠腙对在培养物中的角质形成细胞的生长和迁移具有有害作用[17]。美国的烧伤中心不常使用硝基糠腙。艮他霉素对于革兰氏阴性微生物非常有效。可能产生对艮他霉素的抗性，并且该抗性必然限制该药物治疗的使用。已经显示艮他霉素抑制PMN的活性。已经报道了艮他霉素的皮肤过敏性[20]。磺胺嘧啶银(SSD)是作为I %水混溶乳膏制备的硝酸银和磺胺嘧啶钠的局部磺胺化合物。磺胺嘧啶银有效对抗大范围的菌系，特别是革兰氏阴性细菌(如大肠杆菌、肠杆菌、克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌)和革兰氏阳性细菌(如金黄色葡萄球菌和白色念珠菌(Candida albicans))。在可用于烧伤的各种局部抗微生物剂中，以上指出的那些中的一些，磺胺衍生物近年来在革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌感染所感染的不同程度烧伤的治疗中享有当之无愧的声誉，同时有效对抗酵母。在磺胺类药中，在大多数烧伤患者中被选择用于预防和治疗的药物是磺胺嘧啶银(SSD)。SSD是有效的广谱抗微生物剂，通常加入用于烧伤的局部乳膏。事实上，最近五十年以来，SSD已经常规用于治疗微生物感染的不同程度烧伤。过去的研究显示，SSD抑制对其他抗微生物剂抗性的细菌，并且该化合物优于许多其他抗微生物剂。它作用于微生物的细胞膜和细胞壁以产生其杀细菌作用。银从制剂中以选择性地对细菌有毒性的浓度缓慢释放。银还损伤细菌细胞的DNA。磺胺嘧啶，如其他磺胺类药，通过与对氨基苯甲酸(PABA)竞争而抑制细菌的二氢叶酸的合成。它不对人类细胞起作用。另一种抗微生物剂，即葡萄糖酸氯己定(CHG)是强大的相对无毒的杀菌剂，其在目前的临床实践中被广泛认可[18]。CHG是重要的杀菌剂、消毒剂、抗细菌牙洗剂和 防腐剂。它具有宽的抗微生物谱，并且有效对抗革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、病毒和真 菌。CHG结合细菌细胞壁和胞质组分，导致改变的渗透平衡和胞质组分沉淀。在低浓度下，氯己定是抑菌剂；在高浓度下，它是杀菌剂。葡萄糖酸氯己定是结合角质层的二双胍(bisbiguanide),提供了持续的杀细菌和杀真菌活性。它在有机材料(例如全血)存在下不失去其效力。CHG被吸附至微生物的细胞壁，引起吸收材料从多种细菌的泄漏，并且影响蛋白结构，抑制例如膜结合的ATP酶[19]，改变蛋白构型并促进细胞对多粘菌素的摄取。尽管SSD是最近五十年以来用于烧伤的标准治疗，但是一些研究显示，该化合物延迟了伤口愈合过程，这对于二级和三级烧伤是显著的，因为利用其受体的生长促进因子的产生被延迟或减少。而且，从烧伤处吸收银导致银毒性，这导致皮肤再生的损害和皮肤组织机械强度降低。针对人皮肤成纤维细胞的几项体外研究显示了随递增浓度的SSD和醋酸磺胺米隆而累进的细胞毒性。在相同研究中，人皮肤成纤维细胞预先暴露于EGF、碱性成纤维细胞生长因子或血小板衍生的生长因子导致了人类皮肤成纤维细胞对抗SSD效应的细胞保护[29] ο已经报道了细菌对银耐受的案例。Cason等人早在1966年报道了烧伤中革兰氏阴性杆菌中的这种案例[21]。在20世纪70年代末，出现耐受SSD的革兰氏阴性分离株(阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、斯氏普罗威登斯菌(Providencia stuartii)和铜绿假单胞菌)对烧伤感染或定殖的爆发的几个报道。显然，暴露于银可以选择抗性微生物，并且这可以在其中广泛使用银时在固有银抗性细菌的优势中发挥重要作用。Li等人报道了通过在体外反复暴露于递增浓度而使细菌发展对高浓度银(>1024ppm)的耐受性[27]。与使用SSD治疗烧伤相关的缺点导致Bharat BiotechInternationalLimited (BBIL)开发了包含SSD和rh-EGF的制剂。该组合有助于rh-EGF的延长时期的释放和对于最佳伤口愈合效果必需的银递送的限制。该SSD和rh-EGF组合的最重要功能是rh-EGF针对SSD的细胞保护作用，并且还通过EGF的合作补充来帮助逆转受损烧伤愈合过程。结果确立了该组合通过加快烧伤患者的伤口愈合过程来帮助逆转银在那里的细胞毒效应。但已经提出了对临床样本中报道的由于渗透屏障导致的对发展SSD的细菌抗性和银抗性生物的可能性的担忧。使用BBIL的rh-EGF和SSD的组合进行有关EGF进入血流的渗透性的研究，结果发现为阴性，这清楚地表明，在BBIL产生的rh-EGF不进入血流。SSD与BBIL的rh-EGF的组合在烧伤患者中的试验显示了应用rh-EGF对皮肤和皮下烧伤的愈合过程的加速效力，这样导致皮肤具有与正常皮肤相同的外观、弹性和颜色并且主要成就是没有肥大性疤痕。这些证据显示rh-EGF对愈合的作用，可能是由于其促细胞分裂效应。虽然rh-EGF和SSD的组合照顾了通过逆转SSD效应延迟伤口愈合的问题，在该制剂最重要的缺点在于，由于SSD的不可渗透能力而常发现磺胺抗性。尽管存在使用银离子管理感染的医疗益处，但已经提出对发展细菌抗性的可能性的担忧，并且已经暗示与抗生素交叉抗性的关联。已经在临床和环境样本中报道了银抗性生物。SSD与EGF的组合只能防止由于银的细胞毒效应并帮助逆转受损的伤口愈合过程。但这种组合不能有效对抗微生物由于渗透屏障对SSD的抗性。这种组合不足以阻止抗银微生物的感染，并且这可能会导致继发性感染的起因，继发性感染可能延长伤口愈合过程，而且还严重威胁烧伤。现有技术中已经测试并使用了大量的抗微生物剂。其中最常见药剂之一是磺胺嘧啶银(SSD)，它已经单独或以与其他抗微生物剂(如葡萄糖酸氯己定(CHG))的组合或以·SSD 与 rh-EGF 的组合(如 Bharat BiotechInternational Limited 所使用的)使用。然而，现有技术制剂都没能提供更广谱的覆盖、更快伤口愈合而没有抗性发展的风险、金属离子毒性、细胞毒性等。发明目的本发明的主要目的是提供用于制备局部制剂的广谱药物组合物，所述局部制剂将用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病。本发明的另一个目的是提供包括抗微生物剂/抗细菌剂和促细胞分裂蛋白的新的局部药物制剂，其具有更广的抗细菌/抗微生物谱并且有效对抗SSD抗性微生物而没有或具有可忽略的副作用。本发明另一个目的是提供含有任何一种生长因子的具有更好和更快伤口愈合性质的新的局部药物制剂。本发明另一个目的是提供乳膏、凝胶或液体形式的新的广谱局部药物制剂，其具有更长的稳定性和贮存期限。发明概述公开了用于制备用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病的局部制剂的新的协同广谱药物组合物，其中所述制剂可以是乳膏、凝胶或液体形式。本发明的新的协同组合物包括至少三种协同活性成分和一种或多种非活性成分。协同活性成分包括一种或多种广谱杀菌剂、一种或多种广谱抑菌剂和促细胞分裂生长因子。非活性成分被用来为制剂提供基底、渗透性和稳定性，并且包括载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂和柔肤剂和一种或多种其他组分。在本发明的一个优选实施方案中，促细胞分裂蛋白是BharatBiotechInternational Limited开发的重组人表皮生长因子(rh-EGF) (REGEN-D )或血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)。杀菌剂和抑菌剂选自由以下组成的组杆菌肽、磺胺嘧啶银(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚维酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。在本发明的优选实施方案中，广谱杀菌剂是磺胺嘧啶银(SSD)，并且广谱抑菌剂是葡萄糖酸氯己定(CHG)。制剂的协同非活性成分选自由以下组成的组PEG_30 二聚羟基硬脂酸酯、异十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化钛、聚羟基硬脂酸、硬脂酸铝、矾土、硫酸镁、硬脂酸、山梨糖醇、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、氢氧化钠、EDTA 二钠、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、二棕榈酰羟脯氨酸、Bois II 、鲸蜡醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、轻质液体石腊、pemulen TR-1> carbopol ultrez、甘露糖醇和净化水。本发明的新的协同组合物具有协同效应，如更广的抗微生物和/或抗细菌谱、对 抗SSD抗性微生物的效力、更好且更快的伤口愈合、SSD细胞毒性的逆转、具有持续抗细菌/抗微生物活性的制剂的更长的稳定性和贮存期限。各种试验和测试结果已经显示，该组合物最适合不同程度的烧伤，并且该新的协同组合物还可用于其他适应症，如伤口、皮移植片、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡。研究结果清楚指示，所述的新制剂在不同程度烧伤中非常有效，并且还用于烧伤的快速愈合而无任何感染。对这些新制剂进行稳定性研究，该新制剂的实时和加速时间稳定性研究显示，该组合是稳定的，且在无任何感染的烧伤的快速愈合中更有效。包含rh-EGF、磺胺嘧啶银(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)的制剂的新的协同组合物阻止微生物对银的抗性作用，并帮助银在烧伤中的渗透。制剂中即使低浓度的CHG也帮助银在烧伤中的渗透，从而增强银针对抗性微生物的效力。BBIL的rh-EGF、SSD和CHG的这种协同组合的选择原理是，磺胺抗性经常是归因于渗透屏障，并且公知氯己定能够影响该屏障，其次是该组合在烧伤治疗中具有与SSD相当的预防性质，并且在前者中的任何一个均未形成抗性，并且使用制剂的三种药剂比单独使用rh-EGF+SSD的伤口愈合过程更快。该新的协同组合帮助rh-EGF逆转银效应，并且还有效对抗广谱的对银抗性的微生物，其中通过添加低浓度的CHG而增加银渗透来阻止该抗性。由于CHG和SSD之间的协同相互作用，获得了组合物的协同结果。制剂的CHG增加了 SSD的抗细菌效力。而且，对极高浓度SSD抗性的微生物也可以在SSD与本发明制剂中CHG组合使用时被杀伤。假单胞杆菌和葡萄球菌菌株的一些菌种对磺胺的抗性是由于以上段落中解释的屏障机制。但是对于CHG和SSD组合，结论是CHG没有充分改变膜以允许含氮碱基、核苷酸或核苷外流，改变足以允许磺胺喃唳(sulphadizine)分子进入,从而使烧伤中的微生物彻底减少。因此，CHG和SSD与本发明新制剂中BBIL的rh_EGF的协同效应通过局部预防作用提供了对烧伤感染的最有效控制，并且用于治疗。附图简述图I是显示制剂中使用不同浓度rh-EGF的就动物数目而言的伤口愈合百分比的几何表示。图2是显示制剂中使用不同浓度rh-PDGF-BB的就动物数目而言的伤口愈合百分比的几何表示。图3是显示使用不同制剂组合物的烧伤患者的伤口愈合百分比的几何表示。图4是显示通过ELISA方法评估新制剂中rh_EGF含量的几何表示。图5是新制剂对金黄色葡萄球菌的动力学比较的图解表示。图6是本发明制剂的加速稳定性研究的几何表示。图7是本发明制剂的实时稳定性研究的几何表示。详述 本文公开了本发明的详细实施方案，然而要理解，公开的实施方案仅是本发明的示例，本发明可以各种形式实施。因此，本文公开的具体结构和功能细节不应当被解释为限制性的，而仅仅作为权利要求的基础并作为教导本领域技术人员以基本上任何适当详细结构不同地利用本发明的代表性基础。而且，本文使用的术语和短语意图不是限制性的，而是提供本发明的可理解的描述。本发明涉及用于制备用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡、糖尿病性足溃疡和其他皮肤疾病的乳膏或凝胶或液体形式的局部制剂的新的协同广谱药物组合物。本发明的新的协同组合物包括至少三种协同活性成分和一种或多种非活性成分。协同活性成分包括一种或多种广谱杀菌剂、一种或多种广谱抑菌剂和促细胞分裂生长因子。非活性成分被用来为制剂提供基底、渗透性和稳定性，并且包括载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂和柔肤剂和一种或多种其他组分。在本发明的一个优选实施方案中，促细胞分裂蛋白是BharatBiotechInternational Limited开发的重组人表皮生长因子(rh-EGF) (REGEN-D )或生长因子，如血小板衍生的生长因子(rh-PDGF-BB)。杀菌剂和抑菌剂选自由以下组成的组杆菌肽、磺胺嘧啶银(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚维酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。在本发明的优选实施方案中，选择的广谱杀菌剂是磺胺嘧啶银(SSD)，并且广谱抑菌剂是葡萄糖酸氯己定(CHG)。制剂的协同非活性成分选自由以下组成的组PEG_30 二聚羟基硬脂酸酯、异十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化钛、聚羟基硬脂酸、硬脂酸铝、矾土、硫酸镁、硬脂酸、山梨糖醇、对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、氢氧化钠、EDTA 二钠、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、二棕榈酰羟脯氨酸、Bois II 、鲸蜡醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14异链烷烃、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、轻质液体石腊、pemulen TR-1> carbopol ultrez、甘露糖醇和净化水。在本发明的一个优选实施方案中，新的协同组合物以产生协同效应的期望比例包括促细胞分裂蛋白(rh-EGF)、杀菌剂(SSD)和抑菌剂(CHG)，所述协同效应如更广的微生物和/或细菌覆盖、对抗银微生物的效力、更好且更快的伤口愈合、SSD细胞毒性的逆转、SSD对银效应的逆转、具有持续抗细菌/抗微生物活性的制剂的更长的贮存期限。重组人表皮生长因子(rh-EGF)(Bharat Biotech International Limited 的REGEN D)是公知的生长因子，其已经用于治疗和管理诸如伤口、皮移植片、烧伤、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡的适应症。rh-EGF属于生长因子家族，已知其调节细胞增殖、迁移和分化。还已知rh-EGF用作促细胞分裂原，并且还作为许多细胞类型的分化因子。虽然rh-EGF帮助伤口愈合，但重要的是防止烧伤管理期间的感染。SSD是烧伤的标准治疗。但一些研究显示，该化合物延迟伤口愈合过程(这对于二级和三级烧伤是显著的)，因为利用其受体的生长促进因子的产生被延迟或减少。为了防止银抗性微生物的效应并帮助银针对抗性微生物的渗透，开发了本发明的新制剂，其中向SSD和rh-EGF的组合添加额外药剂CHG。组合背后的原理是，即使低浓度的CHG也帮助银针对烧伤中抗性微生物的渗透，从而帮助银针对抗性微生物的效力。葡萄糖酸氯己定是结合角质层的二双胍，提供了经6小时的持续杀细菌和杀真菌活性，即使当从区域擦去时。它在有机材料(例如全血)存在下不失去其效力，它是重要的 抗菌剂、消毒剂、抗细菌牙洗剂和防腐剂。它具有对抗革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、病毒和真菌的抗微生物谱。CHG结合细菌细胞壁和胞质组分，导致改变的渗透平衡和胞质组分沉淀。使用该新的协同组合物确立的结果显示了通过添加rh-EGF防止银的细胞毒性而逆转银效应。CHG的添加使得该新组合通过增加银针对抗性微生物的渗透性而有效对抗广谱的微生物。该新的协同制剂还显示了以其组合在体外分析中对微生物减少的效应，其中该协同组合有效对抗广谱的抗生素抗性微生物。结果确立，该新的协同组合物是高度稳定的，具有超过两年的贮存期限，其用作用于治疗由烧伤引起的不同程度的伤口以及用于其他适应症(如伤口、皮移植片、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡)的局部药物制剂。在本发明中，使用标准的可用方法测量制剂中每种组分的浓度。通过用从5 μ g、10 μ g和15 μ g开始的不同浓度的rh-EGF并维持SSD和CHG在最佳浓度进行动物试验[实施例I]并在烧伤患者中进行试验[实施例3]来确定rh-EGF的效力。通过用从1口8、348和5口8开始的不同浓度的rh_PDGF_BB并维持SSD和CHG在最佳浓度进行动物试验[实施例2]来确定rh-PDGF-BB的效力。通过验证的ELISA方法来估计rh_EGF浓度[实施例4]。为了估计新制剂中的SSD，基于美国药典中可用的测定方法来进行测定。这些估计的结果显示，可以估计向乳膏中添加的SSD的精确量[实施例5]。为了估计新制剂中的CHG，基于英国药典中可用的测定方法来进行测定[实施例5] ο含有rh-EGF、SSD和CHG的这种新的协同制剂还显示以其组合在体外分析中对微生物减少的效应，其中如果该协同组合首次有效对抗广谱的抗生素抗性微生物，则动力学起作用[实施例6]。在本发明中，对包含SSD、CHG和rh_EGF的新制剂进行加速和实时稳定性研究，并且结果清楚显示这三种成分是稳定的，在所有制剂的添加的组合物中没有任何减少或降低，并且该新制剂稳定超过两年。实施例
实施例I :选择不同浓度的rh-EGF来测试在动物模型中的效力对于新的协同制剂组合SSD、CHG和添加第三药剂，即BBIL的rh_EGF，从5 μ g、10μ g和15 μ g变化，以选择这三种药剂的最佳组合。对这些新制剂进行稳定性研究。在设计的动物模型中应用稳定的制剂以检查这些新制剂的效力。对于新制剂的效力，在动物模型中测试8种组合的制剂1.1%磺胺嘧啶银乳膏2. I %磺胺嘧啶银 +rh-EGF10 μ g/g 乳膏3. 1%磺胺卩密唳银+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF5 μ g/g乳膏
4. 1%磺胺卩密唳银+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10 μ g/g乳膏5. 1%磺胺卩密唳银+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF15 μ g/g乳膏6. I %磺胺卩密唳银+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF5 μ g/g凝胶7. I %磺胺卩密唳银+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10 μ g/g凝胶8. I %磺胺卩密唳银+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF15 μ g/g凝胶选择共计96只大鼠[48只雄性和48只雌性]来测试rh_EGF的新协同制剂的效力。将总动物群体分成两个主要组，作为测试组的组I和作为对照组的组II。每组再分为8个亚组，其中这8组应用上述组合的8种不同的制剂，所述制剂具有从5 μ g/g、10 μ g/g和15 μ g/g开始的不同浓度rh-EGF乳膏和凝胶。表I :新制剂和动物数目数据。
_组I (测试)组II (对照)
N4848
性别(M/F) 24/2424/24
年龄(周) 6-7周6-7周动物模型中的烧伤产生使用测试和对照组动物来产生烧伤。使用特制黄铜棒来在大鼠中产生烧伤。黄铜棒在75±2°C热水浴中维持15±lmin。在实验开始前一天,给动物剃出2x2x2cm大小的区域。从水浴取出黄铜棒并在大鼠皮肤上放置15-20秒的短时段，然后立即拿开。以当棒触碰动物皮肤时应该产生约Icm伤口的方式选择棒直径。对于每只动物，使用单独无菌棒来预防动物中可能存在的任何感染或从一只动物到另一只动物的任何传染(transferofinfection)。在大鼠上产生烧伤30分钟之后，应用上述五种新的基于乳膏的制剂。用无菌棉拭子将研究制剂和对照均匀涂布在烧伤区域，每天两次，直至伤口愈合，或者直至六周结束时。在应用之前，对动物进行任何可能的基本烧伤管理。该研究的主要目的是愈合持续时间，组I病例中的愈合持续时间与组II相比显著减少超过40%。与对照组相比,在新制剂组中观察到上皮形成的次要终点(secondary endpoint)。乳膏和凝胶制剂之间的效力差异很小。乳膏制剂与凝胶制剂相比更有效，并且这些乳膏和凝胶制剂都优于其他两种正常制剂。在3至8新制剂亚组中观察到没有显著的疤痕增生或任何色素沉积变化。所有新制剂动物的烧伤愈合持续时间不相似，但是愈合时间百分比与对照组动物相比超过50%。表2:新制剂队列数据。


公开了用于制备用于预防和治疗伤口、烧伤、皮移植片、压力性溃疡和糖尿病性足溃疡的局部制剂的新的协同药物组合物。所述协同组合物包括与一种或多种杀菌剂和抑菌剂组合的促细胞分裂蛋白。本发明中的促细胞分裂蛋白是重组人表皮生长因子(Bharat Biotech International Limited的rh-EGF)和/或任何其他生长因子，如rh-PDGF-BB，并且杀菌剂和抑菌剂是广谱抗生素磺胺嘧啶银(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)。除了协同组合物以外，局部制剂还包括基底成分、载体、防腐剂、乳化剂、润肤剂和柔肤剂以及一种或多种其他组分。新组合物产生协同效应，如更广的抗菌覆盖、通过rh-EGF逆转SSD的银效应、对抗烧伤中银抗性微生物的效力、以及更好且更快的伤口愈合。新组合物可用于制备用于乳膏、凝胶或液体形式的局部制剂。新制剂具有更长的贮存期限并且在2-8℃的贮存温度下稳定超过两年。