用于治疗骨质疏松症的药物组合物制作方法

陈幸, 王晓阳, 黎万寿, 何光星, 杨薇

2002年9月11日

2001年2月6日

2001年2月6日

四川省中药研究所, 四川迪康集团股份有限公司

A61P19/10GK1368375SQ0110709

骨质疏松症 组合 药物 治疗 用于

1.用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于以天然药用原料补骨脂、牛膝和淫羊藿的提取物为有效药用组分，和制药中允许使用的辅助添加性成分组成，各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为补骨脂1，牛膝2-20，淫羊藿2-20，辅助添加性成分0-32.如权利要求1所述的用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于所说的各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为补骨脂1，牛膝8-12，淫羊藿8-123.如权利要求2所述的用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于所说的各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为补骨脂1，牛膝10，淫羊藿104.如权利要求3所述的用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于所说的有效药用成分中，补骨脂提取物中补骨脂总香豆素的含量应≥50％，补骨脂素≥0.1％；川牛膝提取物中总甾类化合物的含量应≥50％，杯苋甾酮≥0.1％；淫羊藿提取物中总黄酮的含量应≥50％，淫羊藿甙≥1％5.如权利要求1至4之一所述的用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于所说的辅助添加性成分为含有钙元素的成分6.如权利要求5所述的用于治疗骨质硫松症的药物组合物，其特征在于所说的辅助添加性成分中钙元素的含量为能与人体所需要的补钙量相适应的量

本发明涉及的是一种以天然药用原料为有效成分的用于治疗骨质疏松症的药物组合物，特别是由天然药用原料的提取物成分组成的药物组合物骨质疏松症主要是指单位体积内骨量减少和骨结构改变，从而导致骨脆性及骨折率增加的疾病，是中老年人，特别是绝经后妇女的一种常见和多发病目前常用的治疗药物中，除各类化学药物，如雌激素、降钙素、异黄酮和二膦酸盐等等抗骨质吸收类药物；氟化物等促骨形成类药物；钙剂、维生素D及其衍生物等骨矿化类药物外，中药或以中药成分为主的制剂也是其中的一大类型由于化学药物的作用方式及作用机理相对单一和集中，且易产生副作用，而中药或以中药成分为主的制剂因其药效作用和机理常可兼顾患者的局部和全身状况，起到标本兼治的效果，因而不断引起重视并在深入研究如，张喜德等人在《陕西中医学院学报》Vol.22.No.3.p43，(1999.5)中曾对涉及了108味中药的55首治疗骨质疏松症方剂中的100味中药进行了分析和研究，发现在使用15味次以上的药物依次有熟地、淫羊藿、杜仲、黄芪、山药、鹿角胶、枸杞子、山萸肉、菟丝子当归、茯苓、牛膝、补骨脂和龟板等，共使用了297味次，占总使用味次的49,67％其中的补肾类药占总使用味次的56.23％，健脾益气类药占20.88％，补血类药占16.83％，活血祛瘀类药占6.06％特别是包括淫羊藿、杜仲、鹿角胶、补骨脂、肉苁蓉在内的共40味具有补阳、补阴、补气和补血功能的补益类药物，在不同方剂中的使用频率更高达74.58％田丙坤等人在《陕西中医学院学报》Vol.22.No.4.p55-7，(1999.7)中报导了对用于骨质疏松症临床治疗的诸多中药制剂进行的分析研究其所涉及的补肾健骨胶囊、滋肾密骨丹等在其制剂组成中使用了上述百味中药中的淫羊藿；补肾丸在制剂中使用了淫羊藿和牛膝；密骨汤和补肾填精冲剂等在制剂中使用了补骨脂和怀牛膝；妇骨宁颗粒等在制剂中使用了淫羊藿和补骨脂在申请号为95100697、93121565和93107842等中国专利公开文献中也报导了用于治疗绝经期和老年骨质疏松症的复方制剂中含有淫羊藿成分；公开号为CN 1096204A和CN 1079160A两中国专利文献中还分别报导了由补骨脂与蛇床子等多味中药和由牛膝与术香等8味中药组成的用于治疗骨质疏松症的药物由此表明，根据对骨质疏松症的治疗机理和药物作用方式的不同，在以中药或以中药成分为主的药物组合物中，虽然在上述诸多中药原料的选用频率上有如上述文献报导的分布情况，但在具体的药物组合物制剂中，对中药原料的选用及所用药物原料的组成数量和/或对各药用原料的使用形式上仍有较大的差别鉴于此，本发明的目的是在上述技术背景的基础上提供一种经试验证明对治疗骨质疏松症有确切疗效且较少副作用的由中药原料成分组成的药物组合物本发明用于治疗骨质疏松症的药物组合物，以天然药用原料补骨脂、牛膝和淫羊藿的提取物为有效药用成分，和在制药中允许使用的辅助添加性成分组成各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为补骨脂1，牛膝2-20，淫羊藿2-20，辅助添加性成分0-3在此组成形式的基础上，又以使所说的各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成在下述范围内更为理想补骨脂1，牛膝8-12，淫羊藿8-12特别是还可以进一步使所说的各有效药用组分提取物以相当于其提取所用的原料生药重量表示的重量组成为补骨脂1，牛膝10，淫羊藿10，其中所说的各有效药用成分中，补骨脂提取物中补骨脂总香豆素的含量应≥50％，补骨脂素≥0.1％；川牛膝提取物中总甾类化合物的含量应≥50％，杯苋甾酮≥0.1％；淫羊藿提取物中总黄酮的含量应≥50％，淫羊藿甙≥1％由于在不同产地来源的同种药用原料中，上述有效药用成分物的含量高低不尽相同，因此其提取物中的各相应有效成分物的量与上述要求有差异时，可在本发明上述生药用量的范围内，通过对制备提取物时所用的原料生药量作适当调整予以解决当然，在上述所说的这些提取物组成的重量组成基础上，还可以有在实际生产和制备操作中通常难以避免的允许性误差存在上述组成中所说的辅助添加性成分，在允许使用为与所制备的制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂等不同制剂相应所需的各种常用成分的基础上，本发明特别建议在辅助添加性成分中使用含有钙元素的成分，特别是根据治疗骨质疏松症时的用药量计算，并使其中钙元素的含量为与人体所需要的补钙量相适应的量时，使其在药物组成中在作为普通添加性成分使用的同时，还可以针对骨质疏松症的病因及治疗起到补充钙元素的辅助治疗作用与本发明上述药物有效药用成分相关的原料生药及其有效成分的研究，目前已有研究和报导如，其中原料生药淫羊藿的有效成分为黄酮和多糖，其有效成分提取时所用的溶剂和方法可有多种《国外医药·植物药分册》1993(4)Vol.8中对淫羊藿属药用植物研究进展中报导，不同产地样品间虽在微量元素组成比例上有一定差异，但其总趋势是一致的临床上多以炮制品入药，其炮制品中淫羊藿甙的含量较生品无明显降低，但其水煎液中淫羊藿甙的溶出量较生品高《中国药学杂志》1997(8)Vol.32中对多种不同品种来源淫羊藿的药理作用研究中指出，其总黄酮含量的高低是对其质量评价的主要内容之一淫羊藿的水提液具有抑制骨细胞功能，使去势大鼠骨吸收下降，并同时促进成骨细胞功能，特别是钙化骨形成增加《中国药学杂志》1993(1)Vol.28报导的用乙醇提取淫羊藿甙纯品的研究中则认为，用乙醇提取方便简单且效果好《中成药》1996(5)Vol.18对淫羊藿总黄酮提取分离工艺的研究中，对以水和乙醇等不同溶剂的提取效果进行了研究和比较后认为，两者提取物中有效成分的含量差别不大，但以水作提取溶剂至少在经济上是更优的又如，作为补肾中药在骨质疏松症的治疗也多有使用的牛膝，主要的药用成分为生物碱和甾酮类《沈阳药科大学学报》2000(3)Vol.17在对牛膝提取物对成骨样细胞增殖作用的研究报导中提出，牛膝的乙醇提物与对成骨样细胞增殖的促进作用间有明显的量-效关系，而其石油醚、乙酸乙酯等非极性溶剂萃取部位的混合物则可具有比乙醇提取液更强的促进成骨样细胞增殖的作用对补骨脂的研究文献也报导，其作为一种常用的中药在临床上已有较广泛的用途，主要的有效药用成分可包括有补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂内酯、香豆精、黄酮类、单萜类、豆甾醇等本发明上述药物组成中所说的各有效药用成分的提取物可以采用目前已多有报导和/或使用的以水或乙醇、乙酸乙酯等为溶剂，对相应的原料生药以浸泡、回流和渗漉等方式进行提取和处理后所得到的提取物对采用由以下方法制备得到的本发明上述药物进行了相关的实验药物制各将粉碎成粗粉状的补骨脂生药以乙酸乙酮为溶剂，川牛膝和淫羊藿原料生药均以～70％乙醇为溶剂，分别进行回流提取后，提取液分别用柱层析纯化处理柱层析的填充剂可以为硅胶、氧化铝、硅藻土、活性碳等中的一种；洗脱液可以为乙醇、乙酸乙酯、石油醚等常用溶剂纯化处理后各有效药用提取物成分中，补骨脂提取物中的补骨脂总香豆素的含量应≥50％，补骨脂素≥0.1％；川牛膝提取物中的总甾类化合物的含量应≥50％，杯苋甾酮≥0.1％；淫羊藿提取物中的总黄酮含量应≥50％，淫羊藿甙≥1％将此三种提取物按相当于其提取所用原料生药的重量比例为补骨脂1份，牛膝10份和淫羊藿10份的形式混合，制成每粒含内容物0.4克，相当于原料生药3.6克的胶囊制剂实际用于临床治疗的药物中，每粒胶囊中可以含有相当于100毫克钙元素的含钙辅助添加成分，如常用的磷酸氢钙、碳酸钙、乳酸钙、枸橼酸钙、葡萄糖酸钙等含钙成分动物试验时以与此胶囊药物组成相当的药物浸膏(试验药物浸膏)进行急性毒性试验以18-22克雌雄各半的昆明种小鼠50只为试验动物，将动物随机按给药量分别为253克、225克、200克、178克和158克/千克体重分为5个剂量组单纯禁食12小时后，将上述试验药物浸膏均按0.3毫升/10克体重的量口服给药给药后动物多在8小时内死亡，三天内仍有少数死亡者，解剖死亡动物，肉眼未见各脏器有明显异常统计计算其LD50为198克(生药)/千克体重，95％可信区间为184.2-211.8克(生药)/千克体重长期毒性试验以4-5周龄、60-80克雌雄各半的一级Wistar大鼠260只为试验动物，随机分为7组，分别为；空白正常对照组，给以上述试验药物浸膏的大、中、小三种剂量试验组(大组、中组、小组)，上述试验药物中各提取物成分混合前的单一补骨脂提取物试验组(B组)、单一牛膝提取物试验组(L组)和单一淫羊藿提取物试验组(Y组)各组每周给药6天后停药1天，并根据体重变化调整给药量12周后正常对照组和大剂量试验药物组动物各处死10只，B、L、Y组全部处死，作血常规和肝、肾功能及各项生化指标检验；解剖动物并称脏器重量；进行病理检查24周时各试验药物组动物各处死20只并作同样检验和处理每组再留10只作两个月的恢复试验观察指标包括一般情况，如行为活动、精神状态、食欲、皮毛、大小便、胃肠道反应等；体重增长率；血常规，凝血时间，肝、肾功能等多项生化指标；重要脏器系数；中药脏器组织的病理形态观察试验动物的分组及给药量如表1试验药物对受试动物凝血时间、血象及脏体比检验指标影响等部分试验结果分别如表2、表3和表4所示上述试验结果表明，试验药物的各剂量组及各单一提取物成分试验组均未见明显毒性反应，病理报告中肝、肺、肾个别动物有炎症反应，但药物组与正常对照组无组间差异表1 试验动物的分组及给药量 表2 对试验动物凝血时间影响的实验结果 (注给药组与正常对照组比较，*为p＜0.05，**为p＜0.001)表3 对试验动物血象影响的实验结果(平均值x) (注给药组与正常对照组比较，*为p＜0.05，***为p＜0.001)表4 各组试验动物的脏体比测定结果(平均值x) 药效学试验以体重220-250克的雌性Wistar大鼠为试验动物试验组动物经麻醉无菌操作结扎并摘除卵巢；正常对照组动物作不摘除卵巢的假手术术后均饲养三个月实验开始前查阴道细胞一周，确认无动情期反应者用于试验将去势动物分成8组，分别为模型组；给予尼尔雌醇药物的阳性对照组，按1毫克/千克体重剂量给药每周一次，连续用药三个月；按给药剂量分别为18克、9克和4.5克(均为相当于生药量)/千克体重给予试验药物的浸膏，分为大、中、小三个剂量组，按1毫升/100克体重的量灌胃给药，每周给药6天，连续三个月；分别给予试验药物中各提取物成分混合前的单一提取物成分对照组，其中补骨脂提取物组(B组)按1克/千克体重给药；牛膝提取物组(L组)按10克/千克体重给药；淫羊藿提取物组(Y组)按10克/千克体重给药，均每周给药6天，连续三个月观察指标有阴道上皮细胞的动情期变化给药后连续查各组大鼠阴道上皮细胞二周，以了解药物的雌激素活性；包括肝肾功能的生化测定、血钙、硷性磷酸酶、骨硷性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素、E2(雌二醇)、T(睾酮)、T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(甲状腺素)、FSH(促卵泡激素)、尿肌酐、尿羟脯氨酸等多项与骨代谢的各项指标；骨密度的测定；骨矿含量；胫骨的骨计量学测定；内分泌激素的靶器官病理形态学观察等部分试验结果如下一、对去势大鼠阴道上皮角化细胞的影响通过在试验周期内对各试验组动物阴道上皮脱落细胞的检查所反映出的动情曲线结果显示，正常动物以每5天一个周期有规律地出现动情期反应；而去势(去卵巢)动物则无动情期反应，上皮细胞始终处于间情期阶段，表明体内无雌激素；阳性药物尼尔雌醇给药后动物很快出现动情期变化，并长时间地维持在一个高水平；补骨脂提取物组给药的第三天动物开始出现动情期反应，但作用远不及尼尔雌醇强，只是使体内保持一定的雌激素水平；试验药物大剂量组的动情期反应出现较晚，作用较单一补骨脂提取物组更弱；其它组未见有明显的动情期反应此结果表明，补骨脂成分是具有雌激素作用的主药，在本发明药物中与其它两药合并组成复方形式后使用，使其雌激素作用受到了一定的抑制提示出这对于预防雌激素中的副作用是有益的二、对去势大鼠骨密度的影响连续给药12周后处死动物，对其左下肢股骨、胫骨用双能x线骨密度仪(DPX)测定骨密度各试验组动物的骨密度测定结果如表5所示表5 各组试验动物的骨密度测定结果(x±SD) (注与正常对照组比较，△为P＜0.05，△△△为P＜0.001；与模型对照组比较，**为P＜0.01，***为P＜0.001)上述测定结果显示，动物去势后的模型对照组骨密度显著降低，与正常对照组比较，其股骨、胫骨的P值分别＜0.001和＜0.05，表明用去势的方法造成骨质疏松的动物模型是成功的阳性对照组用尼尔雌醇三个月，可以使动物的骨密度显著增加，恢复至正常水平，与模型对照组比较P＜0.001；本发明药物的各试验组对去势后大鼠的骨密度也有显著的增加作用，P＜0.01～0.001，其作用强度与尼尔雌醇比较无显著差异；各单一提取物成分对去势大鼠骨密度的增加分别也有非常显著的作用，P均＜0.001三、骨组织形态计量学测定动物于处死前两周，按25毫克/千克体重剂量皮下注射四环素，作为荧光单标记物，于处死前4天再按10毫克/千克体重的剂量皮下注射钙黄绿素作为荧光双标记物将处死并剥离干净的动物右下肢胫骨固定于90％乙醇中，作不脱钙骨组织切片，进行骨组织形态计量学检测，用半自动图像数字化分析仪测量骨组织的动、静态参数各试验组动物胫骨骨组织形态计量学静态参数和动态参数的结果分别如表6和表7所示骨组织形态计量学静态参数是直接反映松质骨骨量即骨小梁的指标表中骨组织形态学计量测定结果显示，去势后的动物骨量明显降低，骨小梁面积百分率和骨小梁数量减少，P＜0.001；骨小梁间隔变大，P＜0.001，说明动物造型是成功的尼尔雌醇阳性对照组显示该药物可使动物骨量显著增加，各项指标的P＜0.05～0.001，表明雌激素对去势动物的骨量减少有显著的增加作用；B组和试验药物大剂量组对去势动物的骨量减少有显著的增加作用，三项指标都显示P＜0.05～0.01试验药物的中、小剂量组和L组、Y组对骨量减少也有不同程度的增加，但无统计学差异试验药物的三个剂量组以及单一提取物成分的B组、L组、Y组对骨量的增加作用虽不如尼尔雌醇作用明显，但它们之间的组间比较却无显著差异，说明试验药物及单一提取物成分对动物的骨量减少是有保护作用的，尤其是复方作用比单一成分的作用强骨组织形态计量学动态参数反映的是骨代谢即骨吸收和骨形成的指标动态参数的测定结果也显示出，复方形式的试验药物使骨的形成率增高，骨吸收降低，表明用药后可使骨代谢恢复至正平衡状态表6 试验动物胫骨骨组织形态计量学静态参数结果 (注与模型对照组比较.△为P＜0.01.△△为P＜0.05，△△△为＞0.05；与阳性对照组比较，*为P＜0.01，**为P＜0.05，***为＞0.05)表7 试验动物胫骨骨组织形态计量学动态参数结果 (注与模型对照组比较，△为P＜0.05，△△为P＜0.01，△△△为＜0.001；与阳性对照组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01，***为＜0.001)四、靶器官组织的病理形态学观察动物处死后对重要脏器及靶器官进行解剖、称重及病理学检查，药物除对子宫有一定的影响外，其它脏器及靶器官无明显病理改变模型组大鼠去卵巢后，子宫内膜及肌层全层萎缩尼尔雌醇阳性组连续用药三个月，可见子宫壁全层非常明显地增厚，与模型组比较增厚112.8％，内膜层增厚89.5％，肌层增厚148.6％，P值均＜0.001；试验药物的大剂量组也可使子宫壁增厚35.6％，内膜曾厚148.6％，肌层与增厚43.2％，但较阳性对照组对子宫的影响明显减少，两组比较，有非常显著的差异；试验药物的中、小剂量组及单一提取物的B组虽然对子宫也有一定程度的增厚，但不及大剂量组明显病理检查中还发现尼尔雌醇组中有1/4子宫内膜有鳞状化生的现象，提示该药物长期使用有致癌变的可能，而试验药物组无此现象，显示其对子宫的影响则小得多，较尼尔雌醇更安全上述试验结果充分表明，本发明的上述药物能使骨质疏松动物的骨密度有显著的提高，可以使松骨质骨量明显增加，使雌激素水平低下所致的高转换型骨代谢趋于正平衡状态本发明上述药物与尼尔雌醇比较，没有组间差异，表明本发明药物确有抗骨质疏松的作用尼尔雌醇是目前较公认的抗骨质疏松有效药物，但因它的副作用和禁忌症限制了其使用上述对给药组动物的阴道上皮细胞的试验观察也已显示，尼尔雌醇是一种雌激素活性很强的药物，给药后可使体内雌激素长时间地维持在一个高水平，因此对子宫壁的作用很强，使子宫全层明显增厚并发生鳞状化生现象这显然给骨质疏松症患者的长期用药带来了不安全因素试验同样也显示，本发明上述药物虽然也有一定的雌激素样活性，但远不及尼尔雌醇，尤其是本发明的复方组成形式还能使其某些雌激素样活性被对抗——如动情期反应不如B组补骨脂单一提取物的明显，但其抗骨质疏松疗效却增强，而且本发明复方组成形式药物的增强作用比单一提取物成分的作用明显绝经期后的妇女由于卵巢功能衰退，体内雌激素水平明显下降，易引发一系列疾病，骨量丢失导致的骨质疏松症是其中之一本发明药物可以阻止骨量丢失，促进骨的重建，对骨质疏松症有确切疗效同时，其还能使体内的雌激素水平得到一定提高，又可减少常规方式使用雌激素时会带来的副作用，对缓解更年期综合症给妇女带来的痛苦也有其积极的意义和价值