专利名称：蒜氨酸酶的应用及一种药物组合物的制作方法同型半胱氨酸(Hcy)为一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢过程中的重要中间产物。研究表明，同型半胱氨酸通过产生超氧化物及过氧化物，会损伤血管壁，改变凝血因子，造成血小板聚集，增加血栓和动脉粥样硬化的形成倾向。目前，已公认高同型半胱氨酸血症(Hhcy)是除高血脂、吸烟等因素外，引发心脑血管疾病(如动脉粥样硬化性疾病、老年性痴呆等)的又一独立危险因素。此外，近年也有研究报道，同型半胱氨酸除还与神经管畸形、先兆子痫、帕金森病、胎儿生长缓慢、慢性肾功能衰竭等多种疾病有关。目前，治疗高同型半胱氨酸血症主要方法为补充叶酸和维生素，以及限制甲硫氨酸的摄入，以降低同型半胱氨酸水平。 蒜氨酸酶(alliinase，EC4. 4. I. 4)又名蒜氨酸裂解酶或S-烷基-L-半胱氨酸亚砜酶，存在于大蒜、洋葱、韭菜等植物中，是含有两个相同亚基的二聚体糖蛋白。蒜氨酸酶可从植物中通过磷酸盐缓冲液提取和硫酸铵沉淀而得，也可通过文献报道的生物工程方法制备，如文献(来庆勤，殷承慧，胡又佳等，大蒜蒜氨酸酶的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化[J]，中国医药工业杂志，2010，41 (7) :32-35.)的方法。在完整无损的大蒜中，蒜氨酸酶存在于液泡内，其天然底物蒜氨酸(alliin)存在于细胞质中。当新鲜大蒜被切割或压碎，蒜氨酸酶即被释放出来，与蒜氨酸接触并催化产生具有重要药理学用途(如抗菌、抗肿瘤等)的大蒜辣素(allicin)和顺/反式阿霍烯(ajoene)，并生成丙酮酸和氨等副产物。但目前，尚未见有关蒜氨酸酶应用于防治高同型半胱氨酸血症的报道。
本发明所要解决的技术问题是提供蒜氨酸酶在医药领域中的新应用，从而扩展其应用范围。本发明涉及蒜氨酸酶在制备降低同型半胱氨酸量的制剂中的应用。本发明还涉及蒜氨酸酶在制备预防或治疗高同型半胱氨酸血症的药物中的应用。本发明进一步涉及蒜氨酸酶在制备预防高同型半胱氨酸血症相关性疾病的药物中的应用；所述的高同型半胱氨酸血症相关性疾病为由高同型半胱氨酸血症所能引发的疾病，更具体的如心脑血管性疾病(如冠心病等动脉粥样硬化性疾病、或老年性痴呆)、神经管畸形、先兆子痫、帕金森病、胎儿生长缓慢或慢性肾功能衰竭。本发明更进一步涉及一种药物组合物，其包括蒜氨酸酶和辅料。本发明中，所述的蒜氨酸酶可为按现有方法从植物(如大蒜、洋葱或韭菜等)中提取的野生型蒜氨酸酶，或者通过生物工程方法制得的重组蒜氨酸酶。由生物工程方法制备重组蒜氨酸酶，成本更低，步骤更简便，产品纯度更高，更易工业规模化生产。本发明中，所述的药物或药物组合物中，蒜氨酸酶的含量为治疗有效量以上，具体可根据情况选择。所述的药物可以仅含蒜氨酸酶作为唯一活性成分，也可以还含有除蒜氨酸酶以外的其它活性成分。所述的其它活性成分为对蒜氨酸酶降低同型半胱氨酸水平的活性作用没有不良影响可联合使用的其他活性成分，如其他预防或治疗高同型半胱氨酸血症的活性成分。所述的药物可为适用于蒜氨酸酶的各种药学领域常用的各种剂型。根据所选择的剂型，可按本领域常规知识，选择合适的辅料，按常规方法制得所需剂型的药物。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于本发明首次发现蒜氨酸酶具有降低同型半胱氨酸量的作用，从而拓展了其应用范围，也为防治高同型半胱氨酸血症及其相关性疾病提供了新途径。 图I为实施例I中在蔗糖活性测定缓冲液中Hcy的标准工作曲线图。图2为实施例I中在蔗糖活性测定缓冲液中不同浓度的Hcy在蒜氨酸酶的作用下的反应百分率的柱状图。图3为实施例I中大鼠标准血浆的色谱图。图4为实施例I中大鼠标准血浆加+Hcy(100 U mol/L)的色谱图。图5为实施例I中大鼠血浆中Hcy的标准工作曲线图。图6为实施例I中蒜氨酸酶在体外血浆中不同浓度的Hcy在蒜氨酸酶的作用下的反应百分率的柱状图。图7为实施例2中不同检测时间点的大鼠血浆Hcy浓度曲线图。

峰面积(mAU. s)0. 348259 0.670724 1.514840 2. 376700 3.204250根据表I和图I，蔗糖活性测定缓冲液中，Hcy浓度⑴在50 400 U mol/L范围内与峰面积(Y)成线性，回归方程为Y = O. 0083X-0. 1137，相关系数为0. 9991。(2)蒜氨酸酶在蔗糖活性测定缓冲液中对Hcy的分解作用测定结果见表2和图2。表2蒜氨酸酶在测活缓冲液中对Hcy的分解作用
反应前 Hcy 浓度(y mol/L)~50 ~100 ~150 ~200
反应后 Hcy 检出浓度(y mol/L)35.02 82. 71 131.65 181. 16
反应百分率(％ )3174 IlI YL2 9 4由表2和图2可见，与蒜氨酸酶反应后，不同浓度Hcy样品的检出浓度均有所减少，且浓度越低，反应百分率越高。二、蒜氨酸酶在体外血浆中对Hcy的分解作用I、检测方法的方法学考察色谱柱Kromasil C18 色谱柱(3. 9mmX 150mm, 5 u m);柱温20 °C ；流动相0. lmol/1 NaH2PO4-Na2HPO4 缓冲液(pH4. 0，含 3 % 甲醇)；流速I. Oml/min ;洗脱时间6. 2min ;荧光检测波长激发波长390nm，发射波长470nm ;进样量20 yl。(I)专属性大鼠标准血浆、及大鼠标准血浆加+Hcy(100 U mol/L)的色谱图如图3和4所示。由图3和图4可见，在该检测条件下，Hcy与测定样品中的其它成分得到良好分离，不受内源性杂质峰干扰。标准血衆样品中Hcy的保留时间与外加Hcy的一致,保留时间均在5. Imin左右，表明所测定的峰即为Hcy的色谱峰。(2)重复性测定结果见表3。表3同一份血衆测定5次的峰面积及均值(X 士8 )


本发明公开了蒜氨酸酶在制备降低同型半胱氨酸量的制剂，在制备预防或治疗高同型半胱氨酸血症，或者预防高同型半胱氨酸血症相关性疾病的药物中的新应用，从而拓展了其应用范围，也为防治高同型半胱氨酸血症及其相关性疾病提供了新途径。本发明还公开了一种药物组合物。