专利名称：一种含天然虾青素的预混料的制作方法 根据中华人民共和国卫生部第17号公告，批准雨生红球藻为新资源食品，所以提取出虾青素的破壁雨生红球藻粉可以应用于鸡饲料中。雨生红球藻中的虾青素，其英文名称为Astaxanthin。其化学分子式为C4tlH52O4。虾青素分为合成的和天然的。人们日常膳食中三文鱼肉的红色物质即是天然虾青素。天然虾青素是ー种脂溶性的类胡萝卜素，是ー种超强抗氧化剂，其抗氧化能力是天然维生素E的550倍；是维生素C的6000倍；是天然β -胡萝卜素的10倍；是葡萄籽的原花青素的17倍；硫辛酸的75倍。天然的虾青素可作为饲料添加剂用于虹鳟鱼、鲑鱼、鲟鱼、三文鱼、鲍鱼、真鯛、甲壳类动物及观赏鱼类和各种禽类、生猪的饲料，其主要作用有(I)作为天然色素増加营养及商品价值。鱼类及甲壳类动物食用了添加天然虾青素的饲料后，虾青素可以直接积累在体内组织中，使肌肉呈红色，肉质也更加鲜美，营养更加丰富。天然的虾青素在养禽业中有很重要的作用，因其具有独特的着色功能，家禽饲喂添加了天然的虾青素的饲料后，可以产生红色蛋黄，羽毛、皮肤、脚、喙也呈现出金黄色或红色，从而大大提高了禽蛋、肉的营养及商品价值。(2)作为天然激素提高繁殖能力。天然虾青素可作为天然受精激素改善卵质，并且可以提高鱼卵受精率，減少胚胎的死亡率，促进个体生长，増加成熟速度和生殖力。(3)作为免疫增强剂改善健康状态。天然虾青素具有很强的抗氧化、消除自由基的能力，可以促进动物体内抗体的产生，增强免疫功能，提高动物对恶劣环境的抵抗能力。预混料目前国内外研究和生产的种类较多，但多数预混料动物饲喂达不到预期效果，且大多添加有抗生素和合成色素，其弊端日益显著，也不符合人类绿色、安全的需要。
为了解决上述问题，本发明提供ー种含天然虾青素的预混料。本发明提供的预混料，其含有下述重量配比的组分破壁雨生红球藻粉30_80g/kg,豆柏 150-300g/kg，磷酸氢钙 150-200g/kg，石粉 150_250g/kg，食盐 50_70g/kg，烟酸O. 6-0. 9g/kg，D-泛酸钙 O. 1-0. 2g/kg，生物素 O. 0016-0. 0024g/kg，氯化胆碱 7. 5-12. 5g/kg,铜盐按铜计O. 256-0. 512g/kg，铁盐按铁计ト2g/kg，锌盐按锌计I. 2-2. 4g/kg，锰盐按猛计I. 3-2. 6g/kg,碘盐按碘计O. 02-0. 04g/kg,硒盐按硒计O. 003-0. 007g/kg,蛋氨酸20-35g/kg,こ氧基喹啉O. 33-1. Og/kg,植酸酶l_3g/kg,复合微生态制剂5_15g/kg,低聚木糖l_3g/kg,膨润土 80-120g/kg ;所述的复合微生态制剂的活性成分是粪肠球菌(Enterococcus faecium)菌粉、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)菌粉和扣囊覆膜抱酵母(Saccharomycopsis fibuligera)菌粉。优选的，本发明的预混料含有下述重量配比的组分破壁雨生红球藻粉40g/kg，豆柏200g/kg,磷酸氢I丐160g/kg,石粉200g/kg,食盐60g/kg,烟酸O. 75g/kg, D-泛酸 丐O. 15g/kg,生物素O. 002g/kg,氯化胆碱9g/kg,铜盐按铜计O. 41g/kg,铁盐按铁计I. 58g/kg,锌盐按锌计I. 74g/kg,猛盐按猛计2. Og/kg,碘盐按碘计O. 03g/kg,硒盐按硒计O. 005g/kg,蛋氨酸30g/kg,こ氧基喹啉O. 66g/kg,植酸酶2g/kg,复合微生态制剂10g/kg,低聚木糖2g/kg,膨润土 100g/kg。其中，所述的铜盐、铁盐、锌盐、锰盐、碘盐、硒盐可为本领域常规用于饲料或预混料的铜盐、铁盐、锌盐、锰盐、碘盐、硒盐，优选为硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸锰及它们的水合物，碘化钾、亚硒酸钠及它们的制剂或预混剂。因此，本发明优选的预混料，其含有下述 重量配比的组分破壁雨生红球藻粉40g/kg,豆柏200g/kg,磷酸氢I丐160g/kg,石粉200g/kg,食盐 60g/kg,烟酸 O. 75g/kg, D-泛酸I丐 O. 15g/kg,生物素 O. 002g/kg,氯化胆碱 9g/kg,五水硫酸铜I. 6g/kg, 一水硫酸亚铁4. 8g/kg, 一水硫酸锌4. 3g/kg, 一水硫酸猛6. 2g/kg,I%的碘化钾预混剂3g/kg, I %的亚硒酸钠预混剂O. 5g/kg,蛋氨酸30g/kg,こ氧基喹啉O.66g/kg,植酸酶2g/kg,复合微生态制剂10g/kg,低聚木糖2g/kg,膨润土 100g/kg。其中，所述的破壁雨生红球藻粉所含的虾青素为0. 05-0. 6%。其中，所述的植酸酶的含量为4000 5000U/g。其中，所述的粪肠球菌菌粉的活菌含量为3-5X101(lCfu/g，所述的地衣芽孢杆菌菌粉的活菌含量为2-4X101(lCfU/g，所述的扣囊覆膜孢酵母菌菌粉的活菌含量为5-7X109cfu/go本发明中，优选的粪肠球菌为保藏号为CGMCC No. 5092的粪肠球菌；优选的地衣芽孢杆菌为保藏号为CGMCC No. 5094的地衣芽孢杆菌；优选的扣囊覆膜孢酵母为保藏号为CGMCC No. 2387的扣囊覆膜孢酵母。本发明的添加天然虾青素的预混料能够显著提高产蛋率，降低死淘率，红心蛋色彩适宜。本发明的预混料中因添加了破壁雨生红球藻粉，氨基酸、微量元素配比合理，促进了饲料转化效率，提高了蛋鸡的生产性能和蛋壳质量，能够减少疾病的发生，降低死淘率，提高经济效率。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为申请人从牛肠道中分离、经定向初筛和复筛得到。其营养细胞杆状，其芽孢为椭圆或长筒形，为中生或次端生，孢囊稍膨大。孤立或呈短链，杆端半圆形。在12 16h内能形成菌落，菌落为圆形，或不规则，边缘毛发状，菌落白色，不透明，无褶皱。革兰氏阳性。申请人对此株地衣芽孢杆菌进行了耐酸性、耐胆盐、耐高温性、发酵特性和抑菌活性等实验，此株地衣芽孢杆菌具有对逆环境耐受性强、粘附性强、生长快、生物量大、抑菌活性好等特点。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJii :北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 5094。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为申请人从猪大肠中分离得到,其生物学特征如下菌落圆整，表面光滑，不透明，乳白色，边缘光滑，革兰氏阳性菌；单个菌体为球状或椭圆状。本发明的粪肠球菌经过人工胃液、胆汁液及耐热性的筛选；又经过产酶能力筛选和抑菌能力筛选，可以耐受pH2.0，l%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受0.3%的人工胆汁液，可以耐受85°C的制粒温度，也可以抑制致病性大肠杆菌K88、K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产酸和抑制豆柏、棉柏、玉米秸杆中霉菌的能力。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJii :北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 5092。本发明所述的扣囊覆膜抱酵母(Saccharomycopsisfibuligera)CGMCC No. 2387具有良好的耐胃酸、耐胆盐、耐高温、耐受常用抗生素等抗逆性能和产酸、产酶、抑制病原菌等益生功能，为申请人从健康动物肠道或粪便中分离、选育得到，经中国农业微生物菌种保藏管理中心鉴定，并于2008年3月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为· CGMCCNo. 2387。 图I所示为本发明预混料对蛋黄顔色的影响。

I.6M3BPY种子培养基的2M3种子罐中，温度37°C，转速200rpm，罐压O. 05Mpa，通风量14. 4 19. 2M3/h，培养10 14h，为ニ级种子液；4)地衣芽孢杆菌发酵液的制备将骤3)制备的ニ级种子液按照10%的接种量接种到装有16M3发酵培养基的发酵罐中，温度37°C，转速220rpm，罐压O. 05Mpa,通风量14. 4 19. 2M3/h,培养20h，至芽孢形成率90%以上，活菌数为3 X 101Qcfu/ml，则终止发酵，得地衣芽孢杆菌发酵液；所述的发酵培养基为麸皮2%，豆柏I %，氯化钠0.8%，硫酸镁O. 01%。5)地衣芽孢杆菌菌粉的制备在步骤4)制备的发酵液中加入25%的填充物米糠，混匀，进行喷雾干燥，进风温度120 130°C，排风温度40 50°C，雾化器转速15000 18000rpm,得到水分含量< 5%的地衣芽孢杆菌菌粉。2.粪肠球菌CGMCC No. 5092菌粉的制备I)平板培养复壮将粪肠球菌菌种用接种环划线于MRS平板培养基上，于37°C培养24h，使粪肠球菌复壮，并形成单菌落；挑取单菌落接种于斜面培养基上，于37°C培养24h ；2) 一级种子的制备将步骤I)培养的粪肠球菌斜面菌种转接到装有300mlMRS培养基的500ml三角瓶中，于37°C培养12h，转速lOOrpm，使其处于对数中后期，得一级种子；3) ニ级种子的制备将步骤2)培养的粪肠球菌一级种子转接到装有I. 6LMRS培养基的2. OL三角瓶中，于37°C静止培养12h，为ニ级种子液；4)发酵液的制备将骤3)制备的ニ级种子液按照3%的接种量接种到装有16M3发酵培养基的发酵罐中，温度37°C，转速120rpm，罐压O. 05Mpa,培养16h，至活菌数为2X109cfu/ml，终止发酵；所述的发酵培养基为葡萄糖2%，大豆蛋白胨1%,氯化钠O. 2%,硫酸铵0.5%，硫酸镁0.05%。5)粪肠球菌菌粉的制备在步骤4)制备的发酵液，5000rpm离心，得到菌泥，加入与菌泥的重量/体积百分比为20%的冻干保护剂，混匀，于-45 °C冷冻干燥，得 到水分含量< 5%的粪肠球菌菌粉；所述的冻干保护剂为脱脂奶粉、甘油、蔗糖、麦芽糊精和谷氨酸钠的混合物，按照脱脂奶粉甘油蔗糖麦芽糊精谷氨酸钠=
2 1.0 1.0 1.5 I. O的比例混合而成。3.扣囊覆膜孢酵母CGMCC No. 2387菌粉的制备I)平板培养复壮将保藏的扣囊覆膜孢酵母用接种环划线接种到麦芽汁固体培养基上，于30°C培养46h，使扣囊覆膜孢酵母复壮，并形成单菌落，挑取单菌落接种于麦芽汁固体斜面培养基上，于30°C培养36h ；2) 一级种子的制备将步骤I)培养的扣囊覆膜孢酵母菌种转接到装有200ml麦芽汁培养基的500ml三角瓶中，于30°C培养12h 16h，转速150rpm，使其处于对数中后期，为ー级种子；3) ニ级种子的制备将步骤2)制备的ー级种子液转接到装有I. 2L麦芽汁培养基的2. OL三角瓶中，于30°C静止培养12h，为ニ级种子液；4)扣囊覆膜孢酵母发酵液的制备将骤3)制备的ニ级种子液按照10%的接种量接种到装有16M3发酵培养基的发酵罐中，温度30°C，转速200rpm，罐压O. 05Mpa，培养16h终止发酵，此时活菌数为I. 5X109cfu/ml ;所述的发酵培养基为所述的发酵培养基为红糖1%，大豆蛋白胨1%，酵母膏O. 2%，氯化钠O. 5%，硫酸镁O. 01%，磷酸氢ニ钾O. 2%。5)扣囊覆膜孢酵母菌粉的制备在步骤4)制备的发酵液，5000rpm离心，得到菌泥，加入与菌泥的重量/体积百分比为10%的冻干保护剂，混匀后于_45°C冷冻干燥，得到水分含量< 5%的扣囊覆膜孢酵母菌粉；所述的冻干保护剂为脱脂奶粉、甘油、麦芽糊精按照2. O O. 5 I. O的比例混合而成。实施例2预混料的制备I)制备复合微生态制剂称取实施例I制备的地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094菌粉、粪肠球菌CGMCC No. 5092菌粉、扣囊覆膜孢酵母CGMCC No. 2387菌粉和葡萄糖，按重量配比为25 20 6 49混合，得复合微生态制剂。其中上述三种菌粉的活菌数含量分别为粪肠球菌4X101(lCfU/g、地衣芽孢杆菌3X 101Qcfu/g、扣囊覆膜孢酵母6X 109cfu/g。2)制备预混料每千克预混料配方如下破壁雨生红球藻粉40g(用比色法測定提取虾青素后的破壁雨生红球藻残渣的虾青素含量为0.2% )，豆柏200g，磷酸氢钙160g，石粉200g，食盐60g，烟酸O. 75g，D-泛酸钙O. 15g，含量为2%的生物素O. lg，含量为50%的氯化胆碱18g，五水硫酸铜I. 6g，一水硫酸亚铁4. 8g，一水硫酸锌4. 3g，一水硫酸锰6. 2g，碘含量为I %的碘化钾预混剂(衡阳市珠晖区京成天宝饲料厂)3g，硒含量为I %视为亚硒酸钠预混剂(衡阳市珠晖区京成天宝饲料厂)O. 5g，蛋氨酸30g，含量为66%的こ氧基喹啉lg，植酸酶2g (含量为4000U/g)，步骤I)制备的复合微生态制剂10g，低聚木糖2g，膨润土 100g，余量为稻壳糠。本发明预混料的饲喂效果实验 实验时间前10天是预饲期，后30天为实验期。试验设计选用33周龄的海兰褐壳鸡蛋2000只，采用单因子完全随机试验设计，随机分为5个处理组(对照组、土霉素组、微生态制剂组、本发明预混料组)，每组5个重复，每个重复100只鸡。初始体重、初始产蛋率、初始蛋重，经统计分析，组间差异不显著(P >0.05)。日粮组成如表I。表I日粮组成
Ial重复数日粮组成
对照组5基础日粮**
土霉素组5基础日粮+0.015% 土霉素
微生态制剂组5基础日粮+0. 05 %复合微生态制剂
本发明预混料组 5基础日粮+制备的预混料5%**注基础日粮中除未添加破壁雨生红球藻粉和微生态制剂外，其它组分与本发明预混料组相同。饲养管理试验鸡采用三层阶梯笼养，人工喂料，自由饮水。试验测定指标以重复为单位，记录产蛋数、蛋重、破蛋个数、死淘鸡数、耗料量等，计算平均产蛋率、平均蛋重、平均日耗料、饲料转化率、死淘率和破蛋率。实验结果预混料组的蛋黄相比其它组的蛋黄要红，红心蛋色彩适宜。28天后对照组蛋黄颜色得分是4. 11，土霉素组得分是4. 05，微生态制剂组得分是9. 14，本发明预混料组得分是12. 54(图 I)。微生态制剂预混料组、预混料组与对照组相比，产蛋率分别提高了 1.52%、
2.09%，死淘率分别降低了 39%、50%;预混料组与对照组相比，料蛋比下降了 3. 08%，破蛋率下降了 38.8% ;土霉素组与对照组相比，仅死淘率降低了 37.6% ;与土霉素组相比，预混料组能够提高产蛋率1.9%，降低破蛋率42%。实施例3预混料的制备I)制备复合微生态制剂称取实施例I制备的地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094菌粉、粪肠球菌CGMCC No. 5092菌粉、扣囊覆膜孢酵母CGMCC No. 2387菌粉和葡萄糖，按重量配比为20 : 25 : 5 : 50混合，得复合微生态制剂。其中上述三种菌粉的活菌数含量分别为粪肠球菌3X 101QCfu/g、地衣芽孢杆菌4X 101QCfu/g、扣囊覆膜孢酵母5X 109cfu/g。2)本发明预混料的制备每千克预混料配方如下破壁雨生红球藻粉30g(用比色法測定提取虾青素后的破壁雨生红球藻残渣的虾青素含量为0.4% )，豆柏300g，磷酸氢钙150g，石粉150g，食盐50g,烟酸O. 9g，D-泛酸钙O. Ig,含量为2 %的生物素O. 08g,含量为50 %的氯化胆碱15g，五水硫酸铜lg，一水硫酸亚铁6g, —水硫酸锌3g, —水硫酸猛4g,碘含量为I %的碘化钾预混剂4g，硒含量为I %的亚硒酸钠预混剂O. 3g，蛋氨酸35g，こ氧基喹啉(含量为66 % ) I. 5g，植酸酶Ig (含量为4000U/g)，步骤I)制备的复合微生态制剂5g，低聚木糖lg，膨润土 100g，余量为稻壳糠。将上述各种组分投入混合机，混合均匀，然后通过制粒机制粒或粉料直接密封包装。用制备的预混料进行饲喂试验，试验条件和方法同实施例I。结果表明，本发明预混料组的蛋黄相比其它组的蛋黄要红，红心蛋色彩适宜。微生态制剂预混料组、预混料组与空白对照组相比，产蛋率分别提高了 1.38%、1.98%，死淘率 分别降低了 40^,45% ;预混料组与空白对照组相比，料蛋比下降了 2. 08%，破蛋率下降了31.6% ;而土霉素组与对照组相比，仅死淘率降低了 35.7% ;预混料组与抗生素组相比，能够提高产蛋率I. 65%，降低破蛋率35%。实施例4预混料的制备I)制备复合微生态制剂称取实施例I制备的地衣芽孢杆菌CGMCC No. 5094菌粉、粪肠球菌CGMCC No. 5092菌粉、扣囊覆膜孢酵母CGMCC No. 2387菌粉和葡萄糖，按重量配比为26 18 8 48混合，得复合微生态制剂。其中上述三种菌粉的活菌数含量分别为粪肠球菌5X101(lCfU/g、地衣芽孢杆菌2X 101QCfu/g、扣囊覆膜孢酵母7X 109cfu/g。2)本发明预混料的制备每千克预混料配方如下破壁雨生红球藻粉80g(用比色法測定提取虾青素后的破壁雨生红球藻残渣的虾青素含量为O. 05% )，豆柏150g，磷酸氢钙200g，石粉250g，食盐70g,烟酸O. 6g，D-泛酸钙O. 2g,含量为2 %的生物素O. 12g，含量为50 %的氯化胆碱25g，五水硫酸铜2g，一水硫酸亚铁3g，一水硫酸锌6g，一水硫酸锰8g，碘含量为I %的碘化钾预混剂2g，硒含量为I %的亚硒酸钠预混剂O. 7g，蛋氨酸20g，含量为66 %的こ氧基喹啉O. 5g，植酸酶Ig (含量为5000U/g)，步骤I)制备的复合微生态制剂5g，低聚木糖3g，膨润土 100g，余量为玉米芯粉。将上述各种组分投入混合机，混合均匀，然后通过制粒机制粒或粉料直接密封包装。用制备的预混料进行饲喂试验，试验条件和方法同实施例I。结果表明，预混料组的蛋黄颜色相比其它组的蛋黄要红，红心蛋色彩适宜。微生态制剂预混料组、预混料组与空白对照组相比，产蛋率分别提高了 I. 40^.2.01%,死淘率分别降低了 35%、44%;预混料组与对照组相比，料蛋比下降了 2. 86%，破蛋率下降了 30. 3%;土霉素组与对照组相比，仅死淘率降低了 29. 4% ;与土霉素组相比，预混料组能够提高产蛋率I. 55%，降低破蛋率34%。
从上述实施例的结果可以看出，本发明的添加天然虾青素的预混料能够显著提高产蛋率，降低死淘率，红心蛋色彩适宜。说明了本发明的预混料中因添加了破壁雨生红球藻粉，氨基酸、微量元素配比合理，促进了饲料转化效率，提高了蛋鸡的生产性能和蛋壳质量，能够减少疾病的发生，降低死淘率，提高经济效率。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。


本发明公开了一种含天然虾青素的预混料，其含有下述重量配比的组分破壁雨生红球藻粉30-80g/kg，豆粕150-300g/kg，磷酸氢钙150-200g/kg，石粉150-250g/kg，食盐50-70g/kg，烟酸0.6-0.9g/kg，D-泛酸钙0.1-0.2g/kg，生物素0.0016-0.0024g/kg，氯化胆碱7.5-12.5g/kg，铜盐按铜计0.256-0.512g/kg，铁盐按铁计1-2g/kg，锌盐按锌计1.2-2.4g/kg，锰盐按锰计1.3-2.6g/kg，碘盐按碘计0.02-0.04g/kg，硒盐按硒计0.003-0.007g/kg，蛋氨酸20-35g/kg，乙氧基喹啉0.33-1.0g/kg，植酸酶1-3g/kg，复合微生态制剂5-15g/kg，低聚木糖1-3g/kg，膨润土80-120g/kg。本发明的添加天然虾青素的预混料能够显著提高产蛋率，降低死淘率，红心蛋色彩适宜，可促进了饲料转化效率，提高了蛋鸡的生产性能和蛋壳质量，能够减少疾病的发生，降低死淘率，提高经济效率。