专利名称：皮肤填充剂组合物的制作方法人体的软组织(soft tissue)通过胶原、弹力蛋白等蛋白质及包含粘多糖的细胞外基质维持其结构，当由于先天性原因或外部冲击或病因等原因发生软组织的缺失时，通过在其相应部位插入生物体组织或合成高分子化合物扩张软组织来复原或纠正其形态。将与皮肤组织类似的成分通过注射注入到特定部位来扩张软组织，从而用于改善皱纹或纠正轮廓等的物质一般叫做皮肤填充剂(dermal filler)或填充剂(filler)。而这样的皮肤填充剂根据其显示效果的作用机制分为以下两种类型一类皮肤填充剂是通过注入的物质直接扩大体积来显示扩大效果；另一类皮肤填充剂除了注入物质显示直接体积效果之外还通过物质的刺激在周边形成新的如胶原的自体组织来显示体积效果。此外，根据皮肤填充剂的时效还可以分为以下三种类型。第一、1年内迅速分解并被吸收的皮肤填充剂；第二、分解期限与所述1年内迅速分解并被吸收的皮肤填充剂相比较长，但最终会分解并被吸收的皮肤填充剂；第三、不会在生物体内分解永久滞留的皮肤填充剂。作为目前常用的皮肤填充剂的主要成分的胶原(collagen)或透明质酸 (hyaluronic acid)等属于直接扩大体积来显示扩大效果，在1年内迅速分解并被吸收的皮肤填充剂；聚丙烯酰胺(polyacrylamide)等成分属于直接扩大体积并在生物体内不分解永久滞留的皮肤填充剂；聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)属于除了注入物质的直接性体积效果之外还通过物质的刺激在周边形成新的如胶原的自体组织来显示体积效果，在生物体内不分解，永久滞留的皮肤填充剂；交联葡聚糖属于除了注入物质的直接性体积效果之外还通过物质的刺激在周边形成新的如胶原的自体组织来显示体积效果，分解期限与所述1年内迅速分解并被吸收的皮肤填充剂相比较长，但最终会分解并被吸收的皮肤填充剂。优选的皮肤填充剂需要具备以下几个条件第一、生物相容性优秀且安全；第二、 由于费用低廉在使用上负担少；第三、移植部位的体积效果可长时间持续2年以上。目前常用的皮肤填充剂各自以胶原或透明质酸(hyaluronic acid)为主要成分的产品居多。首先，将胶原作为主要成分的皮肤填充剂有主要成分为猪胶原(porcine collagen)的EV0LENCE 30 (ColBar生命科技公司皮肤填充剂的商标名)、主要成分为牛胶原(bovine collagen)的Zyderm或Zyplast (以上为hamed公司皮肤填充剂的商标名)、主要成分为人体胶原(human collagen)的CosmoDerm或CosmoPlast (以上为 hamed公司皮肤填充剂的商标名)等。将透明质酸(hyaluronicacid)作为主要成分的有Rofilan(Rofil/Philoderm公司皮肤填充剂的商标名)、Perlane, Restylane (以上为 Medicis/Q-Med AB公司皮肤填充剂的商标名)、Teosyal (Teoxane SA公司皮肤填充剂的商标名)、Surgiderm(Corneal Laboratoire公司皮肤填充剂的商标名)等。然而，仅将胶原或透明质酸(hyaluronic acid)作为主要成分的皮肤填充剂，相对于其昂贵的价格而言效果的持续时间则太短，所以临床上的实际应用受到限制。此外，时效较长的产品有将透明质酸(hyaluronic acid)和交联葡聚糖(DEAE sephadex)作为主要成分的MATRIDEX和CRMDx (BioPolymer GmbH&Co. KG公司皮肤填充剂的商标名)。皮肤填充剂主要成分为透明质酸(hyaluronic acid)和交联葡聚糖粒子时，注入时立即显示体积扩大效果，透明质酸(hyaluronic acid)经过6到12个月分解并被吸收， 其空间由受交联葡聚糖刺激新形成的自体胶原来填充。透明质酸(hyaluronic acid)为利用表皮和真皮之间的细胞间质成分使细胞相互接合、起到细胞间的润滑油作用的物质，注入用皮肤填充剂中使用的透明质酸(hyaluronic acid)为人工合成的。从时效方面看，透明质酸(hyaluronic acid)在1年内最终分解消失，交联葡聚糖虽然在持续1年到2年的较长时间后最终全部分解消失，但是由于新形成的胶原等自体组织的形成，其效果较为持久。 但是由于透明质酸(hyaluronic acid)成分占了产品的大部分，存在皮肤填充剂相当贵的问题。比所述包含交联葡聚糖的皮肤填充剂效果更持久的产品有将聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMA)及胶原作为主要成分的Artefill (ArtesMedical公司皮肤填充剂的商标名)。首先，精制牛的胶原质成分(bovine collagen)使其成为液体状态后与聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMA)混合，然后注入到真皮以下来维持体积扩大效果，在应用这样的皮肤填充剂的情况下，聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)在注入后立即显示扩大效果，由胶原的分解吸收所产生的空间由聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)的刺激新形成的自身的胶原所填充，从而维持体积扩大效果。但是由于使用的胶原为牛的提取物，源于动物，所以使用前必须进行过敏原皮试 (allergic skin test)等前处理，这对实际临床应用造成大的障碍。此外，由于胶原成分相当贵，因此存在施术时患者的经济负担大，占大部分产品体积的胶原成分在注入时在人体内过于迅速分解吸收(3到6周内全部吸收)而无法确保由于形成新胶原来体积维持的缺点。此外，聚甲基 丙烯酸甲酯(PMMA)成分在生物体内不会慢慢地分解而是滞留，因此难以消除对将来发生副作用的可能性的恐惧，这也是妨碍其使用的一个原因。此外，Boume等人的美国专利US 2003/0233150中公开了将聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMA)作为基本聚合体、葡萄聚糖等作为载体的用于身体组织的复原或扩大的组合物。但是，如上所述，所述美国专利US 2003/0233150中，由于聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)成分在生物体内不会慢慢地分解而是滞留，因此存在发生副作用的可能性。此外，在应用交联葡聚糖 (cross-linked dextran)的情况下，注入到组织内后一部分直接扩充体积，同时不会被巨噬细胞吞噬，一段时间内在体内引起异物反应来诱导自体胶原的形成进而起到扩大作用， 相比之下Bourne等人的所述美国专利US2003/0233150中使用的葡萄聚糖(dextran)存在注入到生物体内后数日内分解而发挥不了体积扩大效果，仅是单纯的载体(carrier)的问题。最近，出现了以聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和交联葡聚糖(cross-linked dextran)为主要成分的皮肤填充剂组合物(专利第10-0759091号)，其改善了一部分上述现有皮肤填充剂的问题。该组合物在施术前不需要过敏原皮试等前处理，费用低廉，而且不容易在体内分解吸收而效果持久，因此在需要注入20cc以上的大量皮肤填充剂的注射阴茎扩大手术中4也能使用。不过所述组合物注入到皮肤下面后，其触感较硬，所以可适用于注射阴茎扩大， 但不适合在脸部等需要较为柔软的触感的人体其他很多部位处使用。此外，由于混合使用两种主要聚合体，使得制备工艺复杂且难以获得人体使用的许可，因此存在实用化较困难的问题。此外，由于聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)成分在生物体内不会慢慢地分解而是滞留的缘故，仍然难以消除对将来发生副作用的可能性的恐惧。另外，皮肤填充剂中不存在单独将交联葡聚糖用作主要成分的皮肤填充剂，其理由是在现有的所有皮肤填充剂中附属使用的交联葡聚糖的分子量在30，000以下(产品名DEAE Sephadex 25)，干燥状态的珠滴大小(bead size)为 40 μ m 至 120 μ m，在 0. 15M 氯化钠水溶液中水化时，珠滴大小(bead size)中间值的直径为127 μ m，水化状态/干燥状态的直径比仅为1.83(转换为体积比为6. 1)，使得体积扩大效果非常微小，并且没有载体(carrier)的话难以注入，必须得有胶原或透明质酸(hyaluronic acid)等自己具有体积效果的载体(carrier)，并且注入部位的触感由于组织反应形成的硬英膜而会感觉很硬。 (参照图2、，因此，现有的交联葡聚糖存在单独使用时注入困难且注入部位产生硬的触感， 而不适合作填充剂的单一主要成分，必须添加胶原或透明质酸等物质用作载体(carrier) 兼主要成分来使用的问题。
(一)要解决的技术问题本发明用于解决上述现有技术中所使用的皮肤填充剂的问题，本发明中即使将分子量为30，000至100，000的交联葡聚糖作为皮肤填充剂的主要成分单独使用也易于注入， 并且可维持注入部位的柔软的触感。此外，本发明的目的在于提供一种皮肤填充剂组合物，其与现有的将胶原或透明质酸(hyaluronic acid)作为主要成分的皮肤填充剂所不同，其不包含胶原或透明质酸，因此施术前不需要过敏原皮试等前处理，并且葡萄聚糖的费用低廉，比胶原或透明质酸在体内更难于分解吸收，使得施术的体积扩大效果比胶原或透明质酸维持得更长久稳定，从而也适用于需要20cc以上的大量皮肤填充剂的注射阴茎扩大等手术中，并且由于与现有的将聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和交联葡聚糖作为主要成分的皮肤填充剂不同，其不包含聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)，从而消除了因成分不会慢慢分解而是滞留在生物体内而产生的副作用的恐惧，因此易于许可人体使用，且制备工艺较为简单而易于实用化。此外，由于注入到皮肤下面时触感柔和，不仅可用于阴茎皮肤，而且在脸部等人体其他很多部位的皮肤上都可使用。(二)技术方案为实现所述目的，本发明提供一种经注射注入到体内就可迅速赋予任意形态并维持柔软的触感的新皮肤填充剂组合物，更具体地，提供一种分子量在30，000至100，000的， 包含交联葡聚糖、氯化钠水溶液以及粘度调节剂(包含聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)的情况除外)的皮肤填充剂组合物。此外，本发明提供一种皮肤填充剂组合物，每IOml的所述皮肤填充剂组合物包括0. 3 0. 4g分子量在30，000至100，000中的经过细胞毒性除去处理的交联葡聚糖、pH6 pH8的作为等渗液的氯化钠水溶液以及粘度调节剂(包含聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA) 的情况除外)。所述粘度调节剂为羟丙基甲基纤维素(HPMC)时使用0. 02 0. 06g。此外，本发明提供一种皮肤填充剂组合物，每IOml的所述皮肤填充剂组合物包括0. 3 0. 4g分子量在30，000至100，000中的交联葡聚糖、pH6 pH8的作为等渗液的氯化钠水溶液以及粘度调节剂(包含聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)的情况除外)。所述粘度调节剂为羟丙基甲基纤维素(HPMC)时使用0. 02 0. 06g。本发明还涉及皮肤填充剂组合物的制备方法，目的在于提供一种皮肤填充剂组合物的制备方法，所述方法包括在0. 3 0. 4g分子量为30，000至100，000中的交联葡聚糖中放入生理盐水(0. 9%氯化钠水溶液) 持续清洗将葡萄聚糖外部空间的溶液调为等渗液；将调为等渗液的氯化钠水溶液的PH调为pH6 pH8 ；添加粘度调节剂。此时，考虑到交联葡聚糖中可能有杂质，优选地进行细胞毒性除去处理。包含细胞毒性除去处理步骤时，皮肤填充剂组合物的制备方法包括在蒸馏水中放入0. 3 0. 4g分子量在30，000至100，000的交联葡聚糖进行水化，并且在一定时间、 高温、高压下进行灭菌处理后，除去未被吸收到交联葡聚糖水化物内部的蒸馏水，再加入氯化钠水溶液使交联葡聚糖内部的毒素溶出；往所述经细胞毒性除去处理的交联葡聚糖中放入生理盐水(0. 9%氯化钠水溶液)，并持续清洗使所述交联葡聚糖外部空间的溶液调为等渗液；将所述调为等渗液的葡萄聚糖外部空间的溶液的PH调为pH6 pH8 ；添加粘度调节剂。(三)有益效果本发明由不是从动物提取的高分子物质构成，因此生产工艺简单，并且不使用高价的胶原，显著减少了制备成本。本发明使用分子量在30，000至100，000中、经细胞毒性除去处理的交联葡聚糖作为皮肤填充剂的主要成分，为现有的皮肤填充剂中未曾提出的新方案，具有易于注入皮肤填充剂，注入部位能够维持更柔软的触感的效果。此外，与现有的将胶原或透明质酸(hyaluronic acid)作为主要成分的皮肤填充剂不同，其不包含胶原或透明质酸，使得施术时不需要进行过敏原皮试等前处理，并且葡萄聚糖的费用低廉，在体内也不容易分解吸收，使施术的体积扩大效果更长久稳定，从而也适合在需要注入20cc以上大量皮肤填充剂的注射阴茎扩大等手术中使用。特别是，与将聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和交联葡聚糖(crosslinked dextran)两种作为主要成分的皮肤填充剂不同，其不包含在注入部位永久滞留的聚甲基丙烯酸甲酯， 消除了对将来产生副作用的可能性的忧虑，使人体使用许可更容易，制备工艺更简单，从而更易于实用化，并且由于注入到皮肤下面时具有柔软的触感，不仅在阴茎的皮肤，而且在脸部等人体其他很多部位的皮肤上都能使用。图1为装有本发明皮肤填充剂的小瓶示意图。图2为将目前所有皮肤填充剂组合物中附属使用的分子量为30，000以下(产品名DEAE Sephadex25)的交联葡聚糖与本发明的皮肤填充剂组合物的分子量在30，000至 100，000中的交联葡聚糖以相同的含量在生理盐水(0.9%氯化钠水溶液)中水化时的小瓶示意图。

此外，将交联葡聚糖水化物粒子之间的氯化钠水溶液调为等渗液的步骤为所述除去交联葡聚糖的细胞毒性的处理步骤中获得的交联葡聚糖粒子之间的氯化钠水溶液，通过渗透压使交联葡聚糖粒子内部的水分排出到葡萄聚糖粒子外部的氯化钠水溶液中，使得交联葡聚糖粒子之间的氯化钠水溶液单位体积钠的浓度减少(或者如果在所述除去交联葡聚糖的细胞毒性的处理步骤中使用了 0.9%以上的高浓度氯化钠水溶液时，通过渗透压使交联葡聚糖粒子内部的水分排出到葡萄聚糖粒子外部的氯化钠水溶液中，使得交联葡聚糖外部空间的溶液即使有所稀释，但与等渗液相比其钠浓度仍然会高)，为使所述氯化钠水溶液成为等渗液，使用生理盐水(0.9%氯化钠水溶液)持续地清洗，使所述交联葡聚糖外部空间的溶液与氯化钠水溶液成为等渗液。此外，所述添加粘度调节剂的步骤使所述调好pH的交联葡聚糖水化物维持凝胶 (gel)状态，并使皮肤填充剂的注入变得容易，该粘度调节剂为羟丙基甲基纤维素时，在每 IOmi所述调好pH的皮肤填充剂中优选地添加0. 02 0. 06g。将本发明的皮肤填充剂组合物等价格低廉的交联葡聚糖作为主要成分的皮肤填充剂被使用时，通过注射可将皮肤填充剂迅速注入到真皮下面，使得可维持适用部位的迅速扩大和柔软的触感同时，与现有的皮肤填充剂不同，其不包含胶原或透明质酸，使得施术前不需要过敏原皮试等前处理，费用低廉，在体内不易于分解吸收，使得能够更长久稳定地维持体积扩大效果，从而也适于在需要注入20cc以上大量皮肤填充剂的注射阴茎扩大手术等手术中使用。尤其是，与将聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和交联葡聚糖(crosslinked dextran) 两种作为主要成分的皮肤填充剂不同，不包含在注入部位永久地滞留的聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMA)，消除了对在将来发生副作用可能性的忧虑，使得人体许可过程更容易，并且由于制备工艺更简单而具有更易于实用化的效果，并且由于注入到皮肤下面时具有柔软的触感， 从而具有不仅在阴茎皮肤上，而且在脸部等人体其他广泛部位的皮肤上也能使用的出色的效果。


本发明涉及一种皮肤填充剂组合物及其制备方法，其将分子量在30,000至100,000的交联葡聚糖作为主要成分单独使用也能维持皮肤填充剂的适用部位迅速扩大和柔软的触感，施术前不需要过敏原皮试等前处理，费用低廉，在体内不易于分解吸收使得能够更长久稳定地维持体积扩大效果，从而也适于在需要注入20cc以上大量皮肤填充剂的注射阴茎扩大手术等手术中使用，并且由于制备工艺更简单更易于实用化，并且注入到皮肤下面时触感柔软，从而不仅在阴茎皮肤上，还可以在脸部等人体其他广泛部位的皮肤上也能使用。