卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管的制作方法【技术领域】[0001]本发明涉及一种卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管，属于医疗和实验室设备【技术领域】。[0002]大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以IOOmLg检样内大肠菌群最大或然数(most probable number, MPN)表示。对大肠菌群进行检测时公知的实验操作步骤为:(I)检样稀释:①以无菌操作将检样25mL或g放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内瓶内予置适当数量的玻璃珠或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1: 10的均勻稀释液。固体检样最好用均质器，以8000-10000r/min的速度处理Imin,做成1: 10的均匀稀释液。②用ImL灭菌吸管吸取1: 10稀释液lmL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1: 100的稀释液。③另取ImL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用I支ImL灭菌吸管。④根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管。(2)乳糖发酵试验:将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在ImL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，接种量在ImL及ImL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36 ± I °C温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气或变色者，则按下列程序进行。(3)分离培养:将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1°C温箱内，培养18-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。(4)证实试验:在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36土 1°C温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。(5)报告:根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每IOOmLg大肠菌群的MPN值。在公知的实验操作过程中，由于所用乳糖发酵管数量较多，操作起来较为麻烦，同时，所用乳糖发酵管由于多次操作，被污染的机会非常多，从而为结果必须权威准确的卫生检验要求带来很大挑战，也是摆在卫生检验人员面前的一个难题。怎样设计一种能够减少实验操作的步骤，让卫生检验人员操作次数减少，从而尽最大可能降低检样被污染成为急需解决的一个难题？所以发明一种能够将多个乳糖胆盐发酵管连通起来，一次操作即可完成检样中有无大肠菌群验证的卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管是必要的。
[0003]为了解决减少实验操作的步骤，让卫生检验人员操作次数减少，从而尽最大可能降低检样被污染的难题，本发明提供了一种卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管，该卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管将多个乳糖胆盐发酵管连通起来，一次操作即可完成检样中有无大肠菌群验证，达到减少实验操作的步骤，让卫生检验人员操作次数减少，从而尽最大可能降低检样被污染的目的。[0004]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:[0005]卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管，材料为石英玻璃，包括培养大肠菌群的大发酵管9、小发酵管13及为实现梯级反应而设计的辅助结构所组成；所述的大发酵管9的内直径为2-5厘米，壁厚1-3毫米，长度为3-10厘米，共3个，彼此之间由石英玻璃质的管间连接3连接在一起，处在一个平面上或者呈等边三角形彼此相靠在一起；3个大发酵管9的基部由连通管8两两连通，在排在最后的大发酵管9的上端，设置有平衡孔15 ;所述的小发酵管13的内直径为2-5厘米，壁厚1-3毫米，长度为1-5厘米，上下2组，每组3个，共6个，每组3个小发酵管13彼此之间由石英玻璃质的管间连接3连接在一起，处在一个平面上或者呈等边三角形彼此相靠在一起；3个小发酵管13的基部由进液连通管11两两连通，在排在最后的小发酵管13的上端，也设置有平衡孔15，在每个大发酵管9和小发酵管13内均设置有I个杜氏小倒管10 ;所述的为实现梯级反应而设计的辅助结构包括注液管盖1、上缓注囊2、管间连接3、稀释液管4、初液管5、注液管6、下缓注囊7、连通管8、杜氏小倒管10、进液连通管11、分液管12、三通液管14、平衡孔15和导液管16。
[0006]所述的注液管盖I石英玻璃质地，分上下两部分，上半部分圆柱形，厚度为0.5-2厘米，直径为3-8厘米；下半部分圆台形，上底游离，直径为1.5-4厘米；下底连接在上半部分下表面中央，直径为2-5厘米，高度为1-5厘米，侧面磨砂。
[0007]所述的上缓注囊2圆球状，直径为1.6-4.6厘米，下端连通初液管5上端开口，上端开口于注液管6上端管内；下缓注囊7圆球状，直径为1.6-4.6厘米，下端连通连通管8上端开口，上端与初液管5下端开口连通。
[0008]所述的稀释液管4是位于初液管5和导液管16的中央连通三通液管14到小发酵管13的圆形管道，内径为2-5毫米，壁厚0.2-1毫米；初液管5内径为5-10毫米，壁厚
0.2-1毫米；注液管6和导液管16均是保护用管，内直径为2-5厘米，壁厚3-5毫米，长度为10-20厘米。
[0009]所述的杜氏小倒管10石英玻璃质，内径为3-5毫米，壁厚1-3毫米，长度为2_3厘米；进液连通管11是小发酵管13基部相互之间进行连通的管道，管内直径为2-5毫米，壁厚1-3毫米；分液管12是三通液管14外延的一个分支，下端连接中间一组小发酵管13，内径为2-5毫米，壁厚0.2-1毫米。
[0010]本发明的有益效果是，卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管将多个乳糖胆盐发酵管连通起来，一次操作即可完成检样中有无大肠菌群验证，达到减少实验操作的步骤，让卫生检验人员操作次数减少，从而尽最大可能降低检样被污染的目的。卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管制作简单，操作方便，实用性强。



[0011]下面结合附图对本发明进一步说明。
[0012]图1是本发明卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管的整体结构示意图。
[0013]图2是本发明卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管的纵剖面结构示意图。
[0014]图中1.注液管盖，2.上缓注囊，3.管间连接，4.稀释液管，5.初液管，6.注液管，
7.下缓注囊，8.连通管，9.大发酵管，10.杜氏小倒管，11.进液连通管，12.分液管，13.小发酵管，14.三通液管，15.平衡孔，16.导液管。

[0015]实施例一
[0016]卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管，材料为石英玻璃，包括培养大肠菌群的大发酵管9、小发酵管13及为实现梯级反应而设计的辅助结构所组成。
[0017]所述的大发酵管9的内直径为2-5厘米，壁厚1-3毫米，长度为3_10厘米，共3个，彼此之间由石英玻璃质的管间连接3连接在一起，处在一个平面上或者呈等边三角形彼此相靠在一起。3个大发酵管9的基部由连通管8两两连通，液态的培养基可以由一个管进入另一个管内，根据U形管原理，3个大发酵管9内培养基的量是相同的。因为大气压的存在，在往大发酵管9注入液体培养基时，或者对大发酵管9进行清洗时，液体不容易往里流淌。为了使液体顺利充满大发酵管9或者方便清洗，在排在最后的大发酵管9的上端，设置有平衡孔15，使得大发酵管9两端的压力相等，以便液体或灭菌和杀毒用的高温高压气体从注液管6顺利进入大发酵管9内。
[0018]所述的小发酵管13的内直径为2-5厘米，壁厚1-3毫米，长度为1_5厘米，上下2组，每组3个，共6个，每组3个小发酵管13彼此之间由石英玻璃质的管间连接3连接在一起，处在一个平面上或者呈等边三角形彼此相靠在一起。3个小发酵管13的基部由进液连通管11两两连通，液态的培养基可以由一个管进入另一个管内，根据U形管原理，3个小发酵管13内培养基的量是相同的。为了使液体顺利充满小发酵管13或者方便清洗，在排在最后的小发酵管13的上端，也设置有平衡孔15，使得小发酵管13两端的压力相等，以便液体或灭菌和杀毒用的高温高压气体从稀释液管4、三通液管14和分液管12顺利进入小发酵管13内。在每个大发酵管9和小发酵管13内均设置有I个杜氏小倒管10。
[0019]所述的为实现梯级反应而设计的辅助结构包括注液管盖1、上缓注囊2、管间连接
3、稀释液管4、初液管5、注液管6、下缓注囊7、连通管8、杜氏小倒管10、进液连通管11、分液管12、三通液管14、平衡孔15和导液管16。注液管盖I石英玻璃质地，形状和结构同公知的玻璃瓶盖，分上下两部分，上半部分圆柱形，厚度为0.5-2厘米，直径为3-8厘米；下半部分圆台形，上底游离，直径为1.5-4厘米；下底连接在上半部分下表面中央，直径为2-5厘米，高度为1-5厘米，侧面磨砂，用以增加注液管盖I与注液管6上端开口之间的密封效果，降低大肠菌群培养过程中被污染的风险。上缓注囊2圆球状，直径为1.6-4.6厘米，下端连通初液管5上端开口，上端开口于注液管6上端管内。下缓注囊7圆球状，直径为1.6-4.6厘米，下端连通连通管8上端开口，上端与初液管5下端开口连通。上缓注囊2和下缓注囊7的作用均是让液态的培养基或灭菌用的高温气体更加有效地进入大发酵管9和小发酵管13中。管间连接3石英玻璃质地，能够将需要连接的管道在外壁上连接起来，使得相邻的各管道形成一个整体。稀释液管4是位于初液管5和导液管16的中央连通着三通液管14的圆形管道，内径为2-5毫米，壁厚0.2-1毫米，可以将稀释液或初液导入到小发酵管13中。初液管5是将液态培养基初液注入大发酵管9的管道，内径为5-10晕米,壁厚0.2-1晕米。杜氏小倒管10石英玻璃质，内径为3-5毫米，壁厚1-3毫米，长度为2-3厘米，其作用是显示感染大肠杆菌的检验物品中具有产气的大肠菌。因为乳糖胆盐发酵管是一种微生物培养基，用于临床、药品、食品大肠菌的培养，实际生产中常用来检验物品是否感染大肠菌群，乳糖胆盐发酵管用溴甲酚紫PH5.2?6.8作酸碱指示剂，微生物产酸时，颜色由蓝紫色变为黄色，微生物产气时，杜氏小倒10上面空出一截。进液连通管11是小发酵管13基部相互之间进行连通的管道，管内直径为2-5毫米，壁厚1-3毫米。分液管12是三通液管14外延的一个分支，可以将液态培养基分装到中间的小发酵管13中，内径为2-5毫米，壁厚0.2-1毫米。平衡孔15设置在排在最后的大发酵管9或小发酵管13的上端，打开时可使大发酵管9或小发酵管13两端的压力相等，以便液体或灭菌和杀毒用的高温高压气体从注液管6顺利进入大发酵管9内或从稀释液管4、三通液管14和分液管12进入小发酵管13。一旦灌注完毕，可用盖子或橡皮套将平衡孔15封堵，以防外界的细菌或病毒进入卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管。注液管6和导液管16均是保护用管，内直径为2-5厘米，壁厚3-5毫米，长度为10-20厘米。
[0020]在对大肠菌群进行检验时，对所用培养基和卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管进行高压灭菌，然后在无菌条件下，用注射器将不同稀释倍数的检样注入不同的发酵管中，封堵上卫生检验中大肠菌群测定用梯级反应乳糖胆盐发酵管所有开口，即可放在36±1°C温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行:首先，分离培养:将产气的发酵管用注射器在无菌条件下通过平衡孔15抽取培养液，分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36土 1°C温箱内，培养18-24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。然后进行证实试验:在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1°C温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。最后报告:根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN最大或然数，most probable number)检索表,报告每IOOmLg大肠菌群的MPN值。
[0021]以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书起等效物界定。