专利名称：一种治疗肝性脑病和乙肝的药物组合物的制作方法乙肝(全称乙型病毒性肝炎)是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性 疾病。发展中国家发病率比较高，据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者(HBsAg携带 者)超过2.8亿，我国约占1.3亿。多数无症状，其中1/3出现肝损害的临床表现。目 前我国有乙肝患者3000万。乙肝久治不愈还会引发患者肝脏的病理改变，导致肝细胞变 性、坏死、炎性细胞浸润，肝细胞再生，纤维组织增生等。肝性脑病(Hepatic encephalopathy，HE)系严重肝功能衰竭所致的以代谢紊乱为主要特征的中枢神经系统功能失调综合征，其发病机制是复杂和多因素的，涉及多种 物质代谢异常，其中氨在HE发病机制中处于中心地位。临床上约80% HE患者血及脑 脊液中氨水平升高。几乎所有学者都发现严重肝功能衰竭时，血氨浓度明显高于正常水 平。基于血氨升高在HE、脑水肿、颅内压升高的发病机制中发挥着重要作用，目前临床 上其主要治疗措施就是降低血氨。目前临床上治疗乙肝的药物较多，中药复方制剂和化药均有，化药主要以干扰 素和核苷酸类化合物为主，都存在服药时间长、治愈率不高等缺点。治疗肝性脑病的 药物主要以多种化药配合使用为主，单独使用某一中药成方制剂治疗肝性脑病未曾见报道。
本发明的目的在于提供一种治疗肝性脑病和乙肝的纯中药药物组合物及其制备 方法，该药物组合物以病因和对症治疗为主，即通过清热解毒、利湿、凉血祛瘀、止 血、泄热通便之功效，从而达到抗病毒、凉血、止血、降血氨、泻宿便、减少肠道内毒 素吸收、护肝脑、防治肝性脑病和乙肝的作用。为实现上述发明目的，本发明采用的具体技术方案是一种治疗肝性脑病和乙肝的纯中药药物组合物，其特征在于原料的重量份组成为 大黄5 50份、刺梨根10 60份、黑豆5 30份、六月雪20 90份、血盆草 20 100份、阴行草30 150份、毛冬青5 40份、甘草10 60份。其中，优选的重量份组成为大黄35份、黑豆13份、血盆草85份、刺梨根53份、毛冬青26份、阴行草130份、 六月雪78份、甘草40份。本发明药物组合物可按制剂学上的常规制备工艺制成供口服用的片剂、胶囊、 颗粒剂或糖浆，以及供静脉注射用的液体剂或粉剂等。下面结合药效学试验，对本发明的药理药效作用及所产生的技术效果说明如下1、药效学试验 1.1材料1丄1动物1日龄广西麻鸭，由广西畜牧种苗场提供。新西兰兔，体重2.0 2.5kg， 雌雄不限，由四川省实验动物专委会养殖场提供。药物试验药物供试品水提物(6g生药/ml)。由成都力思特制药股份有 限公司提供，批号100501。对照药物乳果糖口服溶液来源于大连美罗中药厂有限 公司，规格100ml:50g，批号100508; 5%葡萄糖注射液，四川科伦药业股份有限公 司，批号1003006;拉米夫定，葛兰素-史克制药(苏州)有限公司，规格lOOmg，批 号09010007。临用时均用蒸馏水配成所需浓度。1.1.3仪器与试剂Model 450型自动酶标仪(美国Bi0-Rad公司)；缺口翻译药 盒，普洛卖格公司；病毒鸭乙型肝炎病毒，鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)强阳 性血清，采自上海麻鸭，-70°C保存。血氨试剂干片(美国强生公司配套产品，批号 1005- 7055)；盐酸普鲁卡因注射液(山东方明药业股份有限公司，批号0903211，规 格40mg · 2ιηΓ1)；氯化铵、碳酸氢钠、氯化钠均为分析纯。方法
1.2.1对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗作用 1.2.1.1试验方法
鸭乙型肝炎病毒感染取1日龄北京鸭，经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性 鸭血清，每只0.2mL,在感染后7d取血，分离血清，-70°C保存。待检。DHBV感染雏鸭7d后，随机分为5组，每组10只，口服给药2次/d，连续给 药8周；病毒对照组口服同蒸馏水，阳性对照组口服拉米夫定(17mg/kg/d)，试验组 口服，高剂量组115g(生药)/kg/d、中剂量组76g(生药)/kg/d、低剂量组38g(生药)/ kg/d、于感染后7d即用药前(TO)，用药第14天(T5)，用药第28天(TlO)和停药后第 14天(P14)，自鸭腿胫静脉取血，分离血清。-70°C保存。待检。将待检鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平动态。按缺口翻 译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并做鸭血清斑点杂交，放射自显影 膜片斑点，用酶标检测仪测定OD值。以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。 计算每组鸭用药后不同时间(T14、T28)和停药第14d(P3)血清DHBV-DNA的抑制率。统计学方法
用NDST软件进行统计学处理。结果用平均值士标准差(χ士S)表示，组间差异用t 检验。对家兔肝 性脑病模型的作用 1.2.2.1模型的建立
(1)动物分组将48只新西兰兔随机均分成6组，即空白对照组，模型组、乳果糖 组及供试品高、中、低剂量组，每组8只。(2)造模具体步骤(1)将各组兔禁食6 h后称体质量，仰卧位固定于兔手 术台上，剪去上腹部正中线附近的毛，在上腹正中用普鲁卡因局部浸润麻醉。(2) 从胸骨剑突下沿腹正中线行长约6 8cm的切口，打开腹腔，暴露肝脏，向下压肝，剪断肝与横膈之间的镰状韧带，再将肝叶上翻，钝性分离肝胃韧带，使肝叶完全游离，辨 明肝脏各叶。用粗棉线结扎肝左外叶、左中叶、右中叶和方形叶的根部，结扎的肝叶迅 速变为暗褐色，从结扎上方逐叶剪除(仅留下右外叶和尾状叶)。(3)沿胃幽门向下 找到十二指肠，提出腹腔，用眼科剪在肠壁上剪一小口，将细导尿管插入肠腔约4 cm， 沿插管周围作荷包缝合，收缩荷包结扎固定，将肠管回纳腹腔，检查腹内无出血，关闭 腹腔。(4)向十二指肠插管中注入2.5%复方氯化铵溶液(氯化铵12.5 g和碳酸氢钠7.5 g溶于500 mL 5%葡萄糖注射液中)，每隔5 min向十二指肠插管中注入2.5%复方氯化 铵溶液5mL，导致肠道中氨生成增加并吸收入血，引起血氨迅速升高，直至家兔出现震 颤、全身抽搐、角弓反张等类似HE的症状，则视为建模成功。记录所用的复方氯化铵 溶液的总量，并计算每Ikg体质量的用量，记录各组兔抽搐潜伏期(从给药到出现全身 抽搐的时间)、抽搐持续时间、抽搐次数及存活时间(发生抽搐后存活的时间)。(3)给药与采血于第2次注入复方氯化铵溶液5 min后，由兔耳中央动脉取 血约1 mL以备测定给药前的血氨水平。然后分别口服给药，每日2次，连续给药3d: 空白对照组口服蒸馏水，阳性组口服乳果糖口服溶液1.6g/kg/d，试验组口服高剂量组 115g (生药)/kg/d、中剂量组76g (生药)/kg/d、低剂量组38g (生药)/kg/d。给药3天 后再次经耳动脉取血ImL以备测定血氨水平。(4)血氨的测定应用VITROS 205干式生化分析仪，以干化学法测定给药前 和给药3d后血氨水平。(5)统计学分析实验数据用均数士标准差表示，结果用PEMS 3.1软件进行单 因素方差分析，组间均数间两两比较采用SNK- q检验(Student- Newman- Keuls法)。结果
1.3.1本组合物对鸭乙型肝炎病毒的治疗作用结果表明试验组高、中、低剂量 对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著，与模型组比较差异有显著性意义 (P<0.01)，结果见表1。表1供试品对鸭乙型肝炎病毒感染鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的影响


本发明提供了一种治疗肝性脑病和乙肝的纯中药药物组合物，其原料的重量份组成为:大黄5～50份、刺梨根10～60份、黑豆5～30份、六月雪20～90份、血盆草20～100份、阴行草30～150份、毛冬青5～40份、甘草10～60份，属中药方剂领域。本发明以病因和对症治疗为主，通过清热解毒、利湿、凉血祛瘀、止血、泄热通便之功效，从而达到了抗病毒、凉血、止血、降血氨、泻宿便、减少肠道内毒素吸收、护肝脑、防治肝性脑病和乙肝的作用。